Оценка подлинности и стабильности вакцины БЦЖ методом мультиплексной ПЦР

Метод мультиплексной полимеразной цепной реакции использовали для оценки стабильности 7 посевных серий субштамма Mycobacterium bovis BCG-1, Россия, применявшихся для изготовления вакцины БЦЖ с 1948 г. по настоящее время. Для ПЦР использованы праймеры, подобранные к 5 участкам области RD и 1 участку повторяющихся элементов межгенной области оперона SenX3-RegX3. Электрофореграммы продуктов амплификации для 7 посевных серий были идентичны и отличалась от электрофореграмм других известных субштаммов БЦЖ, взятых в качестве контроля. Аналогичные результаты получены при генотипировании 32 коммерческих серий вакцины БЦЖ, изготовленных из субштамма M. bovis BCG-1, Россия тремя производителями. Полученные данные подтвердили стабильность посевных серий вакцины БЦЖ, использовавшихся более 60 лет, и адекватность принятой системы ведения штамма. Апробированный метод мультиплексной ПЦР с отечественными реактивами может быть принят для подтверждения идентичности посевного материала и вакцины отечественному субштамму БЦЖ (M. bovis BCG-1) при выполнении теста «Подлинность». Метод адекватен и воспроизводим.

посевная серия, мультиплексная полимеразная реакция, субштаммы БЦЖ, стабильнось, подлинность, seed lot, multiplex polymerase reaction, BCG substrains, stability, identity

1. Блум БР, Файн ПЕ. Опыт вакцинации БЦЖ: будущие вакцины против туберкулеза. В кн.: Туберкулез. Патогенез, защита, контроль. М.: Медицина; 2002. С. 575-606.

2. Behr MA, Wilson MA, Gill WP, Salamon H, Schoolnik GK, Rane S, et al. Comparative genomics of BCG vaccines by whole-genome DNA microarray. Science 1999; 284: 1520-3.

3. Behr MA, Small PM. A historical and molecular polygeny of BCG strains. Vaccine 1999; 17: 915-22.

4. Honda I, Seki M, Ikeda N, Yano I, Koyama A, Toida I. Identification of two subpopulations of BCG Calmette-Guerin (BCG) Tokio substrain with different RD 16 regions. Vaccine 2006; 6: 4969-74.

5. Talbot EA, Williams DL, Frothingham R. PCR Identification of Mycobacterium bovis BCG. J Clin Microbiol. 1997; 35(3): 566-9.

6. Bedwell J, Kairo SK, Behr MA, Bygraves JA. Identification of substrains of BCG vaccine using multiplex PCR. Vaccine 2001; 19(15-16): 2146-51.

7. Стукова MA, Заболотных НВ, Виноградова ТИ, Гергерт ВЯ, Апт АС, Капрельянц АС, Ерохин ВВ, Яблонский ПК, Киселев ОИ. Профилактика туберкулеза: современные подходы к разработке противотуберкулезных вакцин. Вестник РАМН, Актуальные вопросы фтизиатрии 2012; (11): 45-52.

8. Milstein JB, Gibson JJ. Quality control of BCG vaccine by WHO: a review of factors that may influence vaccine effectiveness and safety. WHO Bulletin OMS 1990; 68(1): 93-108.

9. Trovero A, Arguelles C, Cataldi A. Preparation of a working seed lot of BCG and quality control by PCR genotyping. Revista Argentina de Microbiologia 2010; 42: 4-10.

10. Лещинская ЕН, Вакенгут АМ. Условия длительного сохранения вакцины БЦЖ. Проблемы туберкулеза 1941; (3): 63-6.

11. Лещинская ЕН, Вакенгут АМ. Дальнейшее изучение сухой глюкозной вакцины БЦЖ. Проблемы туберкулеза 1942, (5-6): 47-50.

12. WHO Technical Report Series. № 977, 60 report, 2013, 16-8.

13. Markey K, Ho MM, Choudhury B, Seki M, Ju L, Luiz RR, Castello-Branco LR, Gairola S, Zhao A, Shibayama K, Andre M, Corbel MJ. Report of an collaborative study to evaluate the suitability of multiplex PCR as an identity assay for different sub-strains of BCG vaccine. Vaccine 2010; 28: 6964-9.

14. Wada T, Maruyama F, Iwamoto T, Maeda S, Yamamoto T, Nakagawa I, Yamamoto S, Ohara N. Deep sequencing analysis of the heterogeneity of seed and commercial lots of the bacillus Calmette-Guérin (BCG) tuberculosis vaccine substrain Tokyo-172. Available from: www.natura.com/Scientificreports | 5:17827 | DOI: 10.1038 / srep17827 (2015); 1-9.