Защитная эффективность комбинированного препарата моноклональных антител докаравимаба и миромавимаба в отношении классического вируса бешенства: доклиническое исследование на мышах BALB/с

ВВЕДЕНИЕ

По данным пострегистрационного мониторинга при использовании гетерологичного иммуноглобулина из сыворотки крови лошади для постэкспозиционной профилактики (ПЭП) бешенства могут наблюдаться поствакцинальные осложнения [1–4]. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рекомендует использовать препараты на основе моноклональных антител (МкАТ) как безопасные и эффективные средства для ПЭП бешенства¹. За рубежом зарегистрированы три таких препарата, используемые в Индии и Китае [5–10]. В настоящее время отсутствуют данные о производстве и применении препаратов российского производства на основе МкАТ. В связи с этим актуальным является исследование эффективности зарубежных препаратов на основе МкАТ против различных штаммов вируса бешенства, циркулирующих на территории Российской Федерации.

Одним из новых препаратов на основе МкАТ против бешенства является Twinrab^ТМ (docaravimab and miromavimab), разработанный компанией Crucell (Нидерланды) и исследовательским центром Zydus (Индия). Препарат лицензирован в Индии в 2019 г. и представляет собой комбинацию двух МкАТ, продуцируемых гибридомами M777-16-3 и 62–71-3. Данные гибридомы созданы на основе В-клеток мышей, иммунизированных внутрибрюшинно антигеном вируса бешенства вакцинного штамма ERA. МкАТ способны связываться с антигенными сайтами II и III гликопротеина вируса. Связывание с двумя различными антигенными сайтами обеспечивает эффективную защиту, в том числе против изолятов возбудителя с мутационными изменениями [7]. Результаты экспериментальных исследований на модели хомяка показали, что в течение 19 сут наблюдения при одинаковой дозе Twinrab^ТМ не уступал по эффективности антирабическому иммуноглобулину из сыворотки крови человека (HRIG) (Кamrab, Кamada Ltd., Израиль). В клинических исследованиях I и II фаз установлено, что Twinrab^ТМ является безопасным и хорошо переносится, в том числе в дозе 40 МЕ/кг в сочетании с вакциной против бешенства (Vaxirab N, Zydus Cadila, Индия). В клинических исследованиях III фазы показано, что Twinrab^ТМ (40 МЕ/кг) не уступает по эффективности HRIG (20 МЕ/кг) и в сочетании с вакциной против бешенства обеспечивает защиту от этого заболевания [9][11][12].

В связи с изложенными данными представляется важным изучение протективных свойств комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба в опытах на животных, зараженных актуальными для Российской Федерации уличными штаммами вируса бешенства.

Цель работы — исследование защитной эффективности комбинированного препарата антирабических МкАТ докаравимаба и миромавимаба в отношении актуальных для Российской Федерации штаммов классического вируса бешенства в эксперименте на мышах BALB/с.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалы

Вирус. Использовали уличные штаммы классического вируса бешенства: 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020 и фиксированный штамм CVS (Challenge virus standard) из Государственной коллекции ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (Московская область, Сергиев Посад-6). История пассирования штаммов на беспородных белых мышах (масса 6–8 г): 777-М и CVS — один пассаж через головной мозг мышей; Россия/Самара/2018 и RABV/Russia/SP48SolMak/2020 — два пассажа через головной мозг мышей.

Исследуемые препараты. Тестируемый препарат: комбинированный препарат антирабических МкАТ докаравимаба и миромавимаба («Кадила Хелткейр Лтд.», Индия). Препарат сравнения: Ребинолин (иммуноглобулин антирабический; «Камада Лтд», Kibbutz Beit Kama, M.P., Израиль), зарегистрированный в Государственном реестре лекарственных средств². Плацебо: натрия хлорид (ООО «Гротекс», Россия).

Все препараты вводили однократно внутримышечно (в/м) в среднюю часть наружной поверхности левой бедренной мышцы мыши (место введения вируса бешенства) через 6 или 24 ч после инфицирования. Способ применения аналогичен используемому при ПЭП бешенства у человека. Объем введения всех препаратов составлял 0,05 см³, что не превышает максимально допустимый объем для в/м инъекции мышам.

Расчет доз проводили с учетом метаболического коэффициента согласно руководству Управления по контролю за качеством продуктов питания и лекарственных средств (Food and Drug Administration, FDA)³.

Для комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба рекомендуемая доза для человека составляет 40 МЕ/кг; при средней массе 60 кг — 2400 МЕ на человека. Пересчетная доза для мышей составила 40×37/3=493 МЕ/кг. При средней массе тела мыши 14 г доза составила 7 МЕ/мышь, а с учетом коэффициента запаса (×1,4) — 10 МЕ/мышь.

Для препарата Ребинолин⁴ рекомендуемая доза для человека составляет 20 МЕ/кг; при средней массе 60 кг — 1200 МЕ на человека. Пересчетная доза для мышей составила 20×37/3=247 МЕ/кг. При средней массе тела мыши 14 г доза составила 3,5 МЕ/мышь, а с учетом коэффициента запаса (×1,4) — 5 МЕ/мышь.

Мышей инфицировали вирусом бешенства в дозе 2000 ЛД₅₀ MИЦ (мышиная интрацеребральная доза) в/м в среднюю часть наружной поверхности левой бедренной мышцы в объеме 0,05 см³.

Лабораторные животные. Использовали самцов и самок мышей линии BALB/с, полученных из филиала «Столбовая» ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА» (Московская область, Красногорский район, пос. Светлые горы), в возрасте 5 нед. и массой 12–14 г (отклонение среднего значения по всем экспериментальным группам менее 10%). Животных содержали в стандартных пластиковых клетках, группами по 10 особей одного пола. В качестве подстила использовали древесные гранулы («Ковчег СПб», Россия). Подстил меняли еженедельно. Корм в виде полнорационного гранулированного экструдированного комбикорма (рецепт ПК 120-2_306, АО «Гатчинский ККЗ», Россия) давали ad libitum, руководствуясь ГОСТ 33216-2014⁵. Доступ к воде обеспечивали с использованием стандартных поилок ad libitum в соответствии с СанПиН 2.1.4.1074-01⁶. Воду в поилках меняли ежедневно. Животных содержали в контролируемых условиях окружающей среды при температуре 19–25 °C, относительной влажности воздуха 30–70% и 12-часовом световом дне.

Перед экспериментом мыши находились в условиях 3-суточной адаптации и прошли клинический осмотр. Распределение животных по группам проводили методом модифицированной блочной рандомизации.

На этапе приготовления и паспортизации рабочих культур штаммов вируса бешенства было использовано 110 и 270 мышей линии BALB/с соответственно, а в опытах по изучению эффективности комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба — 960 мышей (480 самок и 480 самцов).

Методы

Дизайн исследования. Проводили паспортизацию рабочих культур вируса бешенства (штаммы 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020, CVS) и оценку защитных свойств комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба, введенного мышам в/м через 6 ч или 24 ч после инфицирования. Оценку эффективности комбинированного препарата и препарата сравнения осуществляли в двух одинаковых опытах на мышах BALB/c.

Животных распределяли на 23 группы по 20 особей в каждой (10 самцов и 10 самок). Штамм CVS вируса бешенства вводили мышам групп № 3, 4, 7, 8, 19; штамм RABV/Russia/SP48SolMak/2020 — мышам групп № 5, 6, 9, 10, 20; штамм 777-М — мышам групп № 11, 12, 15, 16, 21; штамм Россия/Самара/2018 — мышам групп № 13, 14, 17, 18, 22. Интактным животным групп № 1 и 2 вводили плацебо через 6 и 24 ч соответственно после заражения мышей других групп. Группы № 19, 20, 21, 22 служили контролем дозы вируса бешенства (штаммы CVS, RABV/Russia/SP48SolMak/2020, 777-М, Россия/Самара/2018 соответственно). Группа № 23 — интактный контроль.

Клинический осмотр. Ежедневно в течение 30 сут проводили общее клиническое наблюдение, регистрируя отклонения от физиологической нормы, при этом учитывали поведение, аппетит, упитанность, состояние кожного и волосяного покрова, слизистых оболочек, характер дыхания, активность в движении, поведенческие реакции, наличие выделений естественного (дефекация, мочеиспускание) и патологического характера.

Масса тела. Групповое взвешивание животных проводили перед первым введением препаратов и далее еженедельно.

Подтверждение специфичности гибели животных. Специфичность гибели подтверждали методом ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ) с использованием набора реагентов для выявления и идентификации РНК вируса бешенства (ОМ-Скрин-Бешенство-РВ; серии: 290324 и 300524; ООО «Синтол», Россия).

Эвтаназия. На 31 сут эксперимента животных подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации.

Титрование вируса бешенства. Инфекционную активность вируса оценивали на мышах BALB/с (масса 12–14 г) при интрацеребральном инфицировании. Животных, погибших в течение первых 48 ч после инфицирования, считали неспецифически погибшими и исключали из опыта. Наблюдение проводили в течение 30 сут. Специфичность гибели подтверждали с помощью ОТ-ПЦР-РВ. Биологическую активность вируса рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина [13].

Критерии оценки эффективности препарата. Определяли массу тела, сроки и частоту гибели животных, инкубационный и клинический периоды, показатели средней продолжительности жизни (СПЖ) мышей до гибели, защиты от проявления клинических признаков и защиты животных от гибели. Расчет показателей защиты от проявления клинических признаков и защиты животных от гибели проводили с помощью таблицы Генеса [14].

Регулирующие стандарты. Исследование выполняли согласно нормативным и правовым документам Российской Федерации⁷ и Директиве 2010/63/EU Европейского парламента⁸.

Статистическая обработка данных. Статистическую обработку проводили с использованием программы Microsoft Office Exсel 2021. Оценку достоверности различий осуществляли с использованием параметрического t-критерия Стьюдента [13][15].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Приготовление и паспортизация рабочих культур вируса бешенства штаммов 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020 и CVS

В работе использовали три уличных штамма классического вируса бешенства — 777-М в качестве известного штамма для проведения вирусологических исследований; Россия/Самара/2018 и RABV/Russia/SP48SolMak/2020 в качестве штаммов, циркулирующих на территории Российской Федерации. Также применяли фиксированный штамм CVS классического вируса бешенства с ограниченной патогенностью при периферическом введении. Рабочие культуры готовили на основе эталонных культур. Рабочее разведение готовили для получения количества вируса от 1×10⁴ до 1×10⁷ ЛД₅₀ МИЦ на одно животное (объем инокулята 0,04 см³) и использовали для интрацеребрального заражения. Для приготовления вируссодержащей культуры отбирали мышей в агональном состоянии и павших с 3 по 30 сут, извлекали мозг и растирали с добавлением физиологического раствора (pH 7,2–7,4) до получения 10% суспензии. Материал разливали в пробирки (1,0 мл) и хранили при температуре от минус 68 до минус 72 °С не более 6 мес.

При паспортизации рабочих культур оценивали стерильность и инфекционную активность, а также регистрировали показатели, характеризующие инфекционный процесс, вызываемый штаммами вируса. Наличие посторонней микрофлоры в препаратах оценивали посевом 10-кратного разведения на универсальную селективную тиогликолевую среду с визуальным учетом результатов через 14 сут. Прозрачная среда в пробирках свидетельствовала об отсутствии посторонней микрофлоры.

Клинико-вирусологическая характеристика штаммов представлена в таблице 1. Наименьшие показатели СПЖ до гибели мышей (6,9 сут), инкубационного (5,0 сут) и клинического (1,9 сут) периода заболевания зарегистрированы для штамма CVS, что соответствует литературным данным для фиксированных штаммов [16][17]. Этот штамм является производным Пастеровского штамма фиксированного вируса бешенства и признан ВОЗ стандартом для оценки иммуногенности выпускаемых вакцин. Интрацеребральное введение фиксированных штаммов вызывает после короткого инкубационного периода паралитическое заболевание как правило с непродолжительным клиническим периодом [16][17].

Наибольшие показатели отмечены у штамма Россия/Самара/2018: СПЖ — 13,3 сут, инкубационный период — 10,0 сут, клинический период — 3,3 сут. Для штаммов 777-М и RABV/Russia/SP48SolMak/2020 определены следующие значения показателей: СПЖ — 8,7 и 7,6 сут; инкубационный период — 6,5 и 5,5 сут; клинический период — 2,2 и 2,1 сут. Полученные результаты согласуются с литературными данными по штамму 777-М при интрацеребральном заражении мышей [18] и подтверждают вариабельность биологических свойств уличных штаммов вируса бешенства.

Бешенство у мышей при интрацеребральном заражении протекает остро, а клинический период не превышает 4 сут [19][20]. Отдельные биологические свойства штаммов уличного вируса бешенства отличаются, и клинический период заболевания у мышей может достигать 31 сут [19]. При этом изучаемые штаммы отнесены к классическим штаммам уличного вируса. Использование 10⁻² и 10⁻³ разведений рабочих культур использованных штаммов вызывало заболевание мышей с клиническим периодом от 1,9 до 3,3 сут, что соответствует литературным данным.

Клинические признаки заболевания у инфицированных мышей включали отсутствие аппетита, адинамию, учащенное дыхание, в некоторых случаях тремор, позу «сгорбленная спина» и параличи, что является характерным признаком бешенства у мышей. В группе плацебо и интактного контроля гибель отсутствовала.

Таким образом, все исследованные штаммы вируса бешенства оказались высокопатогенными для мышей ВALB/c. Рабочие культуры штаммов посторонней микрофлоры не имели, а их биологическая активность составляла: 777-М — 7,5 lg ЛД₅₀ МИЦ/см³, Россия/Самара/2018 — 6,4 lg ЛД₅₀ МИЦ/см³, RABV/Russia/SP48SolMak/2020 — 6,9 lg ЛД₅₀ МИЦ/см³, CVS — 7,5 lg ЛД₅₀ МИЦ/см³ соответственно.

Оценка эффективности комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба в отношении вируса бешенства на мышах ВALB/c

Влияние комбинированного препарата на массу тела мышей BALB/c. Патогенетически обусловленный способ введения вируса бешенства (в/м инъекция) был аналогичен заражению человека в естественной природной среде. Инфицирующая доза 2000 ЛД₅₀ МИЦ вызвавала 100% гибель мышей в контрольных группах. Данные условия эксперимента позволили оценить защитный эффект комбинированного препарата. Использованная доза заражения сопоставима с данными в научной литературе [21][22].

При введении комбинированного препарата и препарата сравнения регистрировали достоверно более высокие (p<0,001) показатели массы тела самок и самцов мышей по сравнению с группами контроля дозы вируса (рис. S1, опубликован на сайте журнала⁹). При введении комбинированного препарата и препарата сравнения через 6 ч после инфицирования штаммами вируса бешенства масса тела самцов в группах контроля дозы вируса была меньше на 1,7–3,0 г, а самок — на 2,6–3,8 г; при введении препаратов через 24 ч масса тела самцов была меньше на 2,2–3,7 г, самок — на 2,6–4,1 г.

На протяжении всего наблюдения показатели массы тела в группах с введением комбинированного препарата и препарата сравнения были сопоставимы с группой плацебо и группой контроля интактных мышей и достоверно не различались между собой (p<0,05). Под влиянием комбинированного препарата, введенного через 6 ч после инфицирования штаммами вируса бешенства, масса тела к 30 сут эксперимента достоверно (p<0,001) увеличилась по отношению к начальным значениям (0 сут) у инфицированных самцов на 5,1–6,0 г, у самок — на 3,8–4,4 г. При введении комбинированного препарата через 24 ч прирост массы тела составил у самцов 4,9–5,9 г, у самок — 4,0–4,4 г. Наблюдаемое увеличение массы тела мышей в группах, где применяли комбинированный препарат и препарат сравнения, свидетельствует об отсутствии поражающего действия вируса на организм вследствие его нейтрализации в воротах инфекции.

Согласно данным литературы [23], при оценке эффективности инактивированных вакцин против бешенства снижение массы тела инфицированных мышей более 15% по сравнению с интактным контролем считается значимым параметром наряду с уменьшением температуры тела и наличием неврологических признаков. В проведенном исследовании такое снижение массы тела отмечалось только в группах контроля дозы вируса. На 14 сут у мышей групп контроля дозы вируса бешенства всех штаммов регистрировали достоверное (p<0,001) снижение массы тела по сравнению с контрольными группами (интактный контроль и плацебо). Важно отметить, что на 7 сут у мышей в группах контроля дозы вируса бешенства всех штаммов значение данного показателя было сопоставимым по сравнению с группами, где применяли комбинированный препарат и препарат сравнения. На 21 сут масса самцов мышей группы контроля дозы вируса, штамм Россия/Самара/2018, снизилась на 32,4% по сравнению с начальным значением, а по сравнению с группой интактного контроля на 9,4 г, или на 97,9% (p<0,001). Наблюдаемая динамика снижения массы тела характерна для заболевших бешенством животных [24][25].

Влияние комбинированного препарата на показатели средней продолжительности жизни и клинического проявления инфекции у мышей BALB/c. Применение комбинированного препарата и препарата сравнения через 6 или 24 ч после инфицирования вирусом бешенства приводило к достоверному (p<0,001) повышению показателей СПЖ мышей по сравнению с группами контроля дозы вируса (табл. 2). Показатель СПЖ у самцов мышей в группах контроля дозы вируса был меньше по сравнению с показателем в группах с введением через 6 ч комбинированного препарата на 11,7–18,4 сут в зависимости от штамма, у самок — на 12,4–17,1 сут. При введении комбинированного препарата через 24 ч различия показателя СПЖ относительно групп контроля дозы вируса составляли — для самцов 10,9–17,5 сут, для самок 12,4–18,9 сут.

Во всех группах контроля дозы вируса бешенства (штамм 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020, CVS) летальность составила 100%. Специфичность гибели животных подтверждена ОТ-ПЦР-РВ. Клинические признаки у заболевших мышей включали отсутствие аппетита, адинамию, учащенное дыхание, тремор, позу «сгорбленная спина», парезы и параличи. В единичных случаях гибели мышей в опытных группах с введением комбинированного препарата и препарата сравнения выявлено недостоверное увеличение продолжительности клинического и инкубационного периодов по сравнению с группами контроля дозы вируса. При этом характер клинических признаков заболевания не отличался. При клиническом осмотре незаболевших мышей в группах с введением комбинированного препарата и препарата сравнения установлено хорошее клиническое состояние животных с сохранением всех физиологических функций в норме: упитанность хорошая, волосяной покров блестящий, слизистые оболочки бледно-розового цвета, поведенческие реакции соответствуют физиологической норме, дыхание свободное, аппетит нормальный, дефекация и мочеиспускание свободное.

Оценка проявлений клинических признаков рабической инфекции у самцов мышей после введения комбинированного препарата через 6 или 24 ч после инфицирования показала, что показатель защиты составил 90–100% в зависимости от штамма вируса, а при применении препарата сравнения — 85–100%. У самок мышей после введения комбинированного препарата через 6 ч после инфицирования показатель защиты от проявления клинических признаков в отношении штаммов вируса составил 100%, кроме штамма CVS (90%), а при введении препарата через 24 ч — 96–100%. При введении препарата сравнения самкам мышей через 6 или 24 ч после инфицирования защита от проявления клинических признаков составила 85–100% в зависимости от штамма вируса.

Таким образом, применение комбинированного препарата на основе докаравимаба и миромавимаба и препарата сравнения обеспечивали достоверно (p<0,001) высокие показатели СПЖ и защиты от проявления клинических признаков заболевания у инфицированных мышей по сравнению с группами контроля дозы вируса бешенства. Не было выявлено статистически значимых различий по показателю СПЖ в группах самцов и самок мышей при применении комбинированного препарата и препарата сравнения.

Защитная эффективность комбинированного препарата в отношении вируса бешенства. Комбинированный препарат на основе докаравимаба и миромавимаба, введенный в/м через 6 ч после инфицирования вирусом бешенства (штаммы 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020, CVS), обеспечивал защиту от гибели 90–100% самцов и самок мышей BALB/c (табл. 3). Препарат сравнения при тех же условиях показал защитную эффективность на уровне 85–100% у самцов и 100% у самок мышей.

Комбинированный препарат, введенный в/м через 24 ч после инфицирования вирусом бешенства (табл. 4), продемонстрировал защитную эффективность на уровне 90–100% для самцов и 96–100% для самок мышей. Препарат сравнения при тех же условиях обеспечивал защиту от гибели 85–100% самцов и самок мышей.

Таким образом, установлено, что комбинированный препарат на основе докаравимаба и миромавимаба обеспечивал высокую защитную эффективность у инфицированных вирусом бешенства мышей. По уровню защиты изучаемый препарат был сопоставим с препаратом гуманизированных МкАТ на основе замеровимаба и мазорелвимаба — SYN023 (Synermore Biologics Co., Ltd, Китай), исследованным на модели сирийских хомяков и собаках породы бигль при заражении штаммами вируса бешенства, циркулирующими в Северной Америке и Китае [7][26]. Полученные результаты подтверждают перспективность использования современных препаратов на основе МкАТ для ПЭП бешенства в Российской Федерации.

ВЫВОДЫ

1. Введение комбинированного препарата на основе антирабических МкАТ докаравимаба и миромавимаба приводило к достоверному увеличению массы тела, средней продолжительности жизни и защите от клинических проявлений бешенства у инфицированных мышей BALB/с по сравнению с группами контроля дозы вируса.
2. Комбинированный препарат продемонстрировал высокую защитную эффективность против актуальных для Российской Федерации уличных штаммов классического вируса бешенства. Внутримышечное введение препарата мышам через 6 ч после инфицирования вирусом (штаммы 777-М, Россия/Самара/2018, RABV/Russia/SP48SolMak/2020, CVS) обеспечивало защиту от гибели 90–100% самцов и самок мышей, а через 24 ч — 90–100% самцов и 96–100% самок.
3. По защитной эффективности комбинированный препарат не уступал препарату сравнения Ребинолину (иммуноглобулин антирабический).
4. Полученные результаты позволяют рекомендовать комбинированный препарат антирабических МкАТ докаравимаба и миромавимаба для его дальнейших доклинических и клинических исследований.

Дополнительная информация. На сайте журнала «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение» размещен рисунок S1.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-4-376-388-fig-s1

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: С.В. Борисевич — концепция и дизайн исследования, критический анализ и доработка текста рукописи; В.В. Рубцов — дизайн исследования, проведение экспериментальной работы (формирование групп животных, приготовление вируссодержащей суспензии, инфицирование мышей и введение им препаратов, взвешивание и клинический осмотр животных, вскрытие павших мышей, патологоанатомическое исследование), сбор данных, анализ и интерпретация результатов исследования, написание текста рукописи; М.Н. Писцов — проведение экспериментальной работы (формирование групп животных, приготовление вируссодержащей суспензии, инфицирование мышей и введение им препаратов, взвешивание и клинический осмотр животных, вскрытие павших мышей, патологоанатомическое исследование), сбор данных, анализ и интерпретация результатов исследования; С.Я. Логинова — статистический анализ и критическое обсуждение текста рукописи; В.Т. Кротков — критическое обсуждение текста рукописи, формулировка выводов; Р.В. Сахаров — проведение экспериментальной работы (формирование групп животных, инфицирование мышей и введение им препаратов, клинический осмотр животных), обработка результатов исследования; Д.А. Кузнецов — проведение экспериментальной работы (клинический осмотр животных, взвешивание и кормление животных), обработка результатов исследования, подготовка иллюстраций; Т.Е. Сизикова — проведение ОТ-ПЦР-РВ, сбор данных и анализ результатов исследования; С.В. Савенко — работа с лабораторными животными, оформление и перевод разделов рукописи; К.И. Яновская — обработка результатов исследования; А.В. Овчинников — статистический анализ данных, дизайн и оформление таблиц, доработка текста рукописи; А.Н. Миронов — дизайн исследования, утверждение окончательного варианта статьи для публикации.

Соответствие принципам этики. Исследование было одобрено на заседании биоэтической комиссии ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России (протокол № 16 от 04.03.2024).

Additional information. Figure S1 is published on the website of Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-4-376-388-fig-s1

Authors’ contributions. All the authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. S.V. Borisevich developed study concept and design, critically analysed and revised the manuscript text. V.V. Rubtsov developed study design, conducted the experiments (animal group formation, preparation of the virus-containing suspension, infection of mice and drug administration, animal weighing and clinical observation, necropsy of dead mice, and pathological examination), collected, analysed, interpreted the study results, and drafted the manuscript. M.N. Pistsov significantly contributed to the experimental work (animal group formation, preparation of the virus-containing suspension, infection of mice and drug administration, animal weighing and clinical observation, necropsy of dead mice, and pathological examination), collected, analysed, and interpreted study results. S.Ya. Loginova performed statistical analysis and critically discussed the manuscript. V.T. Krotkov critically discussed the manuscript and formulated conclusions. R.V. Sakharov conducted the experiments (animal group formation, infection of mice and drug administration, clinical observation) and collected study results. D.A. Kuznetsov conducted the experiments (clinical examination, weighing, and feeding of the animals), collected study results, and created figures. T.E. Sizikova conducted RT-PCR-RV, collected and analysed the results. S.V. Savenko worked with laboratory animals, developed and translated manuscript sections. K.I. Yanovskaya processed study results. A.V. Ovchinnikov performed statistical data analysis, designed and formatted tables, and revised the manuscript. A.N. Mironov designed the study and approved the final manuscript for publication.

Ethics approval. The Bioethics Committee of 48^th Central Scientific Research Institute approved the study (Meeting Minutes No. 16 of 4 March 2024).