Certification of a pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to ragweed pollen allergen

L. V. Nevskaya; N. E. Petrova; V. K. Kapitanova; L. A. Gaiderova; O. V. Fadeikina; Л. В. Невская; Н. Э. Петрова; В. К. Капитанова; Л. А. Гайдерова; О. В. Фадейкина

doi:10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229

Аттестация фармакопейного стандартного образца лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии

Л. В. Невская, Н. Э. Петрова, В. К. Капитанова, Л. А. Гайдерова, О. В. Фадейкина

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229

Полный текст:

PDF (Rus) HTML XML Допфайлы

сгенерировать QR код

Содержание

Перейти к:

Резюме

ВВЕДЕНИЕ. Для оценки активности аллергенов методом конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) требуются стандартные образцы (СО) специфических сывороток, содержащих IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной. Однако международный и национальный стандарты такой сыворотки отсутствуют. Актуальной представляется разработка российского фармакопейного стандартного образца (ФСО) IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии.

ЦЕЛЬ. Аттестация кандидата в ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии (ФСО IgE-Амб) и оценка возможности его применения для определения концентрации IgE и активности аллергена.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Концентрацию аллергенспецифических IgE-антител в ФСО IgE-Амб определяли методом реверсивного аллергосорбентного теста (РЕАСТ) с помощью коммерческого набора реагентов российского производства. Подлинность ФСО IgE-Амб определяли согласно ОФС.1.7.2.0034.15 методом прямого ИФА. Испытания кандидата в ФСО по показателям качества «Описание», «Вода», «Однородность массы», «Растворимость», «Герметичность» проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации (ГФ РФ). Аллергенную активность оценивали методом конкурентного ИФА. Статистическую обработку данных проводили с использованием дисперсионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Аттестация кандидата в ФСО IgE-Амб проведена согласно утвержденной программе аттестации. Методом РЕАСТ определена аттестуемая характеристика ФСО IgE-Амб — концентрация специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии, составившая 27,02±4,6 МЕ/мл (4-й класс). Подтверждена специфичность связывания ФСО IgE-Амб с аллергеном пыльцы амброзии полыннолистной. Результаты испытаний кандидата в ФСО по дополнительным показателям качества («Описание», «Вода», «Однородность массы», «Растворимость», «Герметичность») соответствовали требованиям ГФ РФ. Показана возможность использования ФСО IgE-Амб для определения концентрации IgE-антител в референс-сыворотках предприятия методом прямого ИФА и оценки активности аллергена пыльцы амброзии методом конкурентного ИФА. Коэффициенты вариации между известным и определенными с помощью ФСО значениями составили 4,7% для прямого ИФА и 8,0% для конкурентного ИФА.

ВЫВОДЫ. Впервые аттестован российский ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии с установленной характеристикой — концентрацией специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной, определенной методом РЕАСТ. ФСО IgE-Амб соответствует требованиям ГФ РФ, рекомендован для включения в Реестр фармакопейных стандартных образцов ГФ РФ и обеспечивает возможность стандартизации аллергенов и референс-сывороток в Российской Федерации.

Ключевые слова

аллерген пыльцы амброзии, аллергены, аллергенная активность, иммуноферментный анализ, реверсивный аллергосорбентный тест, стандартный образец, ФСО, IgE, антитела, лиофилизированная сыворотка, дисперсионный анализ, аттестация

Для цитирования:

Невская Л.В., Петрова Н.Э., Капитанова В.К., Гайдерова Л.А., Фадейкина О.В. Аттестация фармакопейного стандартного образца лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2026;26(2):220-229. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229

For citation:

Nevskaya L.V., Petrova N.E., Kapitanova V.K., Gaiderova L.A., Fadeikina O.V. Certification of a pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to ragweed pollen allergen. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2026;26(2):220-229. (In Russ.) https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229

ВВЕДЕНИЕ

Одним из главных показателей качества препаратов аллергенов является оценка их специфической активности. У большинства российских препаратов аллергенов для оценки этого показателя применяются кожные пробы (прик-тест)¹ [1][2]. Кожные пробы проводят на пациентах с аллергическими заболеваниями, что представляет морально-этическую проблему, поскольку введение аллергена может быть опасным для здоровья (возможны местные кожные реакции и, крайне редко, системные осложнения — крапивница, анафилактический шок) [3][4]. Отказ от испытаний на людях при оценке аллергенной активности является актуальной задачей. За последние годы предприняты значительные усилия по разработке альтернативных методов in vitro, позволяющих оценивать качество лекарственных препаратов без использования животных [5].

В настоящее время применяют разные методы иммуноанализа, основанные на ингибировании связывающей активности сывороточного иммуноглобулина E (IgE) человека, специфичного к исследуемому аллергену, включая конкурентный иммуноферментный анализ (кИФА или ингибиция ИФА) [6][7]. Специфическую сыворотку для этого метода получают из крови пациентов с подтвержденным аллергическим заболеванием. Международные требования к концентрации аллергенспецифических IgE-антител в сыворотке крови не разработаны². Указание о том, что для исследований рекомендуется отбирать сыворотки с уровнем IgE-антител не менее 3-го класса (то есть сыворотки пациентов с выраженными клиническими проявлениями аллергического заболевания) имеется только в ОФС.1.7.2.0034.15³.

Для обеспечения единства и требуемой точности измерений в методиках рекомендуется использовать стандартные образцы (СО) — международные, национальные, фармакопейные и др. [7][8]. В настоящее время существует 4 международные референс-сыворотки (National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC), содержащих следующие специфические IgE-антитела: к аллергену грибов Aspergillus fumigatus (78/545); к аллергену пыльцы березы (76/525); к аллергену пыльцы ежи сборной (77/503); к аллергенам клещей Dermatophagoides pteronyssinus (77/584)⁴. Референс-сыворотка, содержащая IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии, отсутствует. Фармацевтические компании, выпускающие препараты аллергенов, для оценки их активности используют внутренние референс-образцы аллергенспецифических сывороток в жидком виде [1].

Данные о разработке в Российской Федерации СО сывороток, содержащих специфические IgE-антитела к определенному аллергену, отсутствуют. Ранее авторами разработана технология получения лиофилизированных форм концентрированных аллергенспецифических сывороток, которые могут быть использованы в качестве фармакопейных стандартных образцов (ФСО) со сроком годности не менее 7 лет [9]. По этой технологии впервые произведен кандидат в ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии.

Цель работы — аттестация кандидата в ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии (ФСО IgE-Амб) и оценка возможности его применения для определения концентрации IgE и активности аллергена.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалы:

кандидат в ФСО — лиофилизированная IgE-содержащая сыворотка к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной (ФСО IgE-Амб) (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России), срок годности 7 лет [9];
экспериментальная серия СО — лиофилизированная IgE-содержащая сыворотка к аллергену пыльцы амброзии (СО-Э IgE-Амб) (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России), концентрация IgE-антител — 16,12 МЕ/мл (3-й класс, метод РЕАСТ), срок годности 7 лет [9];
положительный контроль — контрольная аллергенспецифическая сыворотка крови человека, содержащая IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии (КС IgE-Амб), референс-сыворотка из набора реагентов «IgE-АТ-ИФТС» (АО «НПО «Микроген», Россия), срок годности 1 год;
отрицательный контроль — сыворотка, не содержащая IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии (АО «НПО «Микроген», Россия);
кандидат в ФСО аллергена пыльцы амброзии полыннолистной (ФСО АЛЛ-Амб), лиофилизат (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России), срок годности 5 лет;
СО аллергена пыльцы амброзии полыннолистной, лиофилизат, экспериментальная серия (СО-Э АЛЛ-Амб) (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России), срок годности 5 лет;
СО предприятия для оценки аллергенной активности аллергена пыльцы амброзии полыннолистной, жидкий, серия С1 (АО «НПО «Микроген», Россия), срок годности 2 года;
биотинилированный аллерген w1 амброзии обыкновенной (Ambrosia elatior) (ООО «Компания Алкор Био», Россия, кат № 300-29, кат. № 300-30-w1);
аллерген из клеща Dermatophagoides pteronyssinus (Dpte) для диагностики и лечения, серия С9Э (АО «НПО «Микроген», Россия);
аллергоид пыльцевой овсяницы луговой (Pfes) для лечения, серия С280223 (АО «НПО «Микроген», Россия);
набор реагентов для количественного иммуноферментного определения аллергенспецифических IgE-антител в сыворотке крови человека «АллергоИФА — специфические IgE» (ООО «Компания Алкор Био», Россия, кат. № 300-29);
планшеты 96-луночные для ИФА, стрипованные, MaxiSorb (Thermo Fisher Scientific, кат. № 469264).

Реактивы и реагенты

IgE-антитела козы против IgE человека, меченные пероксидазой хрена (goat anti-human IgE peroxidase labeled, KPL, США, кат. № 3074-1004); карбонат-бикарбонатный буфер (КББ), капсулы (Sigma-Aldrich, США, кат. № С30-41); фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) (Gibco, США, кат. № 14200-075); субстрат тетраметилбензидин, ТМБ (KPL, США, кат. № 5120-0038); полисорбат 20 (BioFroxx, Германия, кат. № 1247).

Оборудование

Анализатор Multiscan GO с программным обеспечением (Thermo Fisher Scientific, Финляндия); термошейкер Innova 4230 (New Brunswick Scientific Co., США); перемешивающее устройство (встряхиватель) Vortex Genie 2 G-560E (Binder & Hobein AG, США); устройство для промывки микропланшет Hydroflex (Tecan Group Ltd., Австрия); весы электронные Ohaus AR3130 (OHAUS Corporation, США); дозаторы переменных объемов (Sartorius biohit, Финляндия).

Методы

Реверсивный аллергосорбентный тест (РЕАСТ). РЕАСТ использовали для установления аттестуемой характеристики — количественного определения специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии — с помощью набора реагентов «АллергоИФА — специфические IgE» согласно инструкции по применению (рис. S1, опубликован на сайте журнала в Приложении 1⁵).

РЕАСТ основан на сэндвич-методе ИФА, особенность которого состоит в использовании жидких биотинилированных аллергенов. На первой стадии после внесения сывороток и жидких биотинилированных аллергенов в лунки Fc-фрагменты всех молекул IgЕ в сыворотке связываются с Fab-фрагментами сорбированных мышиных моноклональных антител, биотинилированный аллерген — с Fab-фрагментами IgЕ-антител, специфичных к данному аллергену (при их наличии в сыворотке крови). В лунки с калибраторами (разведения общего IgE) вносили анти-IgE-антитела, меченные биотином. На второй стадии добавляли конъюгат — стрептавидин-пероксидазу. В качестве индикатора использовали ТМБ [10]. Результаты регистрировали с помощью анализатора Multiscan GO.

Концентрацию аллергенспецифических IgE в ФСО IgE-Амб определяли в международных единицах (МЕ), где 1 МЕ/мл соответствует 2,4 нг IgE на 1 л, или 1 килоединице на 1 л (kU/L) [10][11], и в классах (в виде интервалов концентрации IgE в МЕ/мл).

Для испытаний использовали 9 флаконов кандидата в ФСО IgE-Амб. Каждый флакон тестировали в 6 повторностях. Испытания проводили три оператора в разные дни.

Критерии приемлемости испытания

Величина оптической плотности (ОП) фонового контроля — не более 0,12.
Значение коэффициента вариации (CV) — не более 10% (один оператор) и не более 20% (разные операторы).
Вычисленное значение концентрации IgE контрольной сыворотки (входит в состав набора) должно находиться в пределах от 1,0 до 1,9 МЕ/мл.

Метод ИФА. Показатель «Подлинность/Специфичность» определяли в соответствии с ОФС.1.7.2.0034.15⁶. ФСО АЛЛ-Aмб, аллерген Dpte и аллергоид Pfes сорбировали в лунки планшета в концентрации 1000 PNU/мл (protein nitrogen unit — единицы белкового азота)⁷. Сыворотки, специфичные к аллергену пыльцы амброзии (ФСО IgE-Амб и СО-Э IgE-Амб — препарат сравнения), восстанавливали в 1,0 мл воды и готовили серию последовательных двукратных разведений, которые вносили в лунки с вышеуказанными аллергенами (рис. S2, Приложение 1). Перекрестная реактивность должна отсутствовать: значения ОП сывороток в лунках с другими (неодноименными) аллергенами должны быть ниже, чем в лунках с одноименным аллергеном.

Критерии приемлемости испытания

Величина ОП фонового контроля — не более 0,12.
Величина ОП в лунках с аллергенспецифическими сыворотками без разведения — от 1,0 и выше.
Значение CV между одноименными лунками — не более 10%.
Результаты дисперсионного анализа (ANOVA) кривых «доза–ответ» для тестирования сывороток в лунках с одноименным аллергеном должны соответствовать следующим условиям: положительная зависимость между разведениями образцов и ОП, линейность и параллелизм кривых (табл. S1, Приложение 1).

Кулонометрический метод (метод Фишера). Показатель «Вода» оценивали в соответствии с ОФС.1.2.3.0002.15 методом Фишера⁸.

Весовой метод. Показатель «Однородность дозирования» оценивали в соответствии с ОФС.1.4.2.0008⁹.

Метод свечения. Показатель «Герметичность» определяли в соответствии с ОФС.1.4.2.0025¹⁰.

Визуальный метод. Показатель «Растворимость» определяли в соответствии с ОФС.1.2.1.0005¹¹.

Метод конкурентного ИФА (кИФА). Показатель «Аллергенная/специфическая активность» оценивали методом кИФА (модификация АО «НПО «Микроген», Россия) [1] (рис. S3, Приложение 1). В лунках планшета сорбировали аллерген, далее вносили пробу — смесь аллергена и специфической сыворотки, содержащей IgE-антитела (рис. S1, Приложение 1). Определяемый аллерген в пробе конкурирует с сорбированным аллергеном за связывание с антителами, и активность аллергена обратно пропорциональна его концентрации в пробе¹².

В качестве стандарта использовали СО предприятия (АО «НПО «Микроген», Россия) — жидкий аллерген пыльцы амброзии. СО предприятия сорбировали в концентрации 1000 PNU/мл. Ингибирующие растворы готовили в 6 последовательных разведениях СО предприятия и образца (СО-Э АЛЛ-Амб), к которым добавляли аллергенспецифические сыворотки: 1) контрольную сыворотку предприятия (КС IgE-Амб); 2) ФСО IgE-Амб. Специфическую активность выражали в единицах аллергенной активности — ЕАА/мл (100000 ЕАА соответствуют разведению, вызывающему кожную реакцию в виде папулы 8 мм у сенсибилизированных пациентов)¹³.

Критерии приемлемости испытания

Величина ОП фонового контроля — не более 0,12.
Величина ОП в лунках с минимальной концентрацией аллергена — от 0,80 и выше.
CV между значениями аллергенной активности, полученными с помощью разных сывороток, не должен превышать 25%.
Результаты дисперсионного анализа (ANOVA) кривых «доза-ответ» должны соответствовать следующим условиям: отрицательная зависимость между разведениями аллергена и величиной ОП, линейность и параллелизм кривых (согласно подразделу «Метод ИФА»).

Статистическая обработка данных. Значение аттестованной характеристики определяли как среднее арифметическое всех повторностей. Статистический анализ выполняли с использованием программ Multiscan Scanit RE, Microsoft Office Exсel, рассчитывая среднеарифметическое значение (M), стандартное отклонение (SD) и коэффициент вариации (CV). Статистический анализ кривых проводили с использованием программы PLA 2.0 (дисперсионный анализ методом параллельных линий)¹⁴.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Все испытания кандидата в ФСО лиофилизированной аллергенспецифической сыворотки, содержащей IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии (ФСО IgE-Амб), проведены согласно утвержденной программе аттестации.

Аттестуемая характеристика ФСО IgE-Амб

Аттестуемой характеристикой являлась концентрация аллергенспецифических IgE-антител, выраженная в МЕ/мл и в классах (табл. 1)¹⁵. Перевод значений IgE в классы необходим для сравнения, поскольку уровень IgE-антител одной и той же сыворотки, установленный с помощью разных наборов реагентов, может отличаться [12], тогда как в классах эти значения совпадают.

Таблица 1. Концентрация аллергенспецифических IgE-антител в сыворотке (МЕ/мл) с указанием класса

Table 1. Concentration of allergen-specific IgE antibodies in serum (IU/mL) and class

Концентрация IgE, МЕ/мл (кЕ/л)* IgE concentration, IU/mL (kU/L)*	Класс *Class*	Оценка *Assessment*
0–0,35	0	Отсутствует / Absent
0,351–0,69	1	Низкий / Low
0,70–3,49	2	Средний / Medium
3,50–17,49	3	Высокий / High
17,50–49,99	4	Очень высокий / Very high
50,0–100,0	5	Насыщенно высокий / Extremely high
Выше 100,0 / Above 100.0	6	Экстремально высокий / Exceedingly high

Таблица составлена авторами по данным источников, представленных в сноске¹⁶ / The table was compiled by the authors based on data from the sources cited in footnote¹⁶

Примечание. * — кЕ/л — килоединица на 1 л (эквивалентна МЕ/мл).

Note. *, kU/L, kilo-units per liter (equivalent to IU/mL).

Аттестованное значение кандидата в ФСО IgE-Амб — концентрация специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии — была определена с помощью набора реагентов «АллергоИФА — специфические IgE» (метод РЕАСТ), который используется для оценки сенсибилизации пациентов к различным аллергенам [13]. Выбор данного набора обусловлен тем, что это первая российская разработка, у которой подтверждена высокая специфичность по сравнению с эталонной для определения IgE тест-системой ImmunoCAP, аллергочип (коэффициент корреляции — 0,86–0,99) [2][10][14]. Набор реагентов «АллергоИФА — специфические IgE» показал хорошую корреляцию с набором «Тест-система иммуноферментная для определения аллергенспецифических IgE-антител человека IgE-АТ-ИФТС»¹⁷ (метод ИФА), в котором результаты выражаются к классах¹⁸ (интервалы концентраций, связанных с тяжестью заболевания) [2].

Для установления значения аттестуемой характеристики (концентрации IgE-антител в МЕ/мл) рассчитывали М, SD, CV и класс (табл. 2).

Таблица 2. Концентрация IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии, определенная разными операторами

Table 2. Concentration of IgE antibodies to the ragweed pollen allergen determined by different operators

Показатель *Parameter*	Концентрация IgE-антител (МЕ/мл) *IgE antibody concentration (IU/mL)*
Показатель *Parameter*	Оператор 1 *Operator 1*	Оператор 2 *Operator 2*	Оператор 3 *Operator 3*
Концентрация IgE (МЕ/мл) / IgE concentration (IU/mL)	26,69	26,41	27,97
SD	0,95	0,90	1,92
CV, %	3,55	3,40	6,87
ОП фоновых лунок / OD of blank wells	0,002	0,002	0,002
Концентрация IgE в КС (МЕ/мл) / IgE concentration in CS (IU/mL)	1,34	1,43	1,54
Аттестуемое значение, М±3SD (МЕ/мл / класс) Certified value, M±3SD (IU/mL / class)	27,02±4,60 / 4-й класс 27.02±4.60 / class 4

Таблица составлена авторами по собственным данным / The table was prepared by the authors using their own data

Примечание. КС — контрольная сыворотка; ОП — оптическая плотность; SD — стандартное отклонение; CV — коэффициент вариации.

Note. CS, control serum; OD, optical density; SD, standard deviation; CV, coefficient of variation.

Аттестованное значение аллергенспецифических IgE-антител составило 27,02±4,60 МЕ/мл (4-й класс), что соответствовало рекомендованным значениям (не ниже 3-го класса)¹⁹. Полученные результаты соответствовали критериям приемлемости.

Оценка подлинности ФСО IgE-Амб

Определение подлинности проводили согласно программе аттестации по ОФС.1.7.2.0034.15 методом прямого ИФА²⁰. Результаты испытаний представлены на рисунке 1.

Рисунок подготовлен авторами по собственным данным / The figure was prepared by the authors using their own data

Рис. 1. Результаты оценки подлинности/специфичности исследуемых образцов. ФСО АЛЛ-Амб — кандидат в фармакопейный стандартный образец аллергена пыльцы амброзии полыннолистной (красная линия); СО-Э АЛЛ-Амб — стандартный образец аллергена пыльцы амброзии полыннолистной, лиофилизат, экспериментальная серия (синяя линия); Dpte — аллерген из клеща Dermatophagoides pteronyssinus (черная линия); Pfes — аллергоид овсяницы луговой (черная пунктирная линия).

Fig. 1. Results of authenticity/specificity assessment of the tested samples. PhRS ALL-Amb, candidate for pharmacopoeial reference standard of common ragweed pollen allergen (red line); RS-E ALL-Amb, reference standard of common ragweed pollen allergen, lyophilizate, experimental series (blue line); Dpte, allergen from the mite Dermatophagoides pteronyssinus (black line); Pfes, meadow fescue allergoid (black dashed line).

По результатам испытаний подтверждена специфичность связывания исследуемых СО (ФСО IgE-Амб и СО-Э IgE-Амб) с одноименным аллергеном — аллергеном пыльцы амброзии полыннолистной (ФСО АЛЛ-Амб). Перекрестные реакции с аллергенами других наименований (Dpte и Pfes) — отсутствовали. Полученные результаты соответствовали критериям приемлемости²¹. Вычисленная относительно ФСО концентрация IgE-антител в образце СО-Э IgE-Амб составила 16,12 МЕ/мл, что сопоставимо с известным значением, полученным методом РЕАСТ (15,08 МЕ/мл), коэффициент вариации между значениями составил 4,7%.

Дополнительные показатели качества ФСО IgE-Амб

В соответствии с программой аттестации были проведены испытания ФСО IgE-Амб по следующим дополнительным показателям: «Описание», «Вода», «Однородность массы», «Растворимость», «Герметичность». Необходимость проведения испытаний по этим показателям обусловлена требованиями ВОЗ к стандартным образцам и ОФС.1.4.1.0031²². Все результаты испытаний соответствовали нормам, приведенным в таблице 3.

Таблица 3. Результаты испытаний по дополнительным показателям кандидата в фармакопейный стандартный образец лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной (ФСО IgE-Амб)

Table 3. Results of additional tests for the candidate pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to common ragweed pollen allergen (PhRS IgE-Amb)

Показатель (метод)

Parameter (method)

Требование

Requirement

Результат

Result

Описание (визуальный)

Description (visual)

Лиофилизат должен быть в виде таблетки от светло-желтого до темно-желтого цвета. Восстановленный раствор: непрозрачная жидкость от светло-желтого до темно-желтого цвета, допустимо выпадение небольшого осадка

The lyophilizate should be a light yellow to dark yellow tablet. Reconstituted solution: opaque liquid, light yellow to dark yellow, a small amount of precipitate is acceptable

Лиофилизат — таблетка светло-желтого цвета. Восстановленный раствор: непрозрачная жидкость желтого цвета

Lyophilizate is a light yellow tablet. Reconstituted solution: opaque yellow liquid

Подлинность (ИФА)

Identity (ELISA)

Оптическая плотность для кандидата в ФСО IgE-Амб без разведения в лунках с аллергеном пыльцы амброзии полыннолистной должна быть выше 1,0

Optical density for the candidate for the PhRS IgE-Amb without dilution in wells with common ragweed pollen allergen should be higher than 1.0

3,66

Однородность массы (весовой)

Uniformity of mass (weight)

Отклонение массы содержимого 10 флаконов от средней массы не должно превышать ±10%. Не более 2 флаконов могут иметь массу содержимого, отличающуюся от средней массы более чем на ±10%, но не более чем на ±20%

Deviation of the content mass of 10 vials from the average mass should not exceed ±10%. No more than 2 vials may have a content mass that differs from the average mass by more than ±10%, but not more than ±20%

1,5

Герметичность (метод свечения)

Leakproofness (glow method)

Должно наблюдаться голубое свечение

A blue glow should be observed

Наблюдается голубое свечение

A blue glow is observed

Растворимость (визуальный)

Solubility (visual)

Содержимое флакона растворяется в воде в течение 1 мин

Vial contents dissolve in water within 1 min

<1 мин

<1 min

Вода (метод Фишера)

Water (Fischer's method)

Не более 3,0%

Not more than 3.0%

0,57

Таблица составлена авторами по собственным данным / The table was prepared by the authors using their own data

Применение ФСО IgE-Амб для оценки аллергенной активности методом конкурентного ИФА

Для проведения исследования использовали два вида раствора для ингибиции: 1 — смесь аллергена и контрольной сыворотки (КС IgE-Амб), 2 — смесь аллергена и ФСО IgE-Амб. Для статистической обработки результатов использовали программу PLA 2.0 (табл. 4). Полученные результаты соответствовали критериям приемлемости и показали, что ФСО IgE-Амб может быть использован для оценки активности аллергенов методом кИФА.

Таблица 4. Активность стандартного образца аллергена пыльцы амброзии полыннолистной методом конкурентного ИФА

Table 4. Activity of the reference standard of common ragweed pollen allergen by competitive ELISA

Параметр *Parameter*	Аллергенспецифическая сыворотка / Allergen-specific serum
	КС IgE-Амб / CS IgE-Amb	ФСО IgE-Амб / PhRS IgE-Amb
Активность (ЕАА/мл) / Activity (UAA/mL)	345204	306245
CV, %	8,0

Таблица составлена авторами по собственным данным / The table was prepared by the authors using their own data

Примечание. КС IgE-Амб — контрольная аллергенспецифическая сыворотка крови человека, содержащая IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии; ФСО IgE-Амб — фармакопейный стандартный образец лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной; ЕАА — единицы аллергенной активности; СV — коэффициент вариации.

Note. CS IgE-Amb, control allergen-specific human serum containing IgE antibodies to ragweed pollen allergen; PhRS IgE-Amb, pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to common ragweed pollen allergen; UAA, units of allergenic activity; CV, coefficient of variation.

Таким образом, проведена аттестация первого российского ФСО IgE-содержащей сыворотки, международные аналоги которого отсутствуют. Аттестуемая характеристика — концентрация IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии — установлена методом РЕАСТ с помощью российского набора реагентов, имеющего высокую корреляцию с аллергочипом ImmunoCAP, обладающим значительно более высокой стоимостью [2][10]. ФСО IgE-Амб имеет больший срок годности (7 лет) по сравнению с аналогом российского производства — жидкой референс-сывороткой (1 год)²³. По истечении 7 лет планируется проводить ежегодный ретест ФСО для продления срока годности до 10 лет, как рекомендовано для международных СО²⁴. ФСО IgE-Амб может быть использован для аттестации СО предприятий — как препаратов аллергенов, так и аллергенспецифических референс-сывороток.

ВЫВОДЫ

Аттестуемая характеристика — концентрация специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной, установленная методом РЕАСТ, составила 27,02±4,6 МЕ/мл (4-й класс).
ФСО IgE-Амб соответствует требованиям, предъявляемым к стандартным образцам, и может быть использован для определения концентрации IgE-антител в референс-сыворотках предприятия методом прямого ИФА, а также для оценки специфической (аллергенной) активности методом конкурентного ИФА.
По результатам аттестации ФСО IgE-Амб рекомендован для включения в Реестр фармакопейных стандартных образцов ГФ РФ, что позволит проводить стандартизацию аллергенов и референс-сывороток в Российской Федерации.

Дополнительная информация. На сайте журнала «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение» опубликовано Приложение 1.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229-annex

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: Л.В. Невская — разработка программы аттестации, проведение экспериментальных исследований, анализ и статистическая обработка данных, оформление и интерпретация результатов; написание текста рукописи, формулировка выводов; Н.Э. Петрова, В.К. Капитанова — проведение экспериментальных исследований, интерпретация результатов, формулировка выводов, анализ данных литературы; Л.А. Гайдерова — обсуждение программы аттестации, анализ результатов исследования, редактирование выводов, утверждение окончательной версии статьи для публикации; О.В. Фадейкина — утверждение программы аттестации, анализ результатов исследования, редактирование текста рукописи.

Supplementary information. Supplementary material 1 is available on the website of Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment.

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229-annex

Author contributions. All authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. L.V. Nevskaya designed the certification program, conducted experimental studies, performed statistical data analysis, organized and interpreted the results, drafted the manuscript, and formulated the conclusions. N.E. Petrova, and V.K. Kapitanova conducted experimental studies, interpreted the results, formulated the conclusions, and analyzed the literature data. L.A. Gaiderova discussed the certification program, analyzed the study results, edited the conclusions, and approved the final version of the article for publication. O.V. Fadeikina approved the certification program, analyzed the study results, and edited the manuscript text.

1. ОФС.1.7.2.0040.18 Определение специфической (аллергенной) активности аллергенов и аллергоидов методом кожных проб. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

2. Guideline on allergen products: production and quality issues (EMEA/CHMP/BWP/304831/2007). EMEA; 2007.

3. ОФС.1.7.2.0034.15 Определение подлинности аллергенов. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

4. https://nibsc.org/products/brm_product_catalogue/sub_category_listing.aspx?category=Diagnostics&subcategory=Immunoglobulins+and+immune+sera

5. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229-annex

6. ОФС. 1.7.2.0034.15 Определение подлинности аллергенов Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

7. ОФС.1.7.2.0040.18 Определение специфической (аллергенной) активности аллергенов и аллергоидов методом кожных проб. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

8. ОФС.1.2.3.0002.15 Определение воды. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

9. ОФС.1.4.2.0008 Однородность дозирования. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2023.

10. ОФС.1.4.2.0025 Определение герметичности упаковки. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2023.

11. ОФС.1.2.1.0005 Растворимость. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2023.

12. Спирина ЛВ. Иммунохимические методы. ИФА — иммуноферментный анализ. https://en.ppt-online.org/202167

13. ОФС.1.7.2.0040.18 Определение специфической (аллергенной) активности аллергенов и аллергоидов методом кожных проб. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

14. PLA 2.0. https://www.stegmanns.com

15. https://helix.ru/kb/item/21-622

https://dermnetnz.org/topics/immunoglobulin-e-tests

16. https://helix.ru/kb/item/21-622

https://dermnetnz.org/topics/immunoglobulin-e-tests

17. Отчет по НИР ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, 2019–2023 гг. «Разработка перспективных направлений совершенствования экспертизы качества, эффективности и безопасности биологических лекарственных препаратов и стандартизации методов их оценки».

18. Инструкция к набору реагентов «Тест-система иммуноферментная для определения аллергенспецифических IgE-антител человека IgE-АТ-ИФТС». АО «НПО «Микроген».

19. ОФС.1.7.2.0034.15 Определение подлинности аллергенов. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.

20. Там же.

21. Симушкин СВ. Методические разработки по специальному курсу Дисперсионный анализ. Казань: Казанский государственный университет; 1998.

ОФС.1.1.0013 Статистическая обработка результатов физических, физико-химических и химических испытаний. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2023.

22. Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference standards, Annex 2, TRS No 932. WHO; 2026.

ОФС.1.4.1.0031 Лиофилизаты. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2023.

23. Паспорт на набор реагентов «Тест-система иммуноферментная для определения аллергенспецифических IgE-антител IgE-АТ-ИФТС». АО «НПО «Микроген».

24. Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference standards, Annex 2, TRS No 932. WHO; 2026.

Список литературы

1. Саканян ЕИ, Ясная МА, Вуль ВФ и др. Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов: современные аспекты стандартизации. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023; 23(3–1):367–78. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-3-1-367-378

2. Невская ЛВ, Капитанова ВК, Петрова НЭ. Сравнительный анализ современных методов диагностики аллергических реакций немедленного типа. Иммунология. 2020;41(4):363–9. https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-363-369

3. Гаджимагомедова ШС, Гебекова МБ, Маликова МД. Морально-этические проблемы проведения клинических испытаний и экспериментов на человеке. Образование и право. 2023;(10):182–6. EDN: XMPSLK

4. Балаболкин ИИ, Мачарадзе ДШ. Кожные пробы: показания и противопоказания. Вопросы современной педиатрии. 2013;12(3):31–7. EDN: RASZGX

5. Гайдерова ЛА, Алпатова НА, Головинская ОВ и др. Реализация концепции 3Rs при контроле качества биологических лекарственных препаратов: современное состояние и перспективы (обзор). Безопасность и риск фармакотерапии. 2025;13(2):229–40. https://doi.org/10.30895/2312-7821-2025-13-2-229-240

6. Zimmer J, Vieths S, Kaul S. Standardization and regulation of allergen products in the European Union. Curr Allergy Asthma Rep. 2016;16(3):1621. https://doi.org/10.1007/s11882-016-0599-4

7. Zimmer J, Bridgewater J, Ferreira F, et al. The history, present and future of allergen standardization in the United States and Europe. Front Immunol. 2021;12:725831. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.725831

8. Комаровская ЕИ, Фадейкина ОВ, Лыско КА и др. Аттестация фармакопейного стандартного образца для оценки специфической активности адсорбированного столбнячного анатоксина на морских свинках. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2025;25(2):182–92. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-2-182-192

9. Невская ЛВ, Воропаев АА, Фадейкина ОВ и др. Способ получения лиофилизированной формы стандартного образца сыворотки, содержащего аллергенспецифический иммуноглобулин Е (варианты). Патент Российской Федерации № 2802333; 2022. EDN: QGSUMA

10. Кочиш ЛТ, Мухортых ОЮ, Иванова НА, Кузьмина ГА. Сравнительная характеристика тест-системы «АллергоИФА — специфические IgE» ООО «Компания АлкорБио» и «ImmuCap» фирмы Phadia. Справочник заведующего КДЛ. 2012;(5):37–43. EDN: QBPCNR

11. Мокроносова МА Диагностическое значение уровня общего IgE, основного маркера аллергической патологии. Лабораторная служба. 2015;4(3):10–4. https://doi.org/10.17116/labs20154310-14

12. Filep S, Tsay A, Valies L, et al. A multi-allergen standard for calibration of immunoassay: CREATE principles applied to eight purifiled allergens. Allergy. 2012;67(2):235–41. https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2011.02750.x

13. Козлова ЯИ, Васильев НЮ, Фролова ЕВ и др. Спектр сенсибилизации к аэроаллергенам как один из факторов риска неконтролируемого течения тяжелой бронхиальной астмы. Российский аллергологический журнал. 2023;20(3):275–86. https://doi.org/10.36691/RJA15043

14. Литовкина АО, Бязрова МГ, Смольников ЕИ и др. Особенности молекулярного профиля сенсибилизации у пациентов с аллергией на пыльцу березы и перекрестной пищевой аллергией к PR-10 белкам. Российский аллергологический журнал. 2023;20(4):464–75. https://doi.org/10.36691/RJA16901

Об авторах

Л. В. Невская

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Россия

Невская Лариса Валерьевна, канд. биол. наук