Вспомогательные вещества в составе биологических лекарственных препаратов: функциональная классификация, проблемы стабильности, аналитические подходы к определению

ВВЕДЕНИЕ. Потенциальное нежелательное действие вспомогательных веществ (ВВ) биологических лекарственных препаратов (БЛП) и сложности их аналитического контроля представляют значительную проблему при разработке и экспертизе лекарственных средств. Современные аналитические методы и инновационные подходы к подбору ВВ позволяют минимизировать риски и усовершенствовать контроль качества БЛП.

ЦЕЛЬ. Анализ современных методов количественного определения вспомогательных веществ в биологических лекарственных препаратах и оценка перспектив их применения для совершенствования лабораторной экспертизы при регистрации и подтверждения соответствия качества препаратов при вводе в гражданский оборот.

ОБСУЖДЕНИЕ. Поиск литературы проводился с использованием баз данных SciFinder, PubMed, eLIBRARY.RU. Представлены данные о функциональной классификации ВВ. Проведен анализ потенциального нежелательного действия ВВ: риск сахарозной нефропатии при применении внутривенных препаратов иммуноглобулинов, содержащих сахарозу; гипогликемия, изменение метаболизма аминокислот, снижение синтеза нуклеиновых кислот и угнетение функциональной активности тромбоцитов вследствие  высокой  концентрации натрия каприлата в препаратах альбумина. Важным аспектом оценки безопасности использования ВВ  является  изучение  продуктов  их  деградации.  Представлены  данные о путях решения проблем, связанных с деградацией ВВ, включая снижение содержания или замену ВВ, как в случае с натрия каприлатом, которые многие производители исключают из состава рецептур БЛП. Рассмотрены инновационные подходы к поиску новых адъювантов (MF59, АS01, АS03, AS04, RC-529), совмещающих функции индукторов иммунного ответа и систем доставки. Представлены данные об использовании математического моделирования при выборе состава композиции ВВ. Проведен анализ современных аналитических методов количественного определения ВВ, включая жидкостную и газожидкостную хроматографию, спектрофотометрические методы для количественной оценки наиболее значимых ВВ в БЛП (аминокислоты, полисорбаты, фенол, феноксиэтанол, бензиловый спирт, натрия каприлат). Рассмотрены перспективные методики, такие как эксклюзионная ВЭЖХ для оценки полисорбата 80, HILIC ВЭЖХ для селективного количественного определения аминокислот в составе композиции, гидрофильная ВЭЖХ с рефрактометрическим детектированием и ионообменная ВЭЖХ  с  амперометрическим  детектированием для анализа стабилизаторов углеводной природы (сорбит, маннит, трегалоза, глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза), а также газожидкостная хроматография для идентификации и количественной оценки 2-феноксиэтанола и м-крезола.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Выбор ВВ для БЛП представляет собой комплексную задачу, требующую разработки стратегии контроля не только установленных норм их содержания, но и возможных продуктов деградации. Разработка унифицированных аналитических  методик для количественного определения ВВ является основным направлением для обеспечения качества БЛП на этапах регистрационной экспертизы и ввода в гражданский оборот.

1. Abrantes CG, Duarte D, Reis CP. An overview of pharmaceutical excipients: Safe or not safe? J Pharm Sci. 2016;105(7):2019–26. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2016.03.019

2. Makkad S, Sheikh M, Shende S, Jirvankar P. Pharmaceutical excipients: Functions, selection criteria, and emerging trends. Int J Pharm Investig. 2025;15(2):361–76. https://doi.org/10.5530/ijpi.20251676

3. Тенцова АИ, Терешкина ОИ, Рудакова ИП и др. Современные биофармацевтические аспекты вспомогательных веществ. Фармация. 2012;(7):3–6. EDN: PEWXKP

4. Jena S, Krishna Kumar NS, Aksan A, Suryanarayanan R. Stability of lyophilized albumin formulations: Role of excipient crystallinity and molecular mobility. Int J Pharm. 2019;569:118568. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2019.118568

5. Thakral S, Sonje J, Munjal B, et al. Mannitol as an excipient for lyophilized injectable formulations. J Pharm Sci. 2023;112(1):19–35. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2022.08.029

6. Arakawa T, Tsumoto K, Kita Y, et al. Biotechnology applications of amino acids in protein purification and formulations. Amino Acids. 2007;33(4):587–605. https://doi.org/10.1007/s00726-007-0506-3

7. Stärtzel P. Arginine as an excipient for protein freeze — Drying: A mini review. J Pharm Sci. 2018;107(4):960–7. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2017.11.015

8. Hackl E, Darkwah J, Smith G, Ermolina I. Effect of arginine on the aggregation of protein in freeze-dried formulations containing sugars and polyol: II. BSA reconstitution and aggregation. AAPS PharmSciTech. 2018;19(7):2934–47. https://doi.org/10.1208/s12249-018-1114-0

9. Ionova Y, Wilson L. Biologic excipients: Importance of clinical awareness of inactive ingredients. PLoS One. 2020;15(6):e0235076. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0235076

10. Rao VA, Kim JJ, Patel DS, et al. A comprehensive scientific survey of excipients used in currently marketed, therapeutic biological drug products. Pharm Res. 2020;37(10):200. https://doi.org/10.1007/s11095-020-02919-4

11. Megarry A, Taylor A, Gholami A, et al. Twin-screw granulation and high-shear granulation: The influence of mannitol grade on granule and tablet properties. Int J Pharm. 2020;590:119890. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2020.119890

12. Liu J, Klinzing GR, Nie H. Efect of material properties and variability of mannitol on tablet formulation development. Pharm Res. 2023;40(8):2071–85. https://doi.org/10.1007/s11095-023-03577-y

13. Chapman SA, Gilkerson KL, Davin TD, Pritzker MR. Acute renal failure and intravenous immune globulin: occurs with sucrose-stabilized, but not with D-sorbitol-stabilized, formulation. Ann Pharmacother. 2004;38(12):2059–67. https://doi.org/10.1345/aph.1E040

14. Zhang R, Szerlip HM. Reemergence of sucrose nephropathy: acute renal failure caused by high-dose intravenous immune globulin therapy. South Med J. 2000;93(9):901–4.

15. Kulkarni SS, Suryanarayanan R, Rinella JV Jr, Bogner RH. Mechanisms by which crystalline mannitol improves the reconstitution time of high concentration lyophilized protein formulations. Eur J Pharm Biopharm. 2018;131:70–81. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2018.07.022

16. Li J, Chen J, An L, et al. Polyol and sugar osmolytes can shorten protein hydrogen bonds to modulate function. Commun Biol. 2020;3:528. https://doi.org/10.1038/s42003-020-01260-1

17. Fraise AP, Maillard JY, Sattar SA, eds. Russell, Hugo & Ayliffe’s: Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization. 5th ed. Chichester: Wiley–Blackwell; 2013. https://doi.org/10.1002/9781118425831

18. Stroppel L, Schultz-Fademrecht T, Cebulla M, et al. Antimicrobial preservatives for protein and peptide formulations: An overview. Pharmaceutics. 2023;15(2):563. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics15020563

19. Xie J, Ottaviani G, Sun K, et al. Potential confounding effects of benzyl alcohol as a formulation excipient support the elimination of the abnormal toxicity test from pharmacopoeias. Regul Toxicol Pharmacol. 2015;73(2):509–14. https://doi.org/10.1016/j.yrtph.2015.09.033

20. Bis RL, Singh SM, Cabello-Villegas J, Mallela KMG. Role of benzyl alcohol in the unfolding and aggregation of interferon α-2a. J Pharm Sci. 2014;104(2):407–15. https://doi.org/10.1002/jps.24105

21. Zhang Y, Roy S, Jones LS, et al. Mechanism for benzyl alcohol-induced aggregation of recombinant human interleukin-1-receptor antagonist in aqueous solution. J Pharm Sci. 2004;93(12):3076–89. https://doi.org/10.1002/jps.2019

22. Bis RL, Mallela KM. Antimicrobial preservatives induce aggregation of interferon alpha-2a: The order in which preservatives induce protein aggregation is independent of the protein. Int J Pharm. 2014;472(1–2):356–61. https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2014.06.044

23. Arora J, Joshi SB, Middaugh CR, et al. Correlating the effects of antimicrobial preservatives on conformational stability, aggregation propensity, and backbone flexibility of an IgG1 mAb. J Pharm Sci. 2017;106(6):1508–18. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2017.02.007

24. Jiang G, Joshi SB, Peek LJ, et al. Anthrax vaccine powder formulations for nasal mucosal delivery. J Pharm Sci. 2006;95(1):80–96. https://doi.org/10.1002/jps.20484

25. Alsenaidy MA, Kim JH, Majumdar R, et al. High-throughput biophysical analysis and data visualization of conformational stability of an IgG1 monoclonal antibody after deglycosylation. J Pharm Sci. 2013;102(11): 3942–56. https://doi.org/10.1002/jps.23730

26. Telikepalli SN, Kumru OS, Kalonia C, et al. Structural characterization of IgG1 mAb aggregates and particles generated under various stress conditions. J Pharm Sci. 2014;103(3):796–809. https://doi.org/10.1002/jps.23839

27. Goldberg DS, Lewus RA, Esfandiary R, et al. Utility of high throughput screening techniques to predict stability of monoclonal antibody formulations during early stage development. J Pharm Sci. 2017;106(8):1971–7. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2017.04.039

28. Yoshizawa S, Oki S, Arakawa T, Shiraki K. Trimethylamine N-oxide (TMAO) is a counteracting solute of benzyl alcohol for multi-dose formulation of immunoglobulin. Int J Biol Macromol. 2018;107(Pt A):984–9. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.09.072

29. Caringal RT, Hickey JM, Sharma N, et al. A combined LC-MS and immunoassay approach to characterize preservative-induced destabilization of human papillomavirus virus-like particles adsorbed to an aluminum-salt adjuvant. Vaccines (Basel). 2024;12(6):580. https://doi.org/10.3390/vaccines12060580

30. Johnston A, Uren E, Johnstone D, Wu J. Low pH, caprylate incubation as a second viral inactivation step in the manufacture of albumin. Parametric and validation studies. Biologicals. 2003;31(3):213–21. https://doi.org/10.1016/s1045-1056(03)00062-9

31. Ohbo M, Katoh K, Sasaki Y. Effects of saturated fatty acids on amylase release from exocrine pancreatic segments of sheep, rats, hamsters, field voles and mice. J Comp Physiol B. 1996;166(5):305–9. https://doi.org/10.1007/BF02439916

32. Hillgartner FB, Charron T. Arachidonate and medium-chain fatty acids inhibit transcription of the acetyl-CoA carboxylase gene in hepatocytes in culture. J Lipid Res. 1997;38(12):2548–57.

33. Томилин МВ, Короткова ТВ, Логинов ПА. Сравнительный анализ показателей качества лекарственного препарата альбумина человека с измененным стабилизирующим составом. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023;23(3–1):411–21. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-3-1-411-421

34. Grabarek AD, Bozic U, Rousel J, et al. What makes polysorbate functional? Impact of polysorbate 80 grade and quality on IgG stability during mechanical stress. J Pharm Sci. 2020;109(1):871–80. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2019.10.015

35. Chen D, Luo W, Hoffman J, et al. Insights into virus inactivation by polysorbate 80 in the absence of solvent. Biotechnol Prog. 2020;36(3):e2953. https://doi.org/10.1002/btpr.2953

36. Tomlinson A, Demeule B, Lin B, Yadav S. Polysorbate 20 degradation in biopharmaceutical formulations: quantification of free fatty acids, characterization of particulates, and insights into the degradation mechanism. Mol Pharm. 2015;12(11):3805–15. https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.5b00311

37. Jones MT, Mahler HC, Yadav S, et al. Considerations for the use of polysorbates in biopharmaceuticals. Pharm Res. 2018;35(8):148. https://doi.org/10.1007/s11095-018-2430-5

38. Dixit N, Salamat-Miller N, Salinas PA, Taylor KD. Residual host cell protein promotes polysorbate 20 degradation in a sulfatase drug product leading to free fatty acid particles. J Pharm Sci. 2016;105(5):1657–66. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2016.02.029

39. Hall T, Sandefur SL, Frye CC, et al. Polysorbates 20 and 80 degradation by group XV lysosomal phospholipase A2 isomer X1 in monoclonal antibody formulations. J Pharm Sci. 2016;105(5);1633–42. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2016.02.022

40. Sun MF, Liao JN, Jing ZY, et al. Effects of polyol excipient stability during storage and use on the quality of biopharmaceutical formulations. J Pharm Anal. 2022;12(5):774–82. https://doi.org/10.1016/j.jpha.2022.03.003

41. Del Giudice G, Rappuoli R, Didierlaurent AM. Correlates of adjuvanticity: A review on adjuvants in licensed vaccines. Semin Immunol. 2018;39:14–21. https://doi.org/10.1016/j.smim.2018.05.001

42. O’Hagan DT, Friedland LR, Hanon E, Didierlaurent AM. Towards an evidence based approach for the development of adjuvanted vaccines. Curr Opin Immunol. 2017;47:93–102. https://doi.org/10.1016/j.coi.2017.07.010

43. Ko EJ, Kang SM. Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines. Hum Vaccin Immunother. 2018;14(12):3041–5. https://doi.org/10.1080/21645515.2018.1495301

44. Didierlaurent AM, Laupèze B, Di Pasquale A, et al. Adjuvant system AS01: helping to overcome the challenges of modern vaccines. Expert Rev Vaccines. 2016;16(1):55–63. https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1213632

45. Del Giudice G, Rappuoli R. Inactivated and adjuvanted influenza vaccines. Curr Top Microbiol Immunol. 2015;386:151–80. https://doi.org/10.1007/82_2014_406

46. Roman F, Clément F, Dewé W, et al. Effect on cellular and humoral immune responses of the AS03 adjuvant system in an A/H1N1/2009 influenza virus vaccine administered to adults during two randomized controlled trials. Clin Vaccine Immunol. 2011;18(5):835–43. https://doi.org/10.1128/CVI.00480-10

47. Караулов АВ, Быков АС, Волкова НВ. Обзор исследований вакцин семейства Гриппол и развития современных адъювантов. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2019;18(4):101–19. https://doi.org/10.31631/2073-3046-2019-18-4-101-119

48. Никифорова АН, Бушменков ДС, Меркулов ВА, Степанов НН. Результаты изучения иммуногенности инактивированной сезонной гриппозной вакцины с адъювантом «Совидон™». Врач–Провизор–Пациент. 2011;(1):М8.

49. Шмаров ММ, Алексеева СВ, Довженко НА и др. Безопасность, реактогенность и иммуногенность векторной вакцины против гриппа А: открытое клиническое исследование I фазы. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2025;25(1):7–21. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-1-7-21

50. Elkashif A, Alhashimi M, Sayedahmed EE, et al. Adenoviral vector-based platforms for developing effective vaccines to combat respiratory viral infections. Clin Transl Immunology. 2021;10(10):e1345. https://doi.org/10.1002/cti2.1345

51. Muravyeva A, Smirnikhina S. Strategies for modifying adenoviral vectors for gene therapy. Int J Mol Sci. 2024;25(22):12461. https://doi.org/10.3390/ijms252212461

52. Ramachandran S, Satapathy SR, Dutta T. Delivery strategies for mRNA vaccines. Pharmaceut Med. 2022;36(1):11–20. https://doi.org/10.1007/s40290-021-00417-5

53. Adamo M, Dick LW Jr, Qiu D, et al. A simple reversed phase high-performance liquid chromatography method for polysorbate 80 quantitation in monoclonal antibody drug products. J. Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2010;878(21):1865–70. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2010.04.039

54. Ilko D, Braun A, Germershaus O, et al. Fatty acid composition analysis in polysorbate 80 with high performance liquid chromatography coupled to charged aerosol detection. Eur J Pharm Biopharm. 2015;94:569–74. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2014.11.018

55. Christiansen A, Backensfeld T, Kühn S, Weitschies W. Stability of the non-ionic surfactant polysorbate 80 investigated by HPLC-MS and charged aerosol detector. Pharmazie. 2011;66(9):666–71. PMID: 22026121

56. Puschmann J, Evers DH, Müller-Goymann CC, Herbig ME. Development of a design of experiments optimized method for quantification of polysorbate 80 based on oleic acid using UHPLC-MS. J Chromatogr A. 2019;1599:136–43. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.04.015

57. Shende N, Karale A, Bhagade S, et al. Evaluation of a sensitive GC–MS method to detect polysorbate 80 in vaccine preparation. J Pharm Biomed Anal. 2020;183:113126. https://doi.org/10.1016/j.jpba.2020.113126

58. Zhang R, Wang Y, Tan L, et al. Analysis of polysorbate 80 and its related compounds by RP-HPLC with ELSD and MS detection. J Сhromatogr Sci. 2012;50(7):598–607. https://doi.org/10.1093/chromsci/bms035

59. Tania TH, Moore JM, Patapoff TW. Single step method for the accurate concentration determination of polysorbate 80. J Chromatogr A. 1997;786(1):99–106. https://doi.org/10.1016/S0021-9673(97)00540-2

60. Nair LM, Stephens NV, Vincent S, et al. Determination of polysorbate 80 in parenteral formulations by high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering detection. J Chromatogr A. 2003;1012(1):81–6. https://doi.org/10.1016/S0021-9673(03)01105-1

61. Shi S, Chen Z, Rizzo JM, et al. A highly sensitive method for the quantitation of polysorbate 20 and 80 to study the compatibility between polysorbates and m-cresol in the peptide formulation. J Anal Bioanal Tech. 2015;6(3):1–8. https://doi.org/10.4172/2155-9872.1000245

62. Fekete S, Ganzler K, Fekete J. Fast and sensitive determination of polysorbate 80 in solutions containing proteins. J Pharm Biomed Anal. 2010;52(5):672–9. https://doi.org/10.1016/j.jpba.2010.02.035

63. Pan J, Ji Y, Du Z, Zhang J. Rapid characterization of commercial polysorbate 80 by ultra-high performance supercritical fluid chromatography combined with quadrupole time-of-flight mass spectrometry. J Chromatogr A. 2016;1465:190–6. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2016.08.051

64. Kim J, Qiu J. Quantitation of low concentrations of polysorbates in high protein concentration formulations by solid phase extraction and cobalt-thiocyanate derivatization. Anal Chim Acta. 2014;806:144–51. https://doi.org/10.1016/j.aca.2013.11.005

65. Savjani N, Babcock E, Khor HK, Raghani A. Use of ferric thiocyanate derivatization for quantification of polysorbate 80 in high concentration protein formulations. Talanta. 2014;130:542–6. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2014.07.052

66. McKean DL, Pesce AJ, Koo W. Analysis of polysorbate and its polyoxyethylated metabolite. Anal Biochim. 1987;161(2):348–51. https://doi.org/10.1016/0003-2697(87)90461-1

67. Zheng S, Smith P, Burton L, Adams ML. Sensitive fluorescence-based method for the rapid determination of polysorbate-80 content in therapeutic monoclonal antibody products. Pharm Dev Technol. 2015;20(7):872–6. https://doi.org/10.3109/10837450.2014.930490

68. Berridge BJ, Chao WR, Peters JH. Analysis of plasma and urinary amino acids by ion-exchange column chromatography. Am J Clin Nutr. 1971;24(8):934–9. https://doi.org/10.1093/ajcn/24.8.934

69. Fekkes D, van Dalen A, Edelman M, Voskuilen A. Validation of the determination of amino acids in plasma by high-performance liquid chromatography using automated pre-column derivatization with o-phtaldialdehyde. J Chromatogr B Biomed Appl. 1995;669(2):177–86. https://doi.org/10.1016/0378-4347(95)00111-U

70. Fekkes D. State-of-the-art of high-performance liquid chromatographic analysis of amino acids in physiological samples. J Chromatogr B Biomed Appl. 1996;682(1):3–22. https://doi.org/10.1016/0378-4347(96)00057-6

71. Dai Z, Wu Z, Jia S, Wu G. Analysis of amino acid composition in proteins of animal tissues and foods as pre-column o-phthaldialdehyde derivatives by HPLC with fluorescence detection. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2014;964:116–27. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2014.03.025

72. Cohen SA. Amino acid analysis using precolumn derivatization with 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate. Methods Mol Biol. 2000;159:39–47. https://doi.org/10.1385/1-59259-047-0:039

73. Ichihara K, Kohsaka C, Yamamoto Y. Determination of proteinaceous free amino acids by gas chromatography. Anal Biochem. 2021;633:114423. https://doi.org/10.1016/j.ab.2021.114423

74. Desmons A, Thioulouse E, Hautem JY, et al. Direct liquid chromatography tandem mass spectrometry analysis of amino acids in human plasma. J Chromatogr A. 2020:1622:461135. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2020.461135

75. Kaspar H, Dettmer K, Chan Q, et al. Urinary amino acid analysis: a comparison of iTRAQ-LC-MS/MS, GC-MS, and amino acid analyzer. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2009;877(20–21):1838–46. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2009.05.019

76. Mahgoub S. Validated RP-HPLC method for quantitative determination of tolfenamic acid and benzyl alcohol in a veterinary pharmaceutical preparation. Austin Chromatogr. 2017;4(1):1046.

77. Čudina OA, Čomor MI, Janković I.A. Simultaneous determination of bifonazole and benzyl alcohol in pharmaceutical formulations by reverse-phase HPLC. Chroma. 2005;61:415–8. https://doi.org/10.1365/s10337-005-0524-9

78. Yu MW, Finlayson JS, Quantitative determination of the stabilizers octanoic acid and N-Acetyl-DL-tryptophan in human albumin products. J Pharm Sci. 1984;73(1):82–6. https://doi.org/10.1002/jps.2600730122

79. Dengler T, Kellner S, Fürst G. Quantitative determination of sodium-octanoate in human serum albumin preparations. Infusionstherapie. 1988;15(6):273–4. https://doi.org/10.1159/000222305

80. Jiang CL, Wang LN, Han JH, Ye J. Detection of sodium caprylate in human serum albumin by precolumn derivation reversed phase high performance liquid chromatography. Chinese J Anal Сhem. 2010;38(3):425–8. https://doi.org/10.3724/SP.J.1096.2010.00425

81. Athavale M, Fernandes A, Kaundinya J, Daftary G. Validation of a simple, rapid and cost effective method for the estimation of caprylic acid and sodium caprylate from biological products using NEFA-C kit. Biologicals. 2010;38(2):321–4. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2009.10.001

82. Yang H, Fei C, Wang S, et al. Validation of an HPLC-CAD method for measuring the lipid content of novel LNP-encapsulated COVID-19 mRNA vaccines. J Virol Methods. 2024;330:115040. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2024.115040

83. Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Разработка методики количественного определения полисорбата 80 в биологических лекарственных препаратах с помощью эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Химико-фармацевтический журнал. 2024;57(12):59–64. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2023-57-12-59-64

84. Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Определение полисорбата 80 в биологических лекарственных препаратах. Патент Российской Федерации № 2812788; 2024. EDN: VMQXVZ

85. Rounova О, Demin P, Korotkov M, et al. Development of a hydrophilic interaction high-performance liquid chromatography method for the determination of glycine in formulations of therapeutic immunoglobulins. Anal Bioanal Chem. 2018;410(26):6935–42. https://doi.org/10.1007/s00216-018-1297-y

86. Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Разработка условий прямого количественного определения аминокислот в биологических лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии гидрофильного взаимодействия. Химико-фармацевтический журнал. 2021;55(6):53–8. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2021-55-6-53-58

87. Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Способ количественного определения глицина в биологических лекарственных препаратах методом гидрофильной выскоэффективной жидкостной хроматографии. Патент Российской Федерации № 2700831; 2019. EDN: FQWVES

88. Минеро АС, Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Разработка методики ионообменной ВЭЖХ для количественного определения стабилизаторов углеводной природы в биологических лекарственных препаратах. Химико-фармацевтический журнал. 2023:57(4):59–64. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2023-57-4-59-64

89. Минеро АС, Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Разработка методики количественного определения стабилизаторов углеводной природы в биологических лекарственных препаратах на основе метода ВЭЖХ с рефрактометрическим детектированием. Химикофармацевтический журнал. 2024;58(3):54–9. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2024-58-3-54-59

90. Минеро АС, Рунова ОБ, Коротков МГ, Устинникова ОБ. Определение стабилизаторов углеводной природы в биологически активных препаратах. Патент Российская Федерация № 2816030; 2024. EDN: LWHOTF

91. Колесникова ОН, Рунова ОБ, Устинникова ОБ. Разработка и валидация методики количественного определения фенола методом газожидкостной хроматографии в биологических лекарственных препаратах. Химикофармацевтический журнал. 2018;52(5):60–4. https://doi.org/10.30906/0023-1134-2018-52-5-60-64 https://doi.org/10.1007/s11094-018-1843-0

92. Колесникова ОН, Устинникова ОБ, Рунова ОБ. Способ количественного определения фенола методом газожидкостной хроматографии в биологических лекарственных препаратах. Патент Российская Федерация № 2693518; 2019. EDN: CMEFUS