Плазма крови человека в производстве лекарственных средств: национальные особенности в аспекте гармонизации с мировыми фармакопейными требованиями

ВВЕДЕНИЕ

Лекарственные препараты (ЛП), которые получают из плазмы крови человека, например препараты иммуноглобулинов, альбумина, факторов свертывания крови, применяют для лечения пациентов с иммунодефицитными состояниями различного генеза [1][2]; аутоиммунными, воспалительными, онкологическими, дегенеративными заболеваниями [3][4]; с нарушениями гемостаза [5], пациентов с обширными ожогами, травмами, кровопотерей, шоком. Такие ЛП включены в Перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов для медицинского применения¹, производство которых зависит от обеспечения плазмой крови человека.

Существуют значительные национальные и региональные различия в объемах заготовки плазмы. По состоянию на 2022 г. большинство мощностей находились в Северной Америке, Западной Европе и Юго-Восточной Азии. Около 80% мирового рынка плазмы приходится на США [6]. Это означает зависимость других стран от импорта и обосновывает необходимость как более сбалансированного сбора плазмы на национальном уровне, так и увеличения поставок плазмы [7]. В Европейском союзе (ЕС) объем собранной плазмы крови человека не удовлетворяет потребности пациентов в ЛП из плазмы крови, поэтому страны ЕС зависят от импорта плазмы, собранной в центрах плазмафереза США. Частные центры плазмафереза Германии, Австрии, Чешской Республики и Венгрии собирают в пропорциональном отношении в три раза больший объем плазмы, чем в любой другой стране ЕС [7]. На Латинскую Америку и Африку приходится очень небольшая доля заготовок плазмы [7]. В странах Азиатско-Тихоокеанского региона объем собираемой плазмы тоже не удовлетворяет растущий спрос на производимые из нее ЛП [8].

В Российской Федерации удовлетворение потребности населения в ЛП из плазмы крови человека является приоритетной задачей здравоохранения. Утверждена концепция² увеличения заготовки плазмы крови для производства ЛП на период до 2030 г. В документе отмечается необходимость создания инфраструктурных и технологических условий, которые позволили бы расширить ассортимент отечественных ЛП, полученных из плазмы крови человека, на российском рынке, а также обеспечения независимости фармацевтического рынка Российской Федерации и укрепления национальной безопасности³. Потребность в ЛП из плазмы крови в значительной степени удовлетворяется за счет закупок за рубежом. Так, например, подавляющее большинство ЛП, содержащих концентраты факторов свертывания крови (ФСК), закупаются за рубежом и только ЛП ФСК VIII и IX производят в России. Доля ЛП ФСК VIII российского производства на внутреннем фармацевтическом рынке составляет около 20%, ЛП ФСК IX — 20%, ЛП альбумина — 65,5%, а ЛП иммуноглобулинов человека — 49%⁴. Однако комплексные ЛП, например ФСК VIII в комбинации с фактором Виллебранда и ФСК II, VII, IX и X — все зарубежного производства⁵.

Для снабжения рынка Российской Федерации отечественными ЛП из плазмы крови человека важна организация масштабного современного производства этих ЛП с обеспечением фармацевтических предприятий необходимым объемом плазмы крови, соответствующей международным стандартам. В соответствии с Концепцией⁶ одним из главных направлений государственной политики в сфере увеличения заготовки плазмы крови является совершенствование нормативной правовой базы. Необходима система обеспечения качества плазмы крови человека, гарантирующая получение стандартизированного и безопасного исходного сырья в подходящих условиях его заготовки.

Заготовленная свежезамороженная плазма крови человека применяется как для переливания реципиентам, так и используется в производстве ЛП при соответствии ее качества требованиям плазмы человека для фракционирования (ПДФ)⁷. Для переливания также применяют свежезамороженную плазму, инактивированную различными методами патогенредукции. Требования к качеству ПДФ регламентированы фармакопеей. В настоящее время в Государственную фармакопею Российской Федерации (ГФ РФ) включена ФС.3.3.2.0001.19⁸, которая нуждается в актуализации из-за различий в требованиях к качеству плазмы крови для фракционирования с международными стандартами.

Цель работы — систематизация и анализ национальных и международных фармакопейных требований к качеству плазмы крови человека, в том числе используемой для производства ЛП, в рамках гармонизации национальных требований с мировыми стандартами качества, и разработка проектов фармакопейных статей.

Поиск информации осуществлялся по базам данных eLIBRARY.RU, PubMed, ГФ РФ XIV изд., монографиям ведущих зарубежных фармакопей (Европейская, Британская, Индийская, Китайская, Японская фармакопеи и фармакопея США) и Google Scholar.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

Контроль качества при заготовке плазмы крови

Заготовка необходимого объема плазмы крови человека для обеспечения организаций, осуществляющих производство ЛП, гарантирует безопасность и мобилизационную готовность страны⁹, поскольку ЛП из плазмы крови человека широко используются в чрезвычайных ситуациях. Качество и безопасность таких ЛП зависит как от исходного сырья — плазмы, так и от последующих этапов производства ЛП.

Мировая практика характеризуется наличием государственных, некоммерческих и частных центров, осуществляющих сбор плазмы крови человека; наличием современного оборудования, технологий и подходов к заготовке плазмы крови человека; соблюдением требований надлежащей производственной практики (GMP), организацией системы заготовки, хранения и транспортировки плазмы. При этом, помимо выполнения нормативных требований Руководства Европейского директората по качеству лекарственных средств и здравоохранения (EDQM)¹⁰, заготовители используют в работе и другие стандарты. Так, для обеспечения качества и безопасности заготавливаемой плазмы разработаны добровольные стандарты безопасности, устанавливающие необходимые параметры сбора, заготовки, хранения и транспортировки плазмы крови человека, а также контроля на гемотрансмиссивные инфекции (ГТИ). К таким стандартам, обеспечивающим качество плазмы во время ее заготовки, относится Международная программа качества плазмы (International Quality Plasma Program, IQPP)¹¹ Международной Ассоциации терапии белками плазмы (Plasma Protein Therapeutics Association, РРТА). Другим стандартом, применяемым на этапе фракционирования, является программа «Стандарты качества, совершенства, гарантии и лидерства» (Quality Standards of Excellence Assurance and Leadership), которая устанавливает необходимость внутрипроизводственного тестирования на вирус гепатита А и парвовирус B19, использование скрининга с применением технологии амплификации нуклеиновых кислот (НК) на уровне донорства или пула, а также стандарта вирусного маркера¹².

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) призывает государства-члены к разработке, внедрению и поддержке координируемых в национальных масштабах программ по заготовке крови и плазмы в соответствии с наличием ресурсов для достижения самообеспеченности. В бюллетене ВОЗ¹³ подчеркивается, что правительства стран несут ответственность за достаточную обеспеченность запасами получаемых из плазмы лекарственных средств, необходимых для лечения пациентов с различными заболеваниями. Обеспечение функционирования системы отбора доноров плазмы на национальном или региональном уровне для удовлетворения потребности в стабильном снабжении безопасным исходным сырьем для фракционирования имеет решающее значение для готовности к чрезвычайным ситуациям и поддержанию стабильности системы здравоохранения.

Донорство

Одним из показателей качества ПДФ является содержание целевых белков, которые, как правило, представлены альбумином, ФСК, различными классами иммуноглобулинов, преимущественно класса G. К факторам, влияющим на содержание целевых белков в ПДФ, относятся индивидуальные особенности донора, частота и объем донаций плазмы, способы заготовки плазмы, ее замораживание, хранение и транспортировка. Плазму получают центрифугированием цельной крови, собранной от здоровых доноров, или методом автоматического плазмафереза. В отличие от плазмы, выделенной из цельной крови, метод плазмафереза позволяет собирать большие объемы плазмы благодаря комбинации более высокой частоты донаций и увеличения объемов за донацию [7]. Допустимая частота донации плазмы/крови в расчете на донора и допустимый объем на донацию и/или донора регулируются национальным законодательством и отличаются в разных странах (табл. 1). Большинство учреждений по сбору крови в ЕС следуют Руководству EDQM¹⁴.

Как следует из таблицы 1, частота донаций намного выше в трех странах мира: до 50 раз в год в Австрии, до 60 раз — Германии и до 104 раз — США. Только 0,3% доноров в США сдают плазму ≥100 раз, 14% — ≥50 раз, тогда как 49% сдают ≤10 раз в год [9]. В странах Европы максимальное количество донаций составляет от 24 до 60 в год. Объем собираемой плазмы составляет от 625 до 850 мл за одну донацию. В некоторых странах объем собираемой плазмы пропорционален массе тела человека.

В США, Австрии, Чешской Республике, Германии, Венгрии и Китае плазму заготавливают от платных доноров [10]. ВОЗ и Международный комитет Красного Креста выступают за добровольное безвозмездное донорство¹⁵. «Надлежащие и надежные запасы крови доноров могут быть обеспечены на устойчивой основе регулярного, добровольного, безвозмездного донорства крови. Это наиболее безопасная группа доноров, так как среди них отмечается самый низкий уровень распространенности ГТИ. Резолюция Всемирной ассамблеи здравоохранения WHA63.12 от 21.05.2010 призывает все государства-члены развивать национальные системы обеспечения крови из добровольного безвозмездного донорства крови и работать над достижением цели по самообеспеченности»¹⁶.

В странах, где распространено только добровольное донорство, отмечено более высокое количество регулярных, так называемых «кадровых» доноров крови, причем это положение поддерживается на протяжении ряда лет. В тех странах, где отмечался рост добровольного донорства крови, наблюдалась тенденция к повышению процентного содержания регулярных донаций крови. Из этого следует, что добровольные доноры крови чаще сдают кровь на регулярной основе, чем семейные и/или заместительные доноры, а также платные доноры. Проблема заключается в том, что доноры могут не проходить повторное обследование, поэтому важно не только привлечь новых доноров, но и обеспечить регулярность их обследований на ГТИ. Создание такого контингента регулярных добровольных доноров крови экономически более выгодно, чем привлечение новых доноров¹⁷. По данным ВОЗ, в ряде исследований среди добровольных доноров зарегистрирована более низкая выявляемость маркеров инфекций, передающихся при переливании крови, по сравнению с другими видами донорства, причем самые низкие уровни зарегистрированы среди регулярных доноров¹⁸.

Отбор доноров и допуск доноров к донациям плазмы

Инфекционная безопасность — основной критерий качества ПДФ. Система обеспечения вирусной безопасности на предприятиях РРТА включает: строгий и тщательный отбор доноров; серологический скрининг индивидуальных донаций; обязательное сочетание иммунологических и молекулярно-генетических методов испытания на маркеры ГТИ; карантинное хранение плазмы в течение определенного промежутка времени, после которого доноры повторно обследуются; испытание индивидуальных донаций, минипулов и производственного пула на маркеры ГТИ; обязательное включение в производственный процесс не менее 2 стадий инактивации и/или элиминации вирусов¹⁹. Каждый этап вносит свой вклад в снижение вирусной нагрузки ЛП.

Международный опыт по обеспечению инфекционной безопасности ПДФ обобщен в Рекомендациях по производству, контролю плазмы и регулированию плазмы человека для фракционирования²⁰ ВОЗ. Изложенная в документе стратегия обеспечения качества и безопасности плазмы направлена на максимальное снижение вероятности попадания в производственный пул инфицированной плазмы и включает следующий комплекс мер: отбор здоровых доноров плазмы, тестирование плазмы доноров на наличие маркеров ГТИ, эпидемиологическое наблюдение за популяцией доноров, соблюдение требований GMP. Правильный отбор доноров ПДФ является одним из ключевых факторов, обеспечивающих безопасность получаемых из плазмы ЛП, и позволяет снизить остаточный риск контаминации для вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатитов В и С ≥100 раз²¹. Таким образом, хорошо охарактеризованная база доноров и разработанные процедуры отбора доноров из групп населения с низким риском заражения патогенами имеют важное значение для обеспечения инфекционной безопасности ПДФ.

Отбор доноров. Обеспечение качества плазмы на этапе ее заготовки в первую очередь связано с отбором доноров, прошедших тщательный медицинский скрининг. В Российской Федерации отбор доноров осуществляется в соответствии с требованиями действующих нормативных правовых документов. Законодательная поддержка донорства на государственном уровне осуществляется на основании Федерального закона 125-ФЗ²². Приказом Минздрава России²³ утвержден порядок медицинского осмотра доноров, перечень противопоказаний и сроки отвода, допуск к донации; указаны нормы состава крови, объемы забора крови, интервалы между процедурами и др.

Национальные регуляторные органы играют главную роль в разработке гармонизированной системы критериев отбора доноров, учитывающей соответствующие инфекционные риски и эпидемиологическую ситуацию в стране, в которой заготавливают плазму²⁴. Анализ опыта зарубежных заготовителей плазмы показал, что ПДФ собирают через двухэтапную систему допуска доноров к донациям ПДФ, включающую «квалифицированных» доноров. Квалифицированный донор должен дважды успешно пройти медицинское обследование и подтвердить отсутствие маркеров ГТИ²⁵. Интервал между обследованиями составляет ≥2 нед., но не должен превышать 6 мес. Если доноры не имеют донаций на протяжении >6 мес., они лишаются статуса квалифицированных и должны снова пройти процедуру подтверждения статуса по результатам двукратного обследования. Следовательно, заготовку ПДФ не проводят при первом обращении донора и в случае утраты им статуса квалифицированного донора. Такую систему заготовки от квалифицированных доноров, регулярно обследуемых на ГТИ, применяют многие зарубежные заготовители плазмы. Для организаций, участвующих в программе IQPP, реализуемой РРТА, внедрение данной системы является обязательным [11]. Стандарт PРТА позволяет определить предельно допустимую частоту встречаемости (тревожный уровень) подтвержденных случаев выявления маркеров ГТИ (суммарную и по каждому возбудителю отдельно) у регулярных доноров ПДФ в зависимости от возможности заготовителя плазмы [12]. В Российской Федерации двухэтапная система допуска доноров к донациям ПДФ не является обязательной.

В ФГБУ «Российский медицинский научно-производственный центр «Росплазма» Федерального медико-биологического агентства» была разработана и внедрена собственная система утверждения доноров ПДФ на основе международного стандарта РРТА, которая предусматривает допуск потенциального донора к донации ПДФ только по результатам двух клинико-лабораторных обследований, включая определение маркеров ГТИ. Разработчики рекомендовали внедрение системы утверждения доноров в других учреждениях, осуществляющих массовую заготовку ПДФ [11].

Парамонов И.В. с соавт. установили, что в условиях массовой заготовки ПДФ двухэтапная система отбора доноров обеспечивает формирование пула регулярных доноров с низким риском выявления маркеров ГТИ. Суммарная частота обнаружения маркеров вируса гепатита В, вируса гепатита С и вируса иммунодефицита человека первого и второго типов (ВИЧ-1, ВИЧ-2) составляет от 0,05 до 0,07%²⁶. Внедренная на региональном уровне система обеспечивает уровень инфекционной безопасности плазмы, соответствующий требованиям PPTA.

Карантинизация плазмы

Полученная плазма крови человека после донации замораживается и помещается в карантинную зону. Карантинизация свежезамороженной плазмы — важный этап обеспечения ее вирусной безопасности. В соответствии с Постановлением Правительства Российской Федерации²⁷ карантинизацию плазмы определяют как хранение плазмы с запретом ее использования до повторного исследования образца крови донора на ГТИ. Карантинизация может быть активной — с обязательным повторным обследованием донора или пассивной, когда ожидают сигнал о выявлении инфекции у донора [13]. Каждая индивидуальная донация плазмы хранится в карантине до получения результатов лабораторных исследований.

При положительных результатах исследований на ГТИ индивидуальную донацию плазмы использовать нельзя. Если результаты исследований удовлетворительные, то далее индивидуальные донации плазмы подвергают карантинизации в течение определенного промежутка времени в соответствии с действующими национальными стандартами до повторного испытания на маркеры ГТИ. Это связано с тем, что серонегативное окно или скрытый период вирусоносительства невозможно определить даже с помощью современных методов лабораторного исследования. Если организации, осуществляющие производство ЛП из ПДФ, имеют в технологическом процессе производства не менее двух ортогональных стадий инактивации и/или элиминации вирусов, то допускается передача им плазмы, которая не прошла карантинизацию или которая находится на карантинном хранении²⁸.

Международная практика карантинизации плазмы

Подходы к карантинизации плазмы различаются в разных регионах мира и странах. Точные и своевременные результаты испытаний на маркеры ГТИ важны для предотвращения инфицирования реципиентов крови и ее компонентов. Выбор подходящих лицензированных и валидированных тестов для скрининга должен соответствовать действующим национальным стандартам. Алгоритмы тестирования должны быть разработаны с учетом эпидемиологической ситуации в популяции доноров, в которой заготавливают плазму, поскольку это влияет на вероятность получения точного результата до начала теста и его эффективность²⁹.

В Российской Федерации до 2019 г. срок карантинизации плазмы составлял 180 сут. Однако внедрение современных высокочувствительных молекулярно-генетических методов выявления НК вирусов при использовании технологии амплификации НК (nucleic acid amplification technologies, NAT) и эффективных методов патогенредукции плазмы позволило пересмотреть сроки карантинизации. В настоящее время установленный срок карантинизации плазмы составляет 120 сут³⁰. Во время первой донации (период серонегативного окна), если донор уже мог быть инфицирован и вирус активно размножался в организме, но титр специфических антител к антигенам ГТИ в момент донации находится ниже предела обнаружения методики, то через 120 сут антитела будут выявлены с гораздо большей вероятностью. По окончании срока карантинизации донор, сдавший данную порцию плазмы, должен вновь пройти медицинское обследование для подтверждения отсутствия инфицирования гепатитом В, гепатитом С, ВИЧ и сифилисом. В случае неявки донора на повторное обследование, а также при выявлении у донора маркеров ГТИ в период карантинизации или на момент истечения ее срока, все индивидуальные донации плазмы крови, заготовленные от этого донора, уничтожаются³¹. В соответствии с требованиями ФС.3.3.2.0001.19³² предусмотрена процедура карантинизации согласно с действующими нормативными правовыми документами, регламентирующими заготовку, хранение, транспортировку плазмы крови.

ЕАЭС. В Решении Совета Евразийской экономической комиссии³³ в разделе «Процедура карантинного хранения» отмечается, что в основном досье плазмы крови должна быть подробно описана действующая процедура карантинного хранения или хранения запасов плазмы с обоснованием выбранного срока хранения плазмы.

США. Согласно монографии «Плазма крови человека»³⁴ Фармакопеи США «каждая отдельная единица плазмы, предназначенная для переливания или дальнейшего производства, хранится на карантине до тех пор, пока не будут завершены все необходимые испытания. Производители плазмы добровольно внедрили протокол хранения плазмы (карантинизацию) до производства в течение 60 дней». Основанием для карантинного хранения является тот факт, что доноры, которые недавно были инфицированы патогеном, возможно, не выработали уровень антител на момент донорства, тем самым сдавая инфицированную кровь, несмотря на отрицательные результаты испытаний на маркеры ГТИ. Карантинное хранение дает достаточно времени для того, чтобы у инфицированного донора выработался уровень антител, который будет обнаружен во время последующего донорства. Карантинное хранение в течение 60 сут также снижает вероятность попадания инфекционного материала в производственный процесс.

Согласно Руководству FDA³⁵ исходная плазма, полученная от платных доноров и признанная пригодной для дальнейшего производства ЛП, должна находиться на карантине не менее 60 календарных дней, прежде чем будет разрешена к дальнейшему использованию в производстве. Управление по контролю за качеством продуктов питания и лекарственных средств (FDA, США) не намерено предпринимать никаких регулирующих действий относительно срока хранения, если исходная плазма будет выпущена после карантина продолжительностью 45 календарных дней вместо 60, при условии соблюдения всех остальных требований к пригодности донора и донации.

Страны Европы. Карантинизация плазмы во Франции осуществляется согласно стандартам, указанным в Руководстве FDA³⁶. Сроки карантинизации сокращены в 2011 г. с 3 до 2 мес. [14]. В Германии в 1993 г. был введен карантинный срок хранения плазмы для переливания продолжительностью 6 мес., который в 2003 г. был сокращен до 4 мес. в связи с усовершенствованием методов скрининга, используемых в учреждениях по переливанию крови [15].

Патогенредукция плазмы крови

Большие объемы заготовленной плазмы уничтожаются вследствие неявки доноров на повторное обследование. Для снижения потерь плазмы применяют различные методы патогенредукции. Плазма патогенредуцированная — это свежезамороженная плазма, инактивированная подходящим методом. Применяют фотодинамический метод с обработкой метиленовым синим, однако некоторые реципиенты имеют индивидуальную непереносимость метиленового синего, что является ограничением метода [14]. Другой метод патогенредукции плазмы заключается в использовании растворителей-детергентов. Так, в Нидерландах в 2014 г. карантинизированная плазма была заменена на плазму, инактивированную сольвент-детергентным методом [16]. Широко применяют ультрафиолетовое облучение плазмы с добавлением рибофлавина или амотосалена [17].

Обнаружение вирусов методами на основе NAT не зависит от титра антител. Тем не менее методы NAT не могут обеспечить обнаружение всего спектра вирусов и характеризуются определенными, хотя и очень низкими, пределами обнаружения, поэтому карантинизация плазмы по-прежнему актуальна и продолжает применяться.

Практика определения маркеров гемотрансмиссивных инфекций в донациях плазмы крови

Испытание индивидуальных донаций плазмы является обязательным условием минимизации риска вирусной контаминации. Согласно рекомендациям ВОЗ для каждой индивидуальной донации крови (плазмы) проводят исследование маркеров вирусных инфекций: антител к ВИЧ; поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAg); антител к вирусу гепатита С; возбудителю сифилиса³⁷. В Рекомендациях ВОЗ³⁸ обязательными являются испытания на ВИЧ-1, ВИЧ-2, HBsAg и антитела к вирусу гепатита С, а также испытания индивидуальных донаций или минипулов методом на основе NAT на наличие НК вирусов иммунодефицита человека, вирусов гепатитов B и С. В Европе методы на основе NAT используют для тестирования как индивидуальных донаций, так и нескольких донаций, объединенных в минипулы. Испытания на антитела к возбудителю сифилиса не предусмотрены в указанных Рекомендациях ВОЗ³⁹.

G. Kaur с соавт. отмечали, что с 1966 г. в мире не было зарегистрировано ни одного случая передачи сифилиса вследствие переливания крови и/или плазмы [18]. Для предупреждения риска инфицирования сифилисом вследствие гемотрансфузии достаточны следующие меры: анкетирование кандидатов в доноры, включающее специально разработанные вопросы (выявление лиц с потенциальным риском инфицирования сифилисом; самоотвод доноров крови, больных сифилисом со спирохетемией; отвод потенциальных доноров, у которых выявлено поведение высокого риска заражения сифилисом); обязательное индивидуальное серологическое исследование образцов крови донора, чтобы подтвердить ее безопасность для принятия решения о ее пригодности или непригодности для дальнейшего использования при положительном результате исследования. Существует также предположение, что низкий риск инфицирования сифилисом вследствие переливания плазмы связан с гибелью, а также с потерей или резким снижением вирулентности Treponema рallidum при хранении плазмы в течение нескольких часов при комнатной температуре, в холодильнике и при замораживании. Однако по результатам метаанализа 10 исследований, проведенных с использованием кроликов (8), крыс (1), а также с привлечением людей (1), T. D’aes с соавт. [19] заключили, что пока не ясно, устраняет ли длительное хранение риск сифилиса, передающегося через кровь. Несмотря на то что инфекционность крови, содержащей T. pallidum, может снижаться после 72 ч хранения в холодильнике, вероятность передачи сифилиса при переливании крови может сохраняться в течение нескольких суток. Отсутствие достаточно обоснованных исследований, в том числе на людях, подчеркивает необходимость дальнейшего изучения влияния температуры хранения на вирулентность T. pallidum [19].

Национальные регуляторные органы могут потребовать проведения дополнительных испытаний на наличие других маркеров с учетом эпидемиологической ситуации в конкретном регионе или стране. Так, в докладе ВОЗ 14 стран, включая Австрию, Канаду, Кипр, Германию, Грецию, Великобританию и США, сообщили о политике тестирования на вирус Западного Нила. Канада и США проводили тестирование всех донаций крови на наличие РНК вируса Западного Нила, в то время как в других странах тестирование проводили выборочно. США сообщили также о политике тестирования на вирус Зика, а четыре страны — Финляндия, Япония, Люксембург и Швейцария — сообщили о политике тестирования всех донаций крови на наличие парвовируса человека B19. Швейцария указала, что данная политика проводится в соответствии с требованиями индустрии фракционирования. Люксембург и Швейцария сообщили также о политике тестирования на вирус гепатита А. Франция, Япония и Люксембург сообщили о политике выборочного тестирования на вирус гепатита E⁴⁰.

В Российской Федерации индивидуальные донации плазмы контролируют на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24 ВИЧ-1, HBsAg, антител к вирусу гепатита С и к возбудителю сифилиса⁴¹. После объединения в минипулы образцов плазмы, показавших отрицательные результаты, их подвергают испытаниям методами на основе NAT на наличие НК вируса ВИЧ, вируса гепатита B и С⁴². Определение ДНК парвовируса B19 и РНК вируса гепатита А в Российской Федерации не является обязательным.

Таким образом, роль скрининговых испытаний заключается в снижении до минимального уровня патогенной нагрузки в производственном пуле. Международные практики, направленные на обеспечение качества и безопасность плазмы, различаются в зависимости от национальных законодательных актов. Эти отличия проявляются, в частности, в различных алгоритмах сбора плазмы, которые предполагают как платное, так и безвозмездное донорство, в различных частотах и объемах донаций, распространенности частных и/или государственных центров сбора, а также возможности фракционирования плазмы.

Сравнительный анализ фармакопейных требований к плазме человека

В зарубежных фармакопеях требования к качеству плазмы крови человека изложены в соответствующих монографиях. В Европейской фармакопее (Ph. Eur.) это требования к ПДФ⁴³ и вирусинактивированной плазме⁴⁴. В фармакопее США (USP) требования к плазме приведены в монографии⁴⁵, а также требования к заготовке и обработке плазмы установлены FDA (США) и подробно изложены в Своде законов США⁴⁶ (Code of Federal Regulations (21 CFR)). В Индийскую фармакопею (IP) включены две монографии — на плазму для фракционирования⁴⁷ и плазму вирусинактивированную⁴⁸, также две монографии⁴⁹ включены и в Британскую фармакопею (BP). Монографии BP гармонизированы с монографиями Ph. Eur. Индивидуальные монографии с требованиями к плазме крови человека отсутствуют в Японской фармакопее (JP), однако в JP приведены требования к ее вирусной безопасности согласно Руководству по обеспечению вирусной безопасности препаратов белковых фракций плазмы крови⁵⁰. В Китайскую фармакопею (ChP) включена одна монография⁵¹ на ПДФ. ФС.3.3.2.0001.19⁵² ГФ РФ XIV изд. содержит требования к качеству субстанции, предназначенной для производства ЛП.

Важным критерием качества ПДФ является ее безопасность. Анализ контроля и обеспечения вирусной безопасности индивидуальных донаций, минипулов и производственных пулов ПДФ в национальных и региональных стандартах качества выявил различия (табл. S1, опубликована на сайте журнала⁵³). Как указано выше, в Европе существуют отдельные стандарты качества на плазму вирусинактивированную, для получения которой используют технологический процесс, и плазму для фракционирования.

В Ph. Eur. и IP индивидуальные донации плазмы обязательно испытывают с целью выявления следующих маркеров: антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, HBsAg и антител к вирусу гепатита С. В ГФ РФ предусмотрено проведение испытаний каждой индивидуальной донации плазмы на наличие HBsAg, антител к вирусу гепатита С, антигена р24 ВИЧ-1, антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и к возбудителю сифилиса. В ходе анализа монографий выявлено, что в USP в одном стандарте качества приведены требования к вирусинактивированной плазме, предназначенной для прямого переливания пациентам и полученной из цельной крови, и к плазме, используемой для дальнейшего производства ЛП. В США регулирование качества плазмы осуществляется также в соответствии со Сводом законов США⁵⁴. Свод законов США устанавливает испытания индивидуальных донаций плазмы на содержание HBsAg, антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, антител к вирусу гепатита С и на наличие НК ВИЧ и вируса гепатита С.

В отличие от Ph. Eur. в монографии ChP предусмотрен контроль индивидуальных донаций плазмы на наличие возбудителя сифилиса, а при амплификации НК для выявления РНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С не предусмотрено применение соответствующего стандартного образца. В ChP определение содержания общего белка проводят только биуретовым методом; также предусмотрено определение содержания аланинаминотрансферазы (АЛТ) в индивидуальных донациях, которое отсутствует в других мировых стандартах. Однако национальные регуляторные органы могут принять решение о необходимости проведения дополнительного испытания на содержание АЛТ. В Ph. Eur. предусмотрен метод определения общего белка с помощью минерализации серной кислотой с последующим расчетом количественного содержания белка по массовой доле азота (метод Кьельдаля). Также предусмотрено определение активности ФСК человека VIII, которое проводят в плазме, предназначенной для получения концентратов лабильных белков.

В соответствии с Ph. Eur. производственные пулы ПДФ контролируют на наличие HBsAg, антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и на наличие РНК вируса гепатита С. В отличие от Ph. Eur. в USP отсутствуют серологические испытания пулов плазмы, серологическое тестирование проводят на индивидуальных донациях, а минипулы и производственные пулы тестируют методами на основе NAT. Согласно ГФ РФ производственный пул плазмы обязательно контролируют иммунологическими методами (определение антигена р24 ВИЧ-1, антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2, антител к вирусу гепатита С, HBsAg, возбудителя сифилиса) и методами на основе NAT (определение НК ВИЧ, вируса гепатита В и С). В соответствии с монографией ChP в производственном пуле предусмотрены испытания на наличие HBsAg, антител к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и НК ВИЧ, вируса гепатита В и С, а также определение содержания антител к HBsAg. В монографии IP производственные пулы ПДФ контролируют на наличие HBsAg, антител к ВИЧ, вирусу гепатита С и на наличие НК вируса гепатита С.

Условия замораживания и хранения плазмы влияют на сохранность белков и, следовательно, на выход целевых продуктов. Требования к условиям замораживания и хранения ПДФ в Ph. Eur. и USP различны. В монографии USP указано, что ПДФ должна быть заморожена до температуры минус 20 °С. В Ph. Eur. требования к температуре заморозки плазмы приведены в зависимости от вида фракционирующих белков: лабильные белки — ФСК; стабильные белки — альбумин и иммуноглобулины. В ГФ РФ требования к температурному режиму гармонизированы с Ph. Eur. По мнению A. Farrugia с соавт., требования, содержащиеся в Ph. Eur., больше отражают вопросы выхода продукта, чем вопросы безопасности, поэтому они не должны быть отражены в стандартах качества. Для этой цели достаточно хранения ПДФ при температуре не выше минус 20 °C, как изложено в монографии USP [20]. Качество ЛП, которые получают из ПДФ, зависит как от особенностей технологии производства, так и от стандартизации и качества ПДФ. Таким образом, анализ международных фармакопейных требований позволил установить необходимость формирования современных подходов к отечественной фармакопейной стандартизации плазмы крови.

Совершенствование национальных фармакопей ных стандартов качества на плазму крови человека

Проект фармакопейной статьи (ФС) «Плазма человека для фракционирования»

Внесение изменений в подготовленный проект ФС «Плазма человека для фракционирования» обусловлено необходимостью усовершенствования стандартизации ПДФ, гарантирующего качество и вирусную безопасность.

Структура проекта ФС гармонизирована с аналогичной монографией Ph. Eur.⁵⁵ с учетом требований действующих национальных нормативных правовых документов, а также требований к донорству. Кроме того, учтен уровень развития отечественного промышленного фармацевтического производства ЛП из плазмы крови человека. Проект ФС содержит следующие разделы: требования к донорам и индивидуальным донациям плазмы (индивидуальным единицам плазмы); требования к температурным режимам замораживания плазмы, предназначенной для выделения лабильных или стабильных белков; предусмотрена обязательная карантинизация; предусмотрено определение активности ФСК человека VIII и определение содержания общего белка; предусмотрены требования к объединенной плазме; указаны особенности температурных режимов хранения и транспортировки плазмы; предусмотрены разделы «Описание» и «Информация о маркировке».

Гемотрансмиссивные инфекции. Используемое исходное сырье имеет человеческое происхождение, которое может быть контаминировано возбудителями ГТИ. Система обеспечения вирусной безопасности плазмы крови человека организована на этапах производства, что необходимо для снижения вирусной нагрузки готового ЛП, поэтому требования к маркерам ГТИ предусмотрены в разделе «Производство». В отличие от ФС.3.3.2.0001.19⁵⁶, в проекте ФС на ПДФ исключен раздел «Испытания». Передача ПДФ в производство включает испытание индивидуальных донаций, минипулов и производственного пула на наличие маркеров вирусных инфекций. В проекте ФС предусмотрено проведение испытаний на наличие вирусных маркеров ГТИ индивидуальных донаций плазмы, минипулов, если индивидуальные донации были в них объединены (при необходимости), и производственного пула. В проекте ФС на ПДФ, в отличие от действующей ФС3.3.2.0001.19⁵⁷, не предусмотрено проведение испытания индивидуальных донаций плазмы и пулов плазмы на отсутствие возбудителя сифилиса, что гармонизировано с ведущими фармакопеями мира.

Карантинизация плазмы. Несмотря на то что в Ph. Eur. и ChP информация о карантинизации отсутствует, а в USP указывается о добровольном внедрении производителями протокола хранения плазмы, в проекте ФС «Плазма человека для фракционирования» сохранено указание о необходимости карантинного хранения плазмы. Это согласуется с национальным законодательством Российской Федерации, в соответствии с которым процедура карантинизации плазмы является обязательной⁵⁸.

Проект фармакопейной статьи (ФС) «Плазма человека вирусинактивированная»

В Ph. Eur., BP и IP включены отдельные стандарты качества на плазму вирусинактивированную, а в ГФ РФ аналогичная ФС отсутствует. В проекте ФС «Плазма человека вирусинактивированная» предусмотрено, что исходное сырье, используемое для получения плазмы человека вирусинактивированной, должно соответствовать требованиям (где применимо) ФС «Плазма человека для фракционирования».

Структура проекта ФС. Структура проекта ФС гармонизирована с аналогичной монографией Ph. Eur.⁵⁹. В разделе «Производство» способ производства должен включать этапы, на которых инактивируются известные инфекционные патогены. В методе инактивации оболочечных вирусов растворителем-детергентом предусмотрено использование подходящих вирусинактивирующих агентов, например комбинации трибутилфосфата и октоксинола 10. В разделе «Испытания», помимо определения pH, осмоляльности и общего белка, предусмотрено определение активированных факторов свертывания крови, анти-A и анти-B гемагглютининов, антител к вирусу гепатита А, нерегулярных эритроцитарных антител, активированного частичного тромбопластинового времени.

Гемотрансмиссивные инфекции. Испытания пула плазмы в подготовленном проекте ФС гармонизированы с Ph. Eur., их проводят иммунологическими методами на наличие HBsAg и антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, а также методами амплификации НК на наличие РНК вируса гепатита А, РНК вируса гепатита С и Е и ДНК парвовируса В19. В отличие от Ph. Eur. в IP не предусмотрено испытания пула плазмы на наличие РНК вируса гепатита Е.

Таким образом, подготовленные проекты ФС «Плазма человека для фракционирования» и «Плазма человека вирусинактивированная» гармонизированы с мировыми стандартами качества и отражают современный уровень фармакопейной стандартизации. Указанные проекты утверждены на заседании Совета Министерства здравоохранения Российской Федерации по Государственной фармакопее и будут включены в приложение к XV изд. ГФ РФ.

ВЫВОДЫ

1. Результаты сравнительного анализа национальных и международных требований к качеству плазмы крови человека указали на необходимость создания современных подходов к стандартизации и контролю качества как ПДФ, так и плазмы вирусинактивированной российского производства.
2. В рамках гармонизации ГФ РФ с мировыми стандартами качества установлены требования к качеству плазмы крови человека, в том числе используемой для производства ЛП, с учетом национальных подходов.
3. На основе проведенного анализа национальных и международных требований к качеству плазмы крови человека, в том числе используемой для производства ЛП, подготовлены проекты ФС для ГФ РФ XV изд., отражающие современный уровень фармакопейной стандартизации.

Дополнительная информация. На сайте журнала «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение» размещена таблица S1.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-1-28-41-table-s1

Additional information. Table S1 is published on the website of Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-1-28-41-table-s1

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: О.А. Демидова — написание текста рукописи, формулирование выводов; О.Г. Корнилова — концепция работы, редактирование и критический пересмотр текста рукописи, утверждение окончательной версии рукописи для публикации; О.В. Муслимова — сбор, анализ и систематизация данных литературы; В.Л. Багирова — утверждение окончательной версии рукописи для публикации.

Authors’ contributions. All the authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. O.A. Demidova drafted the manuscript and formulated the conclusions. O.G. Kornilova conceptualized the work, critically revised and edited the manuscript, and approved the final version for publication. O.V. Muslimova collected, analyzed, and systematized literature data. V.L. Bagirova approved the final version of the manuscript for publication.