biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-41Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESОценка подлинности и стабильности вакцины БЦЖ методом мультиплексной ПЦРIdentity and stability assessment of BCG vaccine by multiplex PCRЛевиД. Т.LeviD. T.

Главный эксперт Управления экспертизы противобактериальных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП, д-р мед. наук, профессор

Chief expert of Office of expertise of antibacterial medical immunobiological preparations of Center of expertise and control of medical immunobiological preparations. Doctor of Medical Sciences, professor

Levi@expmed.ruОбуховЮ. И.ObukhovYu. I.

Начальник Управления экспертизы противобактериальных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП

Head of Office of expertise of antibacterial medical immunobiological preparations of Center of expertise and control of medical immunobiological preparations

noemail@neicon.ruАлександроваН. В.AleksandrovaN. V.

Главный эксперт лаборатории противобактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. мед. наук

Chief expert of Laboratory of bacterial vaccines of Test Center of Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Candidate of Medical Sciences

noemail@neicon.ruВолковаР. А.VolkovaR. A.

Начальник лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний Испытательного центра экспертизы качества МИБП, д-р биол. наук

Head of the laboratory of molecular biology and genetic testing methods of Test Center of Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Doctor of Biological Sciences

noemail@neicon.ruЭльбертЕ. В.ElbertE. V.

Ведущий эксперт лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол наук

Leading expert of the laboratory of molecular biology and genetic testing methods of Test Center of Quality Expertise of medical immunobiological preparations. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruАльварес ФигероаМ. В.Alvarez FigeroaM. V.

Руководитель научной группы разработки новых методов диагностики туберкулеза отдела молекулярной диагностики и эпидемиологии, канд. мед. наук

Head of the research group to develop new methods for diagnosis of tuberculosis of department of molecular diagnostics and epidemiology. Candidate of Medical Sciences

noemail@neicon.ruПрокопенкоА. В.ProkopenkoA. V.

Младший научный сотрудник

Junior researcher

noemail@neicon.ruЛуданныйР. И.LudanniyR. I.

Ведущий научный сотрудник, канд. биол. наук

Leading researcher. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruНаучный центр экспертизы средств медицинского примененияРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationЦентральный научно-исследовательский институт эпидемиологииРоссияCentral Epidemiology Scientific and Research InstituteRussian Federation2016200220181614954Copyright © Леви Д.Т., Обухов Ю.И., Александрова Н.В., Волкова Р.А., Эльберт Е.В., Альварес Фигероа М.В., Прокопенко А.В., Луданный Р.И., 20182018Леви Д.Т., Обухов Ю.И., Александрова Н.В., Волкова Р.А., Эльберт Е.В., Альварес Фигероа М.В., Прокопенко А.В., Луданный Р.И.Levi D.T., Obukhov Y.I., Aleksandrova N.V., Volkova R.A., Elbert E.V., Alvarez Figeroa M.V., Prokopenko A.V., Ludanniy R.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/41

Метод мультиплексной полимеразной цепной реакции использовали для оценки стабильности 7 посевных серий субштамма Mycobacterium bovis BCG-1, Россия, применявшихся для изготовления вакцины БЦЖ с 1948 г. по настоящее время. Для ПЦР использованы праймеры, подобранные к 5 участкам области RD и 1 участку повторяющихся элементов межгенной области оперона SenX3-RegX3. Электрофореграммы продуктов амплификации для 7 посевных серий были идентичны и отличалась от электрофореграмм других известных субштаммов БЦЖ, взятых в качестве контроля. Аналогичные результаты получены при генотипировании 32 коммерческих серий вакцины БЦЖ, изготовленных из субштамма M. bovis BCG-1, Россия тремя производителями. Полученные данные подтвердили стабильность посевных серий вакцины БЦЖ, использовавшихся более 60 лет, и адекватность принятой системы ведения штамма. Апробированный метод мультиплексной ПЦР с отечественными реактивами может быть принят для подтверждения идентичности посевного материала и вакцины отечественному субштамму БЦЖ (M. bovis BCG-1) при выполнении теста «Подлинность». Метод адекватен и воспроизводим.

Multiplex polymerase chain reaction method was used to assess the stability of 7 seed lots of a substrain Mycobacterium bovis BCG-1, Russia, used for the manufacture of BCG vaccine since 1948 till present. For performng PCR we used primers, matching 5 parts of the RD field and 1part of repeating elements of intergenic operon senX3-regX3 region. Electrophoregrams of amplification products for 7 seed lots of products were identical and differed from the electrophoregrams of other known BCG substrains used as control samples. Similar results were obtained for genotyping of 32 commercial lots of BCG vaccine, manufactured using substrain M. bovis BCG-1 by three Russian manufacturers. The obtained data confirmed the stability of seed lots of BCG vaccine used for more than 60 years, and the adequacy of the settled system of strain maintanance. The assessed method of multiplex PCR with domestic reagents can accepted for confirming that the seed and the vaccine are identical to domestic BCG vaccine substrain (M. bovis BCG-1) when performing «Identification» test. The mehod is adequate and reproducible.

посевная сериямультиплексная полимеразная реакциясубштаммы БЦЖстабильносьподлинностьseed lotmultiplex polymerase reactionBCG substrainsstabilityidentityReferencesБлум БР, Файн ПЕ. Опыт вакцинации БЦЖ: будущие вакцины против туберкулеза. В кн.: Туберкулез. Патогенез, защита, контроль. М.: Медицина; 2002. С. 575-606.Bloom BR, Fine PE. Previous BCG vaccination: future vaccine against tuberculosis. In: Tuberculosis. Pathogenesis, protection and control. Moscow: Meditsina; 2002. P. 575–606 (in Russian).Behr MA, Wilson MA, Gill WP, Salamon H, Schoolnik GK, Rane S, et al. Comparative genomics of BCG vaccines by whole-genome DNA microarray. Science 1999; 284: 1520-3.Behr MA, Wilson MA, Gill WP, Salamon H, Schoolnik GK, Rane S, et al. Comparative genomics of BCG vaccines by whole-genome DNA microarray. Science 1999; 284: 1520–3.Behr MA, Small PM. A historical and molecular polygeny of BCG strains. Vaccine 1999; 17: 915-22.Behr MA, Small PM. A historical and molecular polygeny of BCG strains. Vaccine 1999; 17: 915–22.Honda I, Seki M, Ikeda N, Yano I, Koyama A, Toida I. Identification of two subpopulations of BCG Calmette-Guerin (BCG) Tokio substrain with different RD 16 regions. Vaccine 2006; 6: 4969-74.Honda I, Seki M, Ikeda N, Yano I, Koyama A, Toida I. Identification of two subpopulations of BCG Calmette-Guerin (BCG) Tokio substrain with different RD 16 regions. Vaccine 2006; 6: 4969–74.Talbot EA, Williams DL, Frothingham R. PCR Identification of Mycobacterium bovis BCG. J Clin Microbiol. 1997; 35(3): 566-9.Talbot EA, Williams DL, Frothingham R. PCR Identification of Mycobacterium bovis BCG. J Clin Microbiol. 1997; 35(3): 566–9.Bedwell J, Kairo SK, Behr MA, Bygraves JA. Identification of substrains of BCG vaccine using multiplex PCR. Vaccine 2001; 19(15-16): 2146-51.Bedwell J, Kairo SK, Behr MA, Bygraves JA. Identification of substrains of BCG vaccine using multiplex PCR. Vaccine 2001; 19(15–16): 2146–51.Стукова MA, Заболотных НВ, Виноградова ТИ, Гергерт ВЯ, Апт АС, Капрельянц АС, Ерохин ВВ, Яблонский ПК, Киселев ОИ. Профилактика туберкулеза: современные подходы к разработке противотуберкулезных вакцин. Вестник РАМН, Актуальные вопросы фтизиатрии 2012; (11): 45-52.Stukova MA, Zabolotnyh NV, Vinogradova TI, Gergert VYa, Apt AS, Kaprelyants AS, Erohin VV, Yablonskiy PK, Kiselev OI. Tuberculosis prevention: modern approaches to the development of TB vaccines. Vestnik RAMN, Aktualnye voprosy ftiziatrii 2012; (11): 45–52 (in Russian).Milstein JB, Gibson JJ. Quality control of BCG vaccine by WHO: a review of factors that may influence vaccine effectiveness and safety. WHO Bulletin OMS 1990; 68(1): 93-108.Milstein JB, Gibson JJ. Quality control of BCG vaccine by WHO: a review of factors that may influence vaccine effectiveness and safety. WHO Bulletin OMS 1990; 68(1): 93–108.Trovero A, Arguelles C, Cataldi A. Preparation of a working seed lot of BCG and quality control by PCR genotyping. Revista Argentina de Microbiologia 2010; 42: 4-10.Trovero A, Arguelles C, Cataldi A. Preparation of a working seed lot of BCG and quality control by PCR genotyping. Revista Argentina de Microbiologia 2010; 42: 4–10.Лещинская ЕН, Вакенгут АМ. Условия длительного сохранения вакцины БЦЖ. Проблемы туберкулеза 1941; (3): 63-6.Leschinskaya EN, Vakengut AM. Terms of long-term storage of BCG vaccine. Problemy tuberkuleza 1941; (3): 63–6 (in Russian).Лещинская ЕН, Вакенгут АМ. Дальнейшее изучение сухой глюкозной вакцины БЦЖ. Проблемы туберкулеза 1942, (5-6): 47-50.Leschinskaya EN, Vakengut AM. Further study of the dry glucose BCG vaccine. Problemy tuberkuleza 1942, (5–6): 47–50 (in Russian).WHO Technical Report Series. № 977, 60 report, 2013, 16-8.WHO Technical Report Series. ¹ 977, 60 report, 2013, 16–8.Markey K, Ho MM, Choudhury B, Seki M, Ju L, Luiz RR, Castello-Branco LR, Gairola S, Zhao A, Shibayama K, Andre M, Corbel MJ. Report of an collaborative study to evaluate the suitability of multiplex PCR as an identity assay for different sub-strains of BCG vaccine. Vaccine 2010; 28: 6964-9.Markey K, Ho MM, Choudhury B, Seki M, Ju L, Luiz RR, Castello-Branco LR, Gairola S, Zhao A, Shibayama K, Andre M, Corbel MJ. Report of an collaborative study to evaluate the suitability of multiplex PCR as an identity assay for different sub-strains of BCG vaccine. Vaccine 2010; 28: 6964–9.Wada T, Maruyama F, Iwamoto T, Maeda S, Yamamoto T, Nakagawa I, Yamamoto S, Ohara N. Deep sequencing analysis of the heterogeneity of seed and commercial lots of the bacillus Calmette-Guérin (BCG) tuberculosis vaccine substrain Tokyo-172. Available from: www.natura.com/Scientificreports | 5:17827 | DOI: 10.1038 / srep17827 (2015); 1-9.Wada T, Maruyama F, Iwamoto T, Maeda S, Yamamoto T, Nakagawa I, Yamamoto S, Ohara N. Deep sequencing analysis of the heterogeneity of seed and commercial lots of the bacillus Calmette-Guérin (BCG) tuberculosis vaccine substrain Tokyo-172. Available from: www.natura.com/Scientificreports | 5:17827 | DOI: 10.1038/srep17827 (2015); 1–9.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.