Оценка диагностической эффективности набора реагентов для in vitro диагностики лихорадки Западного Нила методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией и гибридизационно-флуоресцентной детекцией

Лихорадка Западного Нила — зоонозная природно-очаговая арбовирусная инфекция с трансмиссивным механизмом передачи возбудителя. Заболевание протекает в виде острого лихорадочного интоксикационного синдрома, в тяжелых случаях — с развитием нейроинфекции. Выделяют несколько генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила, ВЗН (West Nile virus, WNV), циркулирующих на территории Российской Федерации и имеющих разную патогенность для человека. В связи с этим разработка и внедрение в клиническую лабораторную практику диагностического набора реагентов для дифференциации генотипов ВЗН является актуальной задачей.

Цель работы: проведение технических и клинических испытаний для оценки качества, эффективности и безопасности диагностического набора реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» для выявления РНК и дифференциации генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией и гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Материалы и методы: определение диагностической чувствительности и специфичности набора реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» (ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора) проводили методом ОТ-ПЦР-РВ с использованием 216 образцов клинического и 204 образцов биологического материала. В качестве метода сравнения применяли секвенирование по Сенгеру. Статистическую обработку результатов клинических испытаний проводили в соответствии с ГОСТ Р 53022.3-2008.

Результаты: в ходе испытаний установлено, что аналитическая чувствительность ОТ-ПЦР-РВ c набором реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» составила 1×10⁴ ГЭ/мл при выявлении кДНК ВЗН генотипов 1, 2, 4. При оценке специфичности набора положительных результатов с кДНК гетерологичных вирусов в пробах с концентрацией 1×10⁶ ГЭ/мл не выявлено. Диагностическая чувствительность набора реагентов составила не менее 98,5%, диагностическая специфичность — не менее 99%, при доверительной вероятности 90% при анализе каждого из показателей.

Выводы: набор реагентов «Амплиген-WNV-генотип-1/2/4» может быть рекомендован для применения в клинической лабораторной диагностике для обнаружения РНК и дифференциации генотипов (1, 2, 4) вируса Западного Нила.

1. Львов ДК, ред. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: МИА; 2013.

2. Habarugira G, Suen WW, Hobson-Peters J, Hall RA, Bielefeldt-Ohmann H. West Nile virus: an update on pathobiology, epidemiology, diagnostics, control and «One health» implications. Pathogens. 2020;9(7):589. https://doi.org/10.3390/pathogens9070589

3. Ferrarini I, Rigo A, Gandini A, Vinante F. West Nile virus encephalitis in haematological setting: report of two cases and a brief review of the literature. Mediterr J Hematol Infect Dis. 2019;11(1):e2019033. https://doi.org/10.4084/MJHID.2019.033

4. Popescu CP, Florescu SA, Cotar AI, Badescu D, Ceianu CS, Zaharia M, et al. Re-emergence of severe West Nile virus neuroinvasive disease in humans in Romania, 2012 to 2017—implications for travel medicine. Travel Med Infect Dis. 2018;22:30–5. https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2018.03.001

5. Byas AD, Ebel GD. Comparative pathology of West Nile virus in humans and non-human animals. Pathogens. 2020;9(1):48. https://doi.org/10.3390/pathogens9010048

6. Топорков АВ, ред. Лихорадка Западного Нила. Волгоград: Волга-Пресс; 2017.

7. Путинцева ЕВ, Удовиченко СК, Бородай НВ, Никитин ДН, Батурин АА, Молчанова ЕВ и др. Особенности эпидемиологической ситуации по лихорадке Западного Нила в Российской Федерации в 2020 г. и прогноз ее развития в 2021 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2021;(1):63–72. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2021-1-63-72

8. Батурин АА, Ткаченко ГА, Леденева МЛ, Лемасова ЛВ, Бондарева ОС, Кайсаров ИД и др. Молекулярно-генетический анализ вариантов вируса Западного Нила, циркулировавших на территории европейской части России в 2010–2019 гг. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2021;98(3):308–18. https://doi.org/10.36233/0372-9311-85

9. Платонов АЕ, Карань ЛС, Шопенская ТА, Федорова МВ, Колясникова НМ, Русакова НМ и др. Генотипирование штаммов вируса лихорадки Западного Нила, циркулирующих на юге России, как метод эпидемиологического расследования: принципы и результаты. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2011;88(2):29–37.

10. Жуков КВ, Топорков АВ, Викторов ДВ. Эпидемиологические аспекты и современная эволюция глобально распространяющихся арбовирусов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2018;95(6):94–102. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2018-6-94-102