Актуальность. Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов являются наиболее востребованными. Терапевтическая польза от их применения зависит от стандартизации. Для повышения эффективности диагностики и лечения аллергических заболеваний необходимы современные методы оценки специфической (аллергенной) активности лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов с применением стандартных образцов и методов физико-химического анализа.

Цель. Разработка методологических подходов к стандартизации лекарственных препаратов пыльцевых аллергенов для перехода к нормированию специфической активности в единицах аллергенной активности (ЕАА) и приведения качества препаратов в соответствие с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации.

Материалы и методы. Использовали стандартные  образцы  пыльцевых  аллергенов  (АО «НПО «Микроген»), стандарт ВОЗ аллергена из пыльцы тимофеевки посевной, набор стандартов для эксклюзионной хроматографии MW 1350–670000 Da, бычий сывороточный альбумин, специфические IgE-содержащие сыворотки крови от лиц, сенсибилизированных к исследуемому аллергену, меченые антитела к IgE человека, стандартные образцы летучих растворителей для газовой хроматографии. Подтверждение подлинности стандартного образца предприятия аллергенной активности аллергена (СОП ААА) проводили методом вестерн-блота (аллергенные компоненты), содержание общего белка определяли колориметрически (метод Бредфорда). Дополнительно для изучения белковых фракций применяли метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Количество остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов оценивали при помощи газожидкостной хроматографии.

Результаты. Вместо существующей ранее неспецифической характеристики аллергенной активности в единицах белкового азота (Protein Nitrogen Unit, PNU) был разработан  и апробирован новый метод контроля специфической активности в ЕАА на основе конкурентного иммуноферментного анализа (кИФА). Разработана и валидирована методика контроля аллергенной активности in vitro на основе кИФА. Проведены разработка и аттестация 15 первичных СОП ААА с присвоением им аллергенной активности в  EAA/мл по результатам тестирования методом кожных проб in vivo. Выполнен анализ экспериментальных данных с целью установления норм аллергенной активности для номенклатуры пыльцевых аллергенов, выпускаемых АО «НПО «Микроген». Разработаны и валидированы в соответствии с Государственной фармакопеей Российской Федерации физико-химические методы аттестации СОП ААА. Определены условия хроматографического разделения остаточных органических растворителей (ацетона, диэтилового эфира) и параметры пригодности хроматографической системы. Проведена аттестация вторичных СОП ААА методом кИФА по показателю аллергенной активности относительно первичных СОП, что позволило перейти к стандартизации препаратов аллергенов методом in vitro.

Выводы. Разработана методология  стандартизации препаратов  аллергенов  методом кИФА по степени ингибирования иммунологической реакции в сравнении со стандартным образцом. Обоснована целесообразность исключения  показателя  «Содержание  белкового азота» (в единицах белкового азота, PNU) и замены его на показатель «Аллергенная активность» (в ЕАА). Полученные СОП ААА впервые на предприятии были аттестованы в ЕАА. Разработана и валидирована аналитическая методика определения количественного содержания остаточных органических растворителей в препаратах аллергенов с помощью метода газожидкостной хроматографии.

Актуальность. Рациональная фаготерапия — высокоэффективный способ борьбы с бактериальными инфекциями в условиях неуклонно растущей антибиотикорезистентности. Основной лекарственной формой препаратов бактериофагов является раствор для приема внутрь, местного и наружного применения. Однако при пероральном приеме жидких лекарственных форм фаговых препаратов происходит их значительная инактивация за счет кислой среды желудочного сока. С целью устранения негативного влияния кислой среды разработан лекарственный препарат поливалентного бактериофага в форме капсул — Секстафаг® Пиобактериофаг поливалентный.

Цель. Изучение специфической активности и биофармацевтических свойств лекарственного препарата поливалентного бактериофага в капсулированной форме.

Материалы и методы. Объект исследования  —  препарат  поливалентного  бактериофага в капсулированной форме; препарат сравнения — препарат поливалентного  бактериофага в форме раствора. Специфическую активность изучали с использованием метода Аппельмана, количество фаговых частиц — методом Грациа. Исследование кислотонейтрализующей способности проводили путем выдерживания препарата в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты с последующим  определением  специфической активности по методу Аппельмана.  Антифаговый  иммунный  ответ  на  антигены  бактериофага изучали  на  кроликах  породы  Шиншилла,  уровень  иммунного  ответа  детектировали с помощью разработанной иммуноферментной тест-системы. Исследование фармакокинетических параметров проводили на беспородных белых мышах при пероральном введении препарата.

Результаты. Выявлен высокий уровень литической активности исследуемого препарата, который по величине отрицательной степени десятичного разведения составлял 10^-6 в отношении исследуемых микроорганизмов: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas аeruginosa, Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumoniae. Показатель степени всасывания после перорального введения мышам препарата поливалентного  бактериофага  в  капсулированной  форме  был  в  3,1–3,7  раза  выше  в  сравнении с препаратом поливалентного бактериофага в форме раствора. Многократное  пероральное введение исследуемого препарата кроликам в терапевтических дозах не стимулировало образования антифаговых антител. Исследование стабильности препарата показало сохранение высокого уровня литической активности в течение 18 мес.

Выводы. Препарат поливалентного бактериофага в  капсулированной  лекарственной форме обладает высоким антибактериальным действием в отношении исследуемых микроорганизмов, характеризуется высокой степенью всасывания и длительным сохранением литической активности,  а  также  не  вызывает  выработку  антифаговых  антител при пероральном применении, что свидетельствует об эффективности и безопасности разработанного препарата.

Актуальность. Клещевой энцефалит — один из наиболее актуальных для здоровья населения России антропозооноз, контроль над которым требует широкого охвата вакцинопрофилактикой. Масштабная вакцинация невозможна без разработки новых вакцин, например с применением перевиваемой линии клеток Vero, обладающих улучшенным профилем безопасности и эффективности.

Цель. Расширенное изучение ключевых показателей качества новой  вакцины  «ВероКСЭН» против клещевого энцефалита, полученной с использованием  перевиваемой линии клеток Vero.

Материалы и методы. В технологии создания вакцины реализованы современные подходы: накопление производственного штамма вируса клещевого энцефалита № 205 (дальневосточный субтип) в клетках перевиваемой линии Vero; использование для заключительной тонкой очистки вирусного антигена эксклюзионной хроматографии на полимерных сорбентах; введение дополнительных методов контроля. Вакцину «ВероКСЭН» получали способом, описанным в  патенте  на  изобретение  №  2678431.  Контроль  готового  продукта проводили в соответствии с методиками, описанными в Государственной фармакопее Российской Федерации. Для лабораторного изучения  вакцины  и  полупродуктов  на  мышах линии Balb/с  были  разработаны  и  внедрены  оригинальные  новые  методы  контроля, а также применялись: электрофорез в полиакриламидном геле, иммуноферментный анализ, иммуноблот с суммарными антителами против вируса клещевого энцефалита и моноклональными антителами против гликопротеина E,  метод полимеразной цепной  реакции    с обратной транскрипцией, высокоэффективная жидкостная хроматография. При расширенном лабораторном исследовании протективной  активности  использовали  тест-штаммы субтипов «Абсеттаров» (западный), «Софьин» (дальневосточный) и «Корзухин» (сибирский). Оценку инфекционной  активности  вируса  клещевого  энцефалита  проводили  при помощи фармакопейного метода титрования на беспородных мышах. Результаты исследований оценивали при помощи статистических методов анализа с вычислением среднего арифметического и среднеквадратичного отклонения.

Результаты. Изучены ключевые показатели качества новой вакцины против клещевого энцефалита «ВероКСЭН» и ее полупродуктов. Показано, что выбранный режим инактивации снижает инфекционную активность вирусного сбора до недетектируемого уровня через 24 ч, при этом антигенная активность сохраняется на уровне около 100%  от  исходного значения.  Этапы тонкой  очистки, а  также разработанные оригинальные методики  и технологии позволили получить цельновирионную фракцию с чистотой до 98,2% и удалить технологические примеси (ДНК клеток-продуцентов, бычий сывороточный альбумин, формальдегид, бактериальные эндотоксины) до уровней, соответствующих нормативным требованиям. Изучение стабильности вакцины на сроке хранения до  36  мес. подтвердило ее соответствие нормативным показателям.

Выводы. Новая вакцина обладает высокой специфической активностью в  отношении  вируса клещевого энцефалита для штаммов «Абсеттаров», «Софьин» и «Корзухин»: минимальная иммунизирующая доза (МИД₅₀) составила 0,007, 0,00125 и 0,00093 мл соответственно.

Актуальность. Лекарственные препараты на основе иммуноглобулина G (IgG) из плазмы крови человека широко применяются в терапии бактериальных и вирусных инфекций, первичных и вторичных иммунодефицитов, аутоиммунных заболеваний. Снизить риск производственной контаминации сырья различными патогенами, в том числе вирусами, позволяет процесс нанофильтрации. Для повышения вирусной безопасности необходимы исследования по разработке и внедрению дополнительных этапов инактивации и (или) элиминации вирусов.

Цель. Разработка оптимальных условий процесса нанофильтрации, валидация и масштабирование данной стадии для  производства  лекарственного  препарата  иммуноглобулина G человека для внутривенного введения.

Материалы и методы. Раствор IgG из фракции II+III плазмы крови, нанофильтры Planova — 20N и BioEx (Asahi Kasei, Япония), Viresolve Pro (Merck Millipore, США), Virosart — HC и HF (Sartorius, Германия), Pegasus — SV4 и Prime (Pall, США), предфильтры Sartopore из полиэфирсульфона, Virosart MAX (Sartorius,  Германия)  из  полиамида,  EKX-P  (Pall,  Германия) из регенерированной целлюлозы. Лабораторные исследования по валидации вирусной редукции выполняли с модельными тест-вирусами (ВИЧ-1, трансмиссивного гастроэнтерита (коронавируса) свиней, парвовирус свиней,  вирус  энцефаломиокардита  мышей,  вирус бычьей диареи) на базе ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России. Анализ данных по выборке проводили с помощью среднего значения при 95% доверительном интервале.

Результаты. Установлено, что производительность нанофильтрации для всех выбранных комбинаций «предфильтр — нанофильтр» зависит от концентрации IgG в испытуемом растворе. Максимальная пропускная способность и выход продукта составили:  предфильтр (фильтр) ЕКХ-P с нанофильтром Pegasus SV4 —  6300  г/м²  (выход  IgG  более  95%); EKX-P или Sartopore (полиэфирсульфон) с Planova 20N — до 2980 г/м² (выход IgG — практически 100% при условии проведения  процесса  только  при  концентрации  IgG  10  г/л).  Для разных комбинаций фильтров уровень редукции соответствовал критериям приемлемости: ВИЧ-1 —  от  4,00±0,05  до  4,75±0,04  log₁₀;  коронавирус  свиней  —  от  4,30±0,04 до 4,55±0,06 log₁₀; вирус энцефаломиокардита мышей — от 5,38±0,08 до 5,57±0,04 log₁₀; вирус бычьей диареи — более 5,00 log₁₀; парвовирус свиней — от 5,12±0,10 до 5,25±0,08 log₁₀. Статистически достоверного различия в зависимости уровня редукции от марки предфильтров не выявили.

Выводы. Подтверждена эффективность противовирусной нанофильтрации для вирусов  с различными размерами вириона и физико-химическими характеристиками, включая мелкий парвовирус В19: уровень редукции вирусов для всех комбинаций составил более 4 log₁₀, что соответствует критериям приемлемости. Разработанные в лабораторных условиях параметры и соответствующая им длительность нанофильтрации, а также выход целевого продукта для всех комбинаций исследованных фильтров не изменились при масштабировании. Нанофильтрация может служить эффективным и высокопродуктивным инструментом удаления различных типов вирусов, который не влияет на качество продукта и значительно повышает вирусную безопасность биологических препаратов.

Актуальность. Зарубежные лекарственные препараты альбумина человека, зарегистрированные в Российской Федерации, отличаются от отечественных главным образом по составу вспомогательных веществ. Все иностранные препараты альбумина содержат смесь вспомогательных веществ — натрия каприлата и N-ацетил-DL-триптофана; отечественные — только натрия каприлат. Однако стабилизация раствора альбумина натрия каприлатом в высоких концентрациях приводит к ухудшению его лигандсвязывающих свойств. По этой причине, а также для достижения стабильности препаратов при хранении не только при температуре от 2 до 8 °C, но и при комнатной температуре, большинство зарубежных производителей изменили состав препарата альбумина путем снижения содержания натрия каприлата и дополнительного введения N-ацетил-DL-триптофана. В связи с этим актуальным представляется изучение показателей качества разработанного отечественного препарата альбумина человека с измененным стабилизирующим составом, содержащим оба указанных компонента.

Цель. Анализ показателей качества препарата альбумина человека с измененным стабилизирующим составом в сравнении с зарубежными лекарственными средствами.

Материалы и методы. Активной фармацевтической субстанцией для получения препарата альбумина человека с измененным стабилизирующим составом служила плазма крови доноров, соответствующая требованиям Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV изд. (ГФ РФ XIV) ФС.3.3.2.0001.19. Препарат получали методом фракционирования белков плазмы крови. Контроль показателей качества препарата осуществляли в соответствии с требованиями  ФС.3.3.2.0006.18.  Статистическую обработку проводили с помощью программы Microsoft Excel в соответствии с ОФС.1.1.0013.15.

Результаты. Показано соответствие показателей качества исследуемого препарата установленным требованиям  ФС.3.3.2.0006.18. В ходе исследований   установлено,  что изготовленные серии  препарата были прозрачными,  термостабильными, стерильными  и апирогенными; имели низкий уровень активатора прекалликреина — менее 1 МЕ/мл; содержание алюминия было в диапазоне от 30,36±10,39 до  50,22±6,94  мкг/л;  натрий-иона — от 127,44±10,46 до 145,59±7,32 ммоль/л; калий-иона — менее 0,01 ммоль/г; осмолярность — более 240 мОсм/л. Препарат содержал от 1,79±0,06 до 2,24±0,20% примесей других белков  (α- и β-глобулинов); показатель рН был в диапазоне от 6,9 до 7,2;  концентрация полимеров    и агрегатов не превышала 0,5%.

Выводы. По изученным показателям качества препарат альбумина человека  с  измененным стабилизирующим составом был сопоставим с зарубежными аналогами и соответствовал требованиям ГФ РФ XIV и Европейской фармакопеи.

Актуальность. Проблема антибиотикорезистентности микроорганизмов приобрела глобальное общемировое  значение,  что  определяет  необходимость  поиска  альтернативных антибактериальных средств для лечения  инфекционных  заболеваний,  включая  более   широкое   использование  биотехнологических  препаратов  на   основе  бактериофагов и пробиотиков, в том числе метаболитного типа. Совокупность бактериотропных (антимикробных и пробиотических) свойств композиций на основе бактериофагов и метаболитов пробиотических бактерий позволяет предполагать наличие качественно нового, сочетанного антибактериального  действия,  а  также  эффективность  подобных  биопрепаратов в отношении антибиотикорезистентных форм микроорганизмов.

Цель. Исследование свойств комплексного биопрепарата с антибактериальной и пробиотической активностью.

Материалы и методы. Разработанный комплексный биопрепарат включает в себя пробиотик на основе экзометаболитов лактобактерий и комплексный бактериофаг. Оценку антимикробной  активности  комплексного  биопрепарата  проводили  при  помощи  метода Аппельмана, диско-диффузионного метода в отношении газонных культур — гомологичных комплексному бактериофагу (Staphylococcus spp., Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus spp., Enterococcus spp., Salmonella spp., Shigella spp.) и негомологичных (Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Yersinia enterocolitica), а также в тесте ингибирования биолюминесценции генномодифицированного индикаторного штамма Escherichia coli lum+. Использовали штаммы бактерий, полученные за 2019–2022 гг. из бактериологических лабораторий лечебных учреждений Пермского края (микроорганизмы выделены из различного клинического материала и биотопов). Пробиотическую  активность оценивали по стимулирующему действию на модельные микроорганизмы нормофлоры.

Результаты. Комплексный биопрепарат продемонстрировал высокую специфическую антимикробную активность (показатель титра по Аппельману — 10^–6,6±0,01), которая была сопоставима с показателем бактериофага (10^–6,9±0,01), входящего в состав биопрепарата. Исследование диско-диффузионным методом показало, что комплексный биопрепарат обладает более выраженным, чем отдельные его компоненты, антибактериальным действием на все тест-штаммы. Показатель оптической плотности тестовых культур отличался от контрольных значений: для Lactobacillus plantarum 8P-А — превышал в 2 раза, для Bifidobacterium bifidum 1 — в 1,5 раза, что подтверждает предположение о стимулирующем эффекте комплексного биопрепарата в отношении микроорганизмов нормофлоры. Полученные результаты свидетельствуют о совместимости фагового и пробиотического компонентов комплексного биопрепарата, а также о высоком уровне его антимикробной активности.

Выводы. Разработанный комплексный биопрепарат обладает высокой антимикробной активностью (специфической и неспецифической), проявляющейся в подавлении роста бактериальных клеток патогенных культур, не ингибируя при этом нормальную микрофлору.   Новый   комплексный   биопрепарат  позволит  расширить  ассортимент  препаратов  с пробиотическим и антибактериальным действием, в том числе в отношении антибиотикорезистентных форм микроорганизмов.

Актуальность. Перспективные средства для коррекции дисбиоза — метабиотики, препараты на основе метаболитов пробиотических микроорганизмов. В опытах in vitro бактерии Bacillus subtilis (штаммы 3H и 1719) в процессе культивирования синтезируют метаболиты, обладающие пробиотическими свойствами. Представляет интерес исследование влияния данных метаболитов in vivo на мукозную микробиоту толстого кишечника в условиях экспериментального дисбиоза (у мышей) и оценка возможности их применения в качестве метабиотиков в медицине.

Цель. Изучить пробиотическую активность метаболитов бактерий B. subtilis 3H и B. subtilis 1719 в сравнении с показателями коммерческого метабиотика при антибиотик-ассоциированном дисбиозе у мышей.

Материалы и методы. Работа проводилась на мышах линии BALB/c, массой 18–20 г. Экспериментальный дисбиоз моделировали при помощи внутрибрюшинного введения гентамицина. Для коррекции развившихся нарушений животным опытных групп в течение 21  сут  интрагастрально вводили  метаболиты  штаммов B. subtilis, иммобилизованные на сорбенте, а в группе сравнения — коммерческий метабиотик, содержащий метаболиты штамма B. subtilis ВКПМ № В-2335(3)3. Мукозную микробиоту толстого кишечника мышей качественно и количественно оценивали посредством бактериологического метода. Выросшие колонии микроорганизмов идентифицировали при помощи масс-спектрометрии MALDI-TOF.

Результаты. Экспериментальный антибиотик-ассоциированный дисбиоз толстого  кишечника мышей проявился в снижении количества доминантной микробиоты и росте условно-патогенных микроорганизмов. Введение исследуемых метаболитов в течение 7 сут привело во всех опытных группах к нормализации содержания бактерий Lactobacillus; наилучшие показатели выявлены у животных, которым вводили штамм B. subtilis 3H, видовой состав лактобацилл соответствовал интактным мышам. Восстановление содержания лактозопозитивной кишечной палочки (E. coli lac+) достигло 100%. После 21 сут  применения метаболитов B. subtilis 3H зафиксирована элиминация бактерий Rodentibacter spp., Aerococcus spp., грибов Trichosporon spp., Kazachstania spp. Метаболиты штамма B. subtilis 1719 способствовали элиминации  грибов  Trichosporon spp.,  однако  не  влияли   на   количество Kazachstania spp. При введении коммерческого метабиотика выявлена элиминация Enterococcus spp., Kazachstania spp. и  Trichosporon spp.,  при  этом не  отмечено воздействия на Rodentibacter spp. и Aerococcus spp.

Выводы. Метаболиты штаммов B. subtilis 3H и 1719 способствовали восстановлению качественного и количественного состава микробиоценоза толстого кишечника в условиях антибиотик-ассоциированного дисбиоза у мышей. Выявленные различия в процессах нормализации микробиоценоза в разных группах животных указывают на вариативность специфической активности бактерий B. subtilis.

Актуальность. Оценку содержания примеси иммуноглобулинов класса А (IgA) в парентеральных лекарственных формах препаратов иммуноглобулинов человека необходимо проводить в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации  (ГФ  РФ)  методами  кинетической  нефелометрии,  радиальной  иммунодиффузии и иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием стандартного образца. Международный стандартный образец (МСО) содержания IgA аттестован с использованием весового метода и метода радиальной иммунодиффузии. В настоящее время стандартный образец содержания IgA в препаратах иммуноглобулинов человека, аттестованный с использованием трех фармакопейных методов, отсутствует, что не позволяет сопоставить результаты, полученные разными методами, и может стать причиной  некорректной оценки содержания нежелательной примеси IgA.

Цель. Определить порядок разработки, аттестации и применения фармакопейного стандартного образца (ФСО) содержания IgA в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека.

Материалы и методы. Исследуемые образцы кандидата в ФСО содержания IgA изготавливали с использованием субстанции «Плазма человека для фракционирования». Определение содержания IgA проводили методами кинетической нефелометрии, радиальной иммунодиффузии  и  ИФА  с  использованием  коммерчески  доступных  наборов  реагентов  и МСО. Определение содержания примеси IgA проводили в образцах коммерчески доступных препаратов иммуноглобулинов человека различных производителей. Использовали методы описательной статистики и дисперсионного анализа с применением программ Microsoft Excel и Statistica 10.0.

Результаты. Разработан   ФСО   с    аттестованной    характеристикой    содержания    IgA: 1,98 мг/мл (расширенная неопределенность 0,44 мг/мл; коэффициент охвата k=2; уровень доверия 95%) — для количественного определения  содержания  примеси  IgA  в  препаратах иммуноглобулинов человека методами радиальной иммунодиффузии и  ИФА;  от  1,31  до 2,64 мг/мл (расширенная неопределенность 0,67 мг/мл; коэффициент охвата k=3; уровень доверия 99%) — для  внутрилабораторного  контроля  качества  аналитических  работ по оценке содержания примеси IgA методами кинетической нефелометрии, радиальной иммунодиффузии и ИФА.

Выводы. Разработанный ФСО содержания IgА включен в реестр ФСО ГФ РФ под названием «Стандартный образец содержания иммуноглобулинов класса А (IgA)» (реестровый номер ФСО 3.1.00454) и предназначен для стандартизации методов оценки содержания примеси IgA в парентеральных лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека.

Актуальность. Исследование неопределенности результатов измерений, проводимых испытательными лабораториями, предусмотрено ГОСТ ISO/IEC 17025-2019. Оценивание неопределенности методик испытаний биологических лекарственных препаратов представляет собой сложную задачу,  требующую особого подхода и  значительных  временных и трудовых ресурсов. Актуальной является оценка неопределенности измерений на примере методики определения потери в массе при высушивании биологических лекарственных препаратов, поскольку в процессе ее реализации анализируется именно результат измерения (взвешивания) физической величины — массы.

Цель. Оценить неопределенность результатов измерений при  определении потери в  массе при высушивании биологических лекарственных препаратов.

Материалы и методы. Субстанция-порошок для изготовления бифидосодержащего препарата (исследуемый образец). Испытание проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации ОФС.1.2.1.0010.15. Статистическую обработку результатов выполняли с использованием программы Microsoft Exсel. Расчет неопределенности проводили  двумя   способами:   при   помощи   подхода   «снизу   вверх» и с использованием доверительного интервала.

Результаты. Идентифицированы составляющие неопределенности, влияющие  на  результат измерения потери в массе при высушивании. Расширенная неопределенность, рассчитанная с использованием подхода «снизу вверх»,  составила  0,34%  (коэффициент  охвата k=2, уровень доверия приблизительно 95%), при этом наибольший вклад вносит неопределенность измерения массы бюкса после высушивания образца — 0,147%; наименьший вклад — неопределенность измерения массы пустого бюкса — 0,003%. Неопределенность двух параллельных измерений, рассчитанная с помощью доверительного интервала, составила 0,32%.

Выводы. Два подхода к расчету неопределенности результатов  измерений  потери  в  массе при высушивании дают сопоставимые результаты. Анализ бюджета неопределенности выявил, что наибольший вклад в результат испытания вносит неопределенность  измерения массы бюкса после высушивания образца, что требует тщательного контроля условий пробоподготовки. Для оценки неопределенности может  быть использован способ  расчета с помощью доверительного интервала. Методология анализа  методики  потери  в  массе при  высушивании с  точки зрения  выявления факторов, влияющих на  результат  испытания, и представленные способы расчета неопределенности могут быть полезны специалистам испытательных лабораторий.

Актуальность. Отсутствие гемотрансмиссивных вирусов в лекарственных препаратах, полученных из плазмы крови человека, должно быть обеспечено контролем исходного сырья и технологией производства.

Цель. Изучение критериев пригодности системы методики при оценке вирусной безопасности индивидуальных единиц субстанции «Плазма человека  для фракционирования» в отношении содержания нуклеиновых кислот гемотрансмиссивных вирусов с учетом требований Европейской фармакопеи.

Материалы и методы. Индивидуальные единицы субстанции «Плазма человека для фракционирования» (далее — плазма); международные стандартные образцы (МСО) РНК  вируса иммунодефицита человека, вирусов  гепатитов А  и  С  (ВГА  и  ВГС),  ДНК  вируса  гепатита В (ВГВ) и парвовируса B19; наборы реагентов для выявления нуклеиновых кислот указанных вирусов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Результаты. В исследованных образцах плазмы не выявлена РНК  ВГС;  ДНК  парвовируса В19 обнаружена в одном образце плазмы из восьми, концентрация не превышала 10⁴ МЕ/мл. Использованные наборы реагентов в трех испытаниях соответствующих МСО позволили выявить РНК ВГС в концентрации  10² МЕ/мл,  ДНК  парвовируса  В19  (генотип М1) — 10⁴ МЕ/мл. Результаты дополнительных испытаний двух образцов плазмы с учетом требований Европейской фармакопеи при определении РНК ВГС и ДНК парвовируса В19 показали, что новая серия набора реагентов выявляла 10² МЕ/мл МСО РНК ВГС только в одном из трех испытаний, что не соответствует заявленной чувствительности набора реагентов. В одном из двух образцов плазмы РНК ВГС не была обнаружена ни в одном испытании с добавлением МСО РНК ВГС до концентрации 10² и 10³ МЕ/мл, возможно, из-за ингибирующих свойств плазмы. В отношении ДНК парвовируса В19 чувствительность наборов реагентов соответствовала заявленной, ингибирующие свойства исследованных образцов плазмы не выявлены.

Выводы. При применении метода ПЦР для оценки вирусной безопасности плазмы, предназначенной для производства препаратов крови, целесообразно использование контрольных образцов, охарактеризованных в МЕ/мл. Для установления критериев пригодности системы методики с их применением необходима разработка соответствующих фармакопейных стандартных образцов.