Характеристика чувствительности новых клеточных культур животного происхождения к вирусам Coxsackievirus B5 и Herpes simplex virus‑1

Расширение номенклатуры клеточных культур для вирусологии и биотехнологии повышает вероятность успешного реагирования на угрозы, связанные со вспышками известных и новых инфекционных заболеваний человека. Поиск восприимчивых к широкому спектру вирусов клеточных культур является актуальной задачей.

Цель работы: изучить чувствительность новых диплоидных клеточных культур животного происхождения (фибробласты почки и гортани плода свиньи) к вирусам Coxsackievirus B5 (CVB5) и Herpes simplex virus-1 (HSV-1).

Материалы и методы: клеточные культуры фибробластов почки и гортани плода здоровой свиноматки получены методом щадящей трипсинизации. Чувствительность новых клеточных культур фибробластов почки и гортани плода свиньи (ФППС и ФГПС) к указанным вирусам определяли по степени цитопатического действия (ЦПД), выраженной в процентном соотношении. Изучение инфекционной активности вируса CVB5 проводили методом ПЦР в режиме реального времени с оценкой относительной величины порогового цикла амплификации (C_t); HSV-1 — количественным титрованием вируссодержащей жидкости (ВСЖ), значение показателя выражали в 50% тканевой цитопатической дозе (ТЦД₅₀).

Результаты: получены диплоидные клеточные культуры ФППС и ФГПС. Выявлены высокая чувствительность клеток ФППС к вирусу CVB5 с ЦПД 87,5±3,3% на 3 пассаже и удовлетворительная концентрация энтеровирусной РНК в ВСЖ, характеризующаяся значением порогового цикла на уровне 22–24 C_t. Чувствительность клеточной культуры ФППС к HSV-1 соответствовала 92,1±5,5% ЦПД, инфекционная активность — 10^4,25 ТЦД₅₀/0,2 мл. У клеток ФГПС к изучаемым вирусам определены низкие показатели ЦПД и инфекционной активности.

Выводы: новая диплоидная клеточная культура ФППС с подтвержденной чувствительностью к тестируемым вирусам (CVB5 штамма CB5-8100 и HSV-1 штамма HSV-1/L-2) с высоким уровнем ЦПД имеет перспективы использования в вирусологии и биотехнологии. Клеточная культура ФГПС может быть кандидатом для тестирования других представителей CVB5 и HSV-1.

1. Ogilvie M. Molecular techniques should not now replace cell culture in diagnostic virology laboratories. Rev Med Virol. 2001;11(6):351–4. https://doi.org/10.1002/rmv.335

2. Leland DS, Ginocchio CC. Role of cell culture for virus detection in the age of technology. Clin Microbiol Rev. 2007;20(1):49–78. https://doi.org/10.1128/CMR.00002-06

3. Genzel Y. Designing cell lines for viral vaccine production: where do we stand? Biotechnol J. 2015;10(5):728–40. https://doi.org/10.1002/biot.201400388

4. Aubrit F, Perugi F, Léon A, Guéhenneux F, Champion-Arnaud P, Lahmar M, Schwamborn K. Cell substrates for the production of viral vaccines. Vaccine. 2015;33(44):5905–12. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2015.06.110

5. Chen P, Wu X, Su Y, Hao X, Mao Q, Liang Z. Development of a pseudovirus based assay for measuring neutralizing antibodies against Coxsackievirus B5. J Virol Methods. 2017;246:21–6. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2017.04.005

6. Dolskiy AA, Grishchenko IV, Yudkin DV. Cell cultures for virology: usability, advantages, and prospects. Int J Mol Sci. 2020;21(21):7978. https://doi.org/10.3390/ijms21217978

7. Hematian A, Sadeghifard N, Mohebi R, Taherikalani M, Nasrolahi A, Amraei M, Ghafourian S. Traditional and modern cell culture in virus diagnosis. Osong Public Health Res Perspect. 2016;7(2):77–82. https://doi.org/10.1016/j.phrp.2015.11.011

8. Глинских НП, Колесникова ГГ, Устьянцев ВП, Закирова СФ, Власова ЛВ, Станиславская ВК. Штамм диплоидных клеток легкого эмбриона человека ЛЭЧ-4(81), используемый для диагностики вирусных инфекций. Патент СССР № SU 1147748 A1; 1985.

9. Noort WA, Oerlemans MI, Rozemuller H, Feyen D, Jaksani S, Stecher D, et al. Human versus porcine mesenchymal stromal cells: phenotype, differentiation potential, immunomodulation and cardiac improvement after transplantation. J Cell Mol Med. 2012;16(8):1827–39. https://doi.org/10.1111/j.1582-4934.2011.01455.x

10. Schweizer R, Waldner M, Oksuz S, Zhang W, Komatsu C, Plock JA, et al. Evaluation of porcine versus human mesenchymal stromal cells from three distinct donor locations for cytotherapy. Front Immunol. 2020;11:826. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.00826

11. Викулов ГХ. ОРВИ, грипп и герпес: что общего и в чем разница при диагностике и терапии. Взгляд клинического иммунолога и инфекциониста. РМЖ «Медицинское обозрение». 2015;23(17):1032–7.

12. Алимов АВ, Федотова ОС, Шмелева НА, Бахарев АА, Резайкин АВ, Усольцева ПС и др. Определение чувствительности новых клеточных культур животного происхождения к клиническим изолятам энтеровируса человека Echovirus 11 и Coxsackievirus B5. Медицинский алфавит. 2020;(18):17–9. https://doi.org/10.33667/2078-5631-2020-18-17-19

13. Глинских НП, Бахарев АА, Устьянцев ПВ, Устьянцев ИВ. Способ получения стабильных клеточных культур. Патент Российской Федерации № 2392318; 2008.

14. Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков. М.: Мир; 1983.

15. Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battips DM, Hungerford DA. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood. Exp Cell Res. 1960;20:613–6. https://doi.org/10.1016/0014-4827(60)90138-5

16. Husson-van Vliet J, Roussel P. Pipetting errors in viral titrations: a useful approach. J Virol Methods. 1988;22(2–3):183–90. https://doi.org/10.1016/0166-0934(88)90101-2