До настоящего времени единственным препаратом для массовой активной профилактики туберкулеза среди детей на территории Российской Федерации остается вакцина туберкулезная (БЦЖ). Изготовление промышленных серий вакцины БЦЖ проводят в рамках системы «посевной серии» (seed-lot system), которая регламентирует изготовление вводимой в гражданский оборот вакцины из единой серии посевного материала — лиофилизата Mycobacterium bovis BCG. Оценка посевного материала вакцины БЦЖ по показателям качества в отечественных и зарубежных документах представлена в виде отдельных небольших разделов, содержащих краткое описание и/или перечисление показателей и методов контроля. Объединить информацию о получении, аттестации и хранении посевного материала (посевной серии) для производства отечественной вакцины БЦЖ является актуальной задачей. Цель работы — провести сравнительную оценку основных характеристик и методов контроля посевного материала отечественного субштамма M. bovis BCG-I (Russia), изложенных в национальных и международных требованиях к вакцинам БЦЖ. Обобщены данные литературы по истории появления субштаммов M. bovis BCG, вариабельности их характеристик, представлена краткая история происхождения отечественного субштамма BCG-I. Рассмотрены методы контроля, указанные в национальных и международных требованиях к посевному материалу вакцины БЦЖ. Показана практическая возможность провести индикацию субштамма M. bovis BCG-I (Russia) с последующим определением генетических свойств, характеризующих его геномную стабильность. Приведены результаты сравнительного анализа данных о стабильности лиофилизатов посевных серий M. bovis BCG-I (Russia). Особое внимание уделено биологическим методам контроля посевной серии: определению остаточной вирулентности, включая приживаемость, и иммунобиологическому методу контроля БЦЖ на отсутствие генов, ответственных за выработку антигенов вирулентности (кожные пробы на животных с препаратом Диаскинтест®). Сделан вывод о том, что контроль стабильности генетических и биологических свойств на протяжении всего периода производства и хранения посевной серии позволяет получать вакцину БЦЖ, соответствующую всем требованиям нормативной документации.

Препараты антирезусного иммуноглобулина человека, получаемые из иммунной плазмы крови человека, являются востребованными и высокоэффективными средствами специфической анти-D профилактики перинатальных осложнений и при лечении первичной иммунной тромбоцитопении. Эффективность предотвращения иммунного ответа напрямую зависит от дозы введенного действующего вещества препарата. Для повышения точности количественного определения анти-D антител рекомендовано использование стандартных образцов (СО), аттестованных в международных единицах. Цель работы — анализ основных этапов разработки международного стандартного образца (МСО) для определения специфической активности антирезусного иммуноглобулина человека и обоснование необходимости создания отечественного СО содержания антирезус Rh_o(D) антител. В статье описаны процесс создания первого и последующих МСО, процедура установления эквивалента международных единиц для выражения концентрации антирезус Rh_o(D) антител, приведены характеристики сырья и продуктов, а также методы определения антирезусных антител, используемые при аттестации МСО. Сделан вывод о необходимости разработки и аттестации отечественного СО содержания антирезус Rh_o(D) антител, соответствующего требованиям нормативных актов Российской Федерации в данной области.

Шигеллез (бактериальная дизентерия) — острое инфекционное заболевание, вызываемое возбудителями Shigellа spp. семейства Enterobacteriaceae, характеризуется наибольшим показателем смертности населения от бактериальных кишечных инфекций. Значительная доля случаев заболевания приходится на детей в возрасте до 5 лет. В 2017 г. штаммы Shigellа spp. были включены в опубликованный ВОЗ список устойчивых к действию большинства антибиотиков «приоритетных патогенов», представляющих угрозу мировому здравоохранению, что послужило стимулом к разработке новых противомикробных препаратов для терапии шигеллезов. Наряду с созданием антимикробных средств против Shigellа spp. важную роль в борьбе с шигеллезами играет комплекс превентивных мер, изложенный в программе иммунизации ВОЗ 2030, в который, помимо санитарии, гигиены и потребления чистой воды, входит вакцинация. Разработка вакцины против шигеллеза остается одним из приоритетных направлений программы ВОЗ уже более 20 лет. Цель работы — анализ перспективных направлений разработки вакцинных препаратов против шигеллеза. Проведенный анализ данных литературы показал, что в настоящее время на мировом рынке зарегистрирована только одна вакцина против шигеллеза — российская вакцина Шигеллвак, полисахаридная дизентерийная вакцина против шигелл Зонне. Рассмотрен ряд вакцинных препаратов (цельноклеточные, полисахаридные конъюгированные и неконъюгированные, препараты на основе белковых антигенов и др.), находящихся на различных этапах клинических испытаний. Отмечено, что важным направлением является создание комбинированных мультивалентных препаратов против инфекций, вызываемых Shigellа spp. и другими кишечными патогенами. Сделан вывод о том, что наиболее перспективными являются разработки субъединичных вакцин на основе Ipa-белков, обеспечивающих перекрестную защиту против Shigellа spp., а также конъюгированных поливалентных вакцин, предназначенных для детей в возрасте до 5 лет.

Метод конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) для количественного определения специфических антител (Ат) — анти-D-Ат IgG, в препаратах иммуноглобулина человека антирезус Rh_o(D) (ИГЧА) основан на конкурентном иммунохимическом связывании между анти-D-Ат в препарате ИГЧА и моноклональными анти-D-Ат к эпитопу D-антигенов иммуносорбента — эритроцитов человека фенотипа ccDEE, иммобилизированных на твердой фазе. Приготовление иммуносорбента проводится в условиях лаборатории самостоятельно. При аттестации Международного стандартного образца (МСО) анти-D иммуноглобулина предприняты попытки использования и фенотипа ССDee как наиболее часто встречаемого (16,01%) в сравнении с фенотипом ccDEE (2,16%). Использование фенотипа CCDee возможно при условии соблюдения критериев приемлемости оценки результатов, разработанных при валидации методики. Цель работы: разработать критерии приемлемости оценки результатов количественного определения анти-D-Ат IgG в препаратах ИГЧА методом ИФА, в котором для приготовления иммуносорбента, в случае отсутствия эритроцитов фенотипа ccDEE, могут быть использованы эритроциты фенотипа CCDee. Материалы и методы: препараты ИГЧА, модельные образцы с известным содержанием анти-D-Ат IgG, МСО анти-D иммуноглобулина, стандартный образец (СО) иммуноглобулина, не содержащий анти-D-Ат IgG, моноклональные анти-D-Ат, эритроциты фенотипов CCDee, ccDEE и ccddee. Определение анти-D-Ат IgG проводили методом конкурентного ИФА. Применяли параметрические и непараметрические методы статистики. Результаты: показано, что применение эритроцитов фенотипа CCDee позволяет использовать их для конкурентного иммунохимического связывания с моноклональными анти-D-Ат и антиD-Ат IgG различных препаратов ИГЧА. Подтверждена пригодность методики с применением фенотипа CCDee по валидационным характеристикам: правильность, промежуточная прецизионность, линейность, селективность, специфичность, устойчивость методики и сопоставимость результатов при использовании эритроцитов фенотипов CCDee и ccDEE. Разработаны критерии приемлемости: относительные значения содержания анти-D-Ат IgG в испытуемом образце должны быть в интервале ±20% от номинального значения; коэффициент детерминации (R2) должен быть не менее 0,9; относительное стандартное отклонение (RSD, %) трех значений оптической плотности для каждой концентрации не должно превышать 20%. Выводы: разработанные критерии приемлемости гарантируют достоверность получаемых результатов количественного определения анти-D-Ат IgG методом ИФА, что позволяет их использовать специалистами контрольно-аналитических лабораторий для оценки качества препаратов ИГЧА.

Синдром Марото—Лами (мукополисахаридоз VI типа) — орфанное генетическое заболевание, вызванное мутациями гена ARSB, который кодирует лизосомальный фермент арилсульфатазу В. Актуальность исследования заключается в необходимости разработки отечественного препарата рекомбинантной арилсульфатазы В для лечения пациентов с данным заболеванием в Российской Федерации. Ранее были получены клеточные линии-продуценты, коэкспрессирующие целевой фермент арилсульфатазу В и вспомогательный формилглицин-генерирующий фермент на основе клеточной линии СНО. Однако для дальнейшей разработки препарата рекомбинантной арилсульфатазы В представляется важным повышение выхода фермента. Цель работы: увеличение продуктивности клонов-продуцентов за счет оптимизации процесса культивирования и добавления в культуральную среду хлорида кальция и сульфата меди. Материалы и методы: использовали суспензионную клеточную линию СНО. Моноклональные клеточные линии получали с использованием систем Cell Metric и Clone Pix FL. Концентрацию арилсульфатазы В в культуральной жидкости определяли методом иммуноферментного анализа. Использовали периодическое культивирование (batch culture) и/или периодическое культивирование с подпиткой (fedbatch culture) в среде с добавлением различных концентраций сульфата меди и хлорида кальция. Результаты: продемонстрировано, что одновременное добавление сульфата меди и хлорида кальция в концентрации 300 мкM при периодическом культивировании клонов-продуцентов, коэкспрессирующих арилсульфатазу В и формилглицин-генерирующий фермент, увеличивает жизнеспособность культур и повышает удельную продуктивность клеток до 4,58±1,62 пг/(клетка×сут). При культивировании лидерного клона-продуцента, коэкспрессирующего арилсульфатазу В и формилглицин-генерирующий фермент, в условиях периодического культивирования с подпиткой длительностью 12 сут достигнуто увеличение выхода активного лизосомального фермента арилсульфатазы В до 420 мг/л при добавлении в ростовую среду сульфата меди в концентрации 300 мкM. Выводы: культивирование клонов-продуцентов, коэкспрессирующих арилсульфатазу В и формилглицин-генерирующий фермент, в условиях периодического культивирования с подпиткой и с добавлением в среду сульфата меди приводит к значительному улучшению ростовых свойств клеточной линии и выхода целевого фермента. Данный подход в подборе условий культивирования продуцентов можно применять к другим ферментам подкласса сульфатаз.

Создание новых эффективных ранозаживляющих средств является актуальной задачей современной клинической фармакологии. Одним из перспективных направлений представляется разработка препаратов для стимуляции ангиогенеза, который является критическим этапом процесса заживления ран. Цель работы: оценить ранозаживляющее действие препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека в виде геля на различных экспериментальных моделях. Материалы и методы: в качестве экспериментальных животных использовали белых беспородных крыс-самцов. Исследовано ранозаживляющее действие препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека (0,0025%) в виде геля относительно препарата сравнения на моделях плоскостной кожно-мышечной, линейной и ожоговой раны. Ранозаживляющее действие исследуемого препарата при лечении длительно незаживающей раны охарактеризовано на модели аллоксанового сахарного диабета. На модели адъювантного артрита оценено противовоспалительное действие препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека относительно препарата сравнения. Результаты: установлена более высокая ранозаживляющая активность препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека относительно препарата сравнения (гель Солкосерил) для плоскостной кожно-мышечной раны, линейной и ожоговой ран. При применении исследуемого препарата ускоряется процесс репарации тканей при лечении длительно незаживающей раны на модели аллоксанового сахарного диабета. Отмечено более быстрое расплавление некротических масс и переход к эпителизации краев раны. Установлена противовоспалительная активность препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека, по эффективности сравнимая с действием препарата сравнения (гель Диклофенак). Выводы: определено наличие у препарата на основе рекомбинантного ангиогенина человека в виде геля выраженных ранозаживляющих и противовоспалительных свойств, сопоставимых с препаратами сравнения.

Использование сульфатированных полисахаридов (фукоиданов) в качестве фармацевтических субстанций или адъювантов связано с решением задачи по получению структурно охарактеризованных и однородных образцов или их олигомерных фракций, сохраняющих высокую биологическую активность. Нами получен высокоочищенный продукт ферментативного гидролиза фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens и дана оценка биологической активности полученного продукта в сравнении с нативным фукоиданом. Цель работы: изучение влияния ферментативно деполимеризованного образца фукоидана из бурой водоросли F. evanescens на эффекторные функции клеток врожденного и адаптивного иммунитета in vitro и in vivo в условиях антигенной нагрузки овальбумином (ОВА) в сравнении с нативным фукоиданом. Материалы и методы: для оценки влияния образцов фукоиданов (ферментативно деполимеризованного и нативного) in vitro на уровень экспрессии основных иммунофенотипических маркеров клеток врожденного и адаптивного иммунитета (нейтрофилов, натуральных киллеров, моноцитов, лимфоцитов) применяли методы проточной цитометрии. В экспериментах in vivo в сыворотке крови мышей линии BALB/c, иммунизированных ОВА, исследовали уровень специфических антител IgG, IgG1, IgG2а и цитокинов (IFN-γ, IL-2, IL-10, IL-12). Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программы Statistica 10. Результаты: под влиянием обоих образцов фукоиданов in vitro выявлены изменения уровня экспрессии основных иммунофенотипических маркеров клеток врожденного и адаптивного иммунитета, свидетельствующие об их активации. В условиях in vivo под действием образцов фукоиданов наблюдалось увеличение уровня ОВА-специфических антител (IgG, IgG1, IgG2a) и продукции цитокинов (IFN-γ, IL-2, IL-10). Выводы: показана активация образцом ферментативно деполимеризованного фукоидана врожденного и адаптивного иммунитета, которая не уступает действию нативного образца фукоидана, что определяет возможность его применения в качестве адъюванта для широкого спектра профилактических и терапевтических вакцин.

Количественное определение консерванта тиомерсала, входящего в состав ряда иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП), является обязательным требованием к их качеству. Ранее нами была разработана методика количественного определения тиомерсала в несорбированных ИЛП, основанная на методе атомно-абсорбционной спектрометрии холодного пара (методика ААС ХП). Цель работы: анализ возможности применения методики ААС ХП для количественной оценки содержания тиомерсала в сорбированных препаратах и оценка сопоставимости результатов количественного определения тиомерсала, полученных с помощью колориметрической методики и методики ААС ХП. Материалы и методы: государственный стандартный образец содержания ионов ртути; фармакопейный стандартный образец (ФСО) содержания мертиолята в сорбированных препаратах (ФСО 3.1.00427); образцы сорбированных ИЛП различных производителей (АКДС-вакцина, препараты анатоксинов, вакцины против гепатита В и гриппа, комбинированные вакцины). Исследование проводили с применением колориметрической методики в реакции с дитизоном и методики ААС ХП. Результаты: полученные с использованием методики ААС ХП значения относительного стандартного отклонения (3,95%) и коэффициента корреляции «объем образца — содержание тиомерсала» (0,9956) подтверждают специфичность методики; регрессионный анализ и полученное значение F-критерия Фишера, равное 0,16, свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки методики. Диапазон процента выявления добавленного количества тиомерсала, не превышающий 10%, свидетельствует об удовлетворительной правильности методики. Установлена чувствительность методики ААС ХП: предел количественного определения и предел обнаружения ионов ртути в образце составили 6,9×10^-3 и 2,3×10^-3 мкг/мл соответственно. Значение критерия Фишера (1,29), полученное при оценке сопоставимости результатов определения тиомерсала колориметрической методикой и методикой ААС ХП, ниже табличного значения (3,96). Выводы: подтверждена возможность применения методики ААС ХП для количественного определения тиомерсала в сорбированных ИЛП. Установленный предел обнаружения методики позволяет оценивать остаточные количества тиомерсала в полупродуктах при производстве бесконсервантных форм ИЛП. Оценка сопоставимости результатов определения тиомерсала колориметрической методикой и методикой ААС ХП, проведенная с применением однофакторного дисперсионного анализа по критерию Фишера, показала возможность применения ФСО 3.1.00427 для контроля стабильности аналитической работы при воспроизведении методики ААС ХП.

В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации (ГФ  РФ) для получения достоверных результатов при проведении испытания лекарственных средств на присутствие микоплазм микробиологическим методом предварительно оценивают пригодность питательной среды с помощью стандартного образца (СО) тест-штамма Mycoplasma arginini G230. Стабильность физико-химических свойств и аттестуемой характеристики (титра) СО сохраняется при соблюдении регламентированного температурного режима в течение одного года. Отклонения от указанных условий и транспортирование в условиях окружающей среды могут привести к изменению свойств СО и стать причиной несоответствия качества биологических лекарственных препаратов по показателю «Испытание на присутствие микоплазм». Необходимость проведения исследования не только долгосрочной стабильности материала СО, но и при возможных кратковременных отклонениях от установленных условий хранения подчеркивают и эксперты Комитета по стандартным образцам Международной организации по стандартизации, Государственной системы обеспечения единства измерений, а также Комитета экспертов ВОЗ. Цель работы: изучение стабильности стандартного образца тест-штамма М. arginini G230 при длительном хранении в регламентируемых условиях и при кратковременном воздействии повышенных температур. Материалы и методы: использованы СО тест-штамма М. аrginini G230 производства ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, питательные среды и растворы по ОФС.1.7.2.0031.15 Испытание на присутствие микоплазм. Стабильность свойств СО, включая аттестуемую характеристику (титр) определяли фармакопейными методами согласно ГФ РФ. Эксперимент проводили в условиях кратковременного воздействия на образцы двух режимов повышенных температур. Контрольные образцы хранили при температуре минус 20±2 °С. Статистическую обработку данных проводили методом предельных разведений по таблице Мак-Креди и рассчитывали среднее арифметическое значение наиболее вероятного числа микроорганизмов (НВЧ) в предельном разведении (титр). Результаты: показана стабильность свойств образцов СО, хранившихся в регламентируемых условиях в течение срока, превышающего срок годности (до 16 месяцев). Стабильность основных свойств СО сохраняется после воздействия повышенных температур 25±2 и 37±2 °С в течение 30 сут. Установлено снижение значения аттестованной характеристики (титра) образцов, подвергшихся воздействию температуры 37±2 °С в течение 10 и 30 сут. Выводы: показана возможность транспортирования образцов до 30 сут при температуре не выше 25±2 °С без изменения их качества в течение 1 года. Температурный режим 37±2 °С не может быть использован для хранения и/или транспортирования образцов СО.