biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2026-26-2-220-229biopreparat-751Research ArticleСТАНДАРТИЗАЦИЯ И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВАQUALITY CONTROL AND STANDARDISATIONАттестация фармакопейного стандартного образца лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзииCertification of a pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to ragweed pollen allergenhttps://orcid.org/0000-0001-5371-8532НевскаяЛ. В.NevskayaL. V.

Невская Лариса Валерьевна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Larisa V. Nevskaya, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd., Moscow 127051

Nevskaya@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7333-1076ПетроваН. Э.PetrovaN. E.

Петрова Надежда Эдуардовна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Nadezhda E. Petrova, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd., Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0001-8422-3452КапитановаВ. К.KapitanovaV. K.

Капитанова Вера Константиновна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Vera K. Kapitanova

8/2 Petrovsky Blvd., Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0002-6176-5934ГайдероваЛ. А.GaiderovaL. A.

Гайдерова Лидия Александровна, канд. мед. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Lidiya A. Gaiderova, Cand. Sci. (Med.)

8/2 Petrovsky Blvd., Moscow 127051

https://orcid.org/0000-0002-8473-7442ФадейкинаО. В.FadeikinaO. V.

Фадейкина Ольга Васильевна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga V. Fadeikina, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd., Moscow 127051

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation202604072026262220229Copyright © Невская Л.В., Петрова Н.Э., Капитанова В.К., Гайдерова Л.А., Фадейкина О.В., 20262026Невская Л.В., Петрова Н.Э., Капитанова В.К., Гайдерова Л.А., Фадейкина О.В.Nevskaya L.V., Petrova N.E., Kapitanova V.K., Gaiderova L.A., Fadeikina O.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/751ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Для оценки активности аллергенов методом конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) требуются стандартные образцы (СО) специфических сывороток, содержащих IgE-антитела к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной. Однако международный и национальный стандарты такой сыворотки отсутствуют. Актуальной представляется разработка российского фармакопейного стандартного образца (ФСО) IgE-­содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Аттестация кандидата в ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии (ФСО IgE-Амб) и оценка возможности его применения для определения концентрации IgE и активности аллергена.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Концентрацию аллергенспецифических IgE-антител в ФСО IgE-Амб определяли методом реверсивного аллергосорбентного теста (РЕАСТ) с помощью коммерческого набора реагентов российского производства. Подлинность ФСО IgE-Амб определяли согласно ОФС.1.7.2.0034.15 методом прямого ИФА. Испытания кандидата в ФСО по показателям качества «Описание», «Вода», «Однородность массы», «Растворимость», «Герметичность» проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации (ГФ РФ). Аллергенную активность оценивали методом конкурентного ИФА. Статистическую обработку данных проводили с использованием дисперсионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Аттестация кандидата в ФСО IgE-Амб проведена согласно утвержденной программе аттестации. Методом РЕАСТ определена аттестуемая характеристика ФСО IgE-Амб — концентрация специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии, составившая 27,02±4,6 МЕ/мл (4-й класс). Подтверждена специфичность связывания ФСО IgE-Амб с аллергеном пыльцы амброзии полыннолистной. Результаты испытаний кандидата в ФСО по дополнительным показателям качества («Описание», «Вода», «Однородность массы», «Растворимость», «Герметичность») соответствовали требованиям ГФ РФ. Показана возможность использования ФСО IgE-Амб для определения концентрации IgE-антител в референс-сыворотках предприятия методом прямого ИФА и оценки активности аллергена пыльцы амброзии методом конкурентного ИФА. Коэффициенты вариации между известным и определенными с помощью ФСО значениями составили 4,7% для прямого ИФА и 8,0% для конкурентного ИФА.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Впервые аттестован российский ФСО лиофилизированной IgE-содержащей сыворотки к аллергену пыльцы амброзии с установленной характеристикой — концентрацией специфических IgE-антител к аллергену пыльцы амброзии полыннолистной, определенной методом РЕАСТ. ФСО IgE-Амб соответствует требованиям ГФ РФ, рекомендован для включения в Реестр фармакопейных стандартных образцов ГФ РФ и обеспечивает возможность стандартизации аллергенов и референс-сывороток в Российской Федерации.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. The assessment of allergen activity by competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) requires reference standards (RS) of specific sera containing IgE antibodies to the common ragweed pollen allergen. However, neither an international nor a national standard for such serum is available. Therefore, the development of a Russian pharmacopoeial reference standard (PhRS) for IgE-containing serum to common ragweed pollen allergen is relevant.

AIM

AIM. This study aimed to certify a candidate for the pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to common ragweed pollen allergen (PhRS IgE-Amb) and to evaluate the feasibility of its use for determining IgE concentration and allergen activity.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. The concentration of allergen-specific IgE antibodies in the candidate for the PhRS IgE-Amb was determined by reverse allergosorbent test (REAST) using a commercial reagent kit manufactured in Russia. The identity of the candidate for the PhRS IgE-Amb was determined according to General Pharmacopoeia Monograph 1.7.2.0034.15 by direct ELISA. Tests of the candidate for the PhRS IgE-Amb for the quality attributes (Description, Water, Mass homogeneity, Solubility, and Tightness) were conducted in accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation (SP RF). Allergenic activity was assessed by competitive ELISA. Statistical analysis was performed using analysis of variance (ANOVA).

RESULTS

RESULTS. The candidate for the PhRS IgE-Amb was certified according to the approved certification program. The certified characteristic of the PhRS IgE-Amb, i.e., the concentration of specific IgE antibodies to common ragweed pollen allergen, was determined by the REAST method and found to be 27.02±4.6 IU/mL (class 4). The specificity of binding of the PhRS IgE-Amb to common ragweed pollen allergen was confirmed. The results of tests for additional quality attributes (Description, Water, Mass homogeneity, Solubility, Tightness) met the requirements of the SP RF. The feasibility of using the PhRS IgE-Amb for determining the concentration of IgE antibodies in enterprise reference sera by direct ELISA and for assessing common ragweed pollen allergen activity by competitive ELISA was demonstrated. The coefficients of variation between the known values and those determined using the RS were 4.7% for direct ELISA and 8.0% for competitive ELISA.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. For the first time, a Russian pharmacopoeial reference standard of lyophilized IgE-containing serum to common ragweed pollen allergen has been certified with the established characteristic — the concentration of specific IgE antibodies to common ragweed pollen allergen determined by REAST. The PhRS IgE-Amb complies with the requirements of the SP RF, is recommended for inclusion in the State Register of Reference Standards, and enables the standardization of allergens and reference sera in the Russian Federation.

аллерген пыльцы амброзииаллергеныаллергенная активностьиммуноферментный анализреверсивный аллергосорбентный тестстандартный образецФСОIgEантителалиофилизированная сывороткадисперсионный анализаттестацияragweed pollen allergenallergensallergenic activityELISAreverse allergosorbent testreference standardPhRSIgEantibodylyophilized serumanalysis of variancecertificationРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00061-26-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР № 124022200103-5)This study was conducted at the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products as part of the applied research funded under State Assignment No. 056-00061-26-00 (R&D state registration No. 124022200103-5)ReferencesСаканян ЕИ, Ясная МА, Вуль ВФ и др. Лекарственные препараты пыльцевых аллергенов: современные аспекты стандартизации. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023; 23(3–1):367–78. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-3-1-367-378Sakanyan EI, Yasnaya MА, Vul VF, et al. Pollen allergen products: Current standardisation issues. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2023;23(3–1):367–78 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-3-1-367-378Невская ЛВ, Капитанова ВК, Петрова НЭ. Сравнительный анализ современных методов диагностики аллергических реакций немедленного типа. Иммунология. 2020;41(4):363–9. https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-363-369Nevskaya LV, Kapitanova VK, Petrova NE. Comparative analysis of modern methods for diagnostics of immediate allergic reactions. Immunologiya. 2020;41(4):363–9 (In Russ.). https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-363-369Гаджимагомедова ШС, Гебекова МБ, Маликова МД. Морально-этические проблемы проведения клинических испытаний и экспериментов на человеке. Образование и право. 2023;(10):182–6. EDN: XMPSLKGadzhimagomedova ShS, Gebekova MB, Malikova MD. Moral and ethical problems of conducting clinical trials and experiments on humans. Education and Law. 2023;(10):182–6 (In Russ.). EDN: XMPSLKБалаболкин ИИ, Мачарадзе ДШ. Кожные пробы: показания и противопоказания. Вопросы современной педиатрии. 2013;12(3):31–7. EDN: RASZGXBalabolkin II, Macharadze DSh. Skin tests: Indications and contraindications. Current Pediatrics. 2013;12(3):31–7 (In Russ.). EDN: RASZGXГайдерова ЛА, Алпатова НА, Головинская ОВ и др. Реализация концепции 3Rs при контроле качества биологических лекарственных препаратов: современное состояние и перспективы (обзор). Безопасность и риск фармакотерапии. 2025;13(2):229–40. https://doi.org/10.30895/2312-7821-2025-13-2-229-240Gayderova LA, Alpatova NА, Golovinskaya OV, et al. Implementation of the 3Rs concept in quality control of biologicals: Status and prospects (review). Safety and Risk of Pharmacotherapy. 2025;13(2):229–40 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2312-7821-2025-13-2-229-240Zimmer J, Vieths S, Kaul S. Standardization and regulation of allergen products in the European Union. Curr Allergy Asthma Rep. 2016;16(3):1621. https://doi.org/10.1007/s11882-016-0599-4Zimmer J, Vieths S, Kaul S. Standardization and regulation of allergen products in the European Union. Curr Allergy Asthma Rep. 2016;16(3):1621. https://doi.org/10.1007/s11882-016-0599-4Zimmer J, Bridgewater J, Ferreira F, et al. The history, present and future of allergen standardization in the United States and Europe. Front Immunol. 2021;12:725831. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.725831Zimmer J, Bridgewater J, Ferreira F, et al. The history, present and future of allergen standardization in the United States and Europe. Front Immunol. 2021;12:725831. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.725831Комаровская ЕИ, Фадейкина ОВ, Лыско КА и др. Аттестация фармакопейного стандартного образца для оценки специфической активности адсорбированного столбнячного анатоксина на морских свинках. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2025;25(2):182–92. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-2-182-192Komarovskaya EI, Fadeikina OV, Lysko KA, et al. Certification of a pharmacopoeial reference standard for potency testing of adsorbed tetanus toxoid in guinea pigs. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2025;25(2):182–92 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-2-182-192Невская ЛВ, Воропаев АА, Фадейкина ОВ и др. Способ получения лиофилизированной формы стандартного образца сыворотки, содержащего аллергенспецифический иммуноглобулин Е (варианты). Патент Российской Федерации № 2802333; 2022. EDN: QGSUMANevskaya LV, Voropaev AA, Fadeikina OV, et al. Method of obtaining lyophilized form of serum reference sample containing allergen-specific immunoglobulin E (versions). Patent of the Russian Fede­ration No. 2802333; 2022 (In Russ.). EDN: QGSUMAКочиш ЛТ, Мухортых ОЮ, Иванова НА, Кузьмина ГА. Сравнительная характеристика тест-системы «Аллерго­ИФА — специфические IgE» ООО «Компания АлкорБио» и «ImmuCap» фирмы Phadia. Справочник заведующего КДЛ. 2012;(5):37–43. EDN: QBPCNRKochish LT, Mukhortykh OYu, Ivanova NA, Kuzmina GA. Comparative characteristics of the test system “AllergoIFA — distinctive IgE” of AlkorBio Company LLC and “ImmuCap” of Phadia. Handbook of the Head of the Clinical Diagnostic Laboratory. 2012;(5):37–43 (In Russ.). EDN: QBPCNRМокроносова МА Диагностическое значение уровня общего IgE, основного маркера аллергической патологии. Лабораторная служба. 2015;4(3):10–4. https://doi.org/10.17116/labs20154310-14Mokronosova MA. Diagnostic value of serum total IgE the primary marker of allergic diseases. Laboratory Service. 2015;4(3):10–4 (In Russ.). https://doi.org/10.17116/labs20154310-14Filep S, Tsay A, Valies L, et al. A multi-allergen standard for calibration of immunoassay: CREATE principles applied to eight purifiled allergens. Allergy. 2012;67(2):235–41. https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2011.02750.xFilep S, Tsay A, Valies L, et al. A multi-allergen standard for calibration of immunoassay: CREATE principles applied to eight purifiled allergens. Allergy. 2012;67(2):235–41. https://doi.org/10.1111/j.1398-9995.2011.02750.xКозлова ЯИ, Васильев НЮ, Фролова ЕВ и др. Спектр сенсибилизации к аэроаллергенам как один из факторов риска неконтролируемого течения тяжелой бронхиальной астмы. Российский аллергологический журнал. 2023;20(3):275–86. https://doi.org/10.36691/RJA15043Kozlova YaI, Vasiliev NYu, Frolova EV, et al. Spectrum of sensitization to aeroallergens as one of the risk factors for uncontrolled severe asthma. Russian Journal of Allergy. 2023;20(3):275–86 (In Russ.). https://doi.org/10.36691/RJA15043Литовкина АО, Бязрова МГ, Смольников ЕИ и др. Особенности молекулярного профиля сенсибилизации у пациентов с аллергией на пыльцу березы и перекрестной пищевой аллергией к PR-10 белкам. Российский аллергологический журнал. 2023;20(4):464–75. https://doi.org/10.36691/RJA16901Litovkina AO, Byazrova MG, Smolnikov EV, et al. Characteristics of the molecular sensitization profiles in patients with birch pollen allergy and cross-reactive food allergy to PR-10 proteins. Russian Journal of Allergy. 2023;20(4):464–75 (In Russ.). https://doi.org/10.36691/RJA16901

The authors declare that there are no conflicts of interest present.