Разработка критериев приемлемости оценки результатов количественного определения анти-D-антител IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rh_о(D) иммуноферментным методом

Метод конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) для количественного определения специфических антител (Ат) — анти-D-Ат IgG, в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rh_o(D) (ИГЧА) основан на конкурентном иммунохимическом связывании между анти-D-Ат в препарате ИГЧА и моноклональными анти-D-Ат к эпитопу D-антигенов иммуносорбента — эритроцитов человека фенотипа ccDEE, иммобилизированных на твердой фазе. Приготовление иммуносорбента проводится в условиях лаборатории самостоятельно. При аттестации Международного стандартного образца (МСО) анти-D иммуноглобулина предприняты попытки использования и фенотипа ССDee как наиболее часто встречаемого (16,01%) в сравнении с фенотипом ccDEE (2,16%). Использование фенотипа CCDee возможно при условии соблюдения критериев приемлемости оценки результатов, разработанных при валидации методики. Цель работы: разработать критерии приемлемости оценки результатов количественного определения анти-D-Ат IgG в препаратах ИГЧА методом ИФА, в котором для приготовления иммуносорбента, в случае отсутствия эритроцитов фенотипа ccDEE, могут быть использованы эритроциты фенотипа CCDee. Материалы и методы: препараты ИГЧА, модельные образцы с известным содержанием анти-D-Ат IgG, МСО анти-D иммуноглобулина, стандартный образец (СО) иммуноглобулина, не содержащий анти-D-Ат IgG, моноклональные анти-D-Ат, эритроциты фенотипов CCDee, ccDEE и ccddee. Определение анти-D-Ат IgG проводили методом конкурентного ИФА. Применяли параметрические и непараметрические методы статистики. Результаты: показано, что применение эритроцитов фенотипа CCDee позволяет использовать их для конкурентного иммунохимического связывания с моноклональными анти-D-Ат и антиD-Ат IgG различных препаратов ИГЧА. Подтверждена пригодность методики с применением фенотипа CCDee по валидационным характеристикам: правильность, промежуточная прецизионность, линейность, селективность, специфичность, устойчивость методики и сопоставимость результатов при использовании эритроцитов фенотипов CCDee и ccDEE. Разработаны критерии приемлемости: относительные значения содержания анти-D-Ат IgG в испытуемом образце должны быть в интервале ±20% от номинального значения; коэффициент детерминации (R2) должен быть не менее 0,9; относительное стандартное отклонение (RSD, %) трех значений оптической плотности для каждой концентрации не должно превышать 20%. Выводы: разработанные критерии приемлемости гарантируют достоверность получаемых результатов количественного определения анти-D-Ат IgG методом ИФА, что позволяет их использовать специалистами контрольно-аналитических лабораторий для оценки качества препаратов ИГЧА.

1. Савельева ГМ, Курцер МА, Панина ОБ, Сичинава ЛГ, Клименко ПА, Коноплянников АГ, Алексеенкова МВ. Диагностика, лечение, профилактика гемолитической болезни плода при резус-сенсибилизации. Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2006;51(6):73–8.

2. Hannafin B, Lovecchio F, Blackburn P. Do Rh-nagative women with first trimester spontaneous abortions need Rh immune globulin? Am J Emerg Med. 2006;24(4):487–90. https://doi.org/10.1016/j.ajem.2006.01.020

3. Scott ML. The complexities of the Rh system. Vox Sang. 2004;87:58–62. https://doi.org/10.1111/j.1741-6892.2004.00431.x

4. MacKenzie IZ, Roseman F, Findlay J, Thompson K, Jackson E, Scott J, Reed M. The kinetics of routine antenatal prophylactic intramuscular injections of polyclonal anti-D immunoglobulin. BJOG. 2006;113(1):97–101. https://doi.org/10.1111/j.14710528.2005.00789.x

5. Thorpe SJ, Sands D, Rautmann G, Schäffner G. International collaborative study to evaluate methods for quantification of anti-D in immunoglobulin preparations. Vox Sang. 2002;83(1):42–50. https://doi.org/10.1046/j.1423-0410.2002.00169.x

6. Шведова ЕВ, Кудашева ЭЮ, Климов ВИ. Методы оценки специфической активности препаратов иммуноглобулина человека антирезус Rh_о(D): современное состояние проблемы. Иммунология. 2020;41(3):256–61. https://doi.org/10.33029/0206-49522020-41-3-256-261

7. Донсков СИ, Мороков ВА. Группы крови человека: руководство по иммуносерологии. М.: ИП Скоро ходов ВА; 2011.

8. Thorpe SJ, Turner CE, Heath AC, Sands D. A competitive enzyme-linked immunoassay using erythrocytes fixed to microtitre plates for anti-D quantitation in immunoglobulin products. Vox Sang. 2000;79(2):100–7. https://doi.org/10.1046/j.14230410.2000.7920100.x

9. Шведова ЕВ, Лешина СА, Давыдов ДС, Борисевич ИВ, Кудашева ЭЮ. Разработка критериев иммобилизации эритроцитов человека фенотипов R1R1 и R2R2 на твердой фазе при определении содержания анти-D-антител IgG в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rh_о(D) методом иммуноферментного анализа. Иммунология. 2022;43(2):208–16. https://doi.org/10.33029/0206-49522022-43-2-208-216

10. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика; 1998.