Изучение возможности применения математических методов анализа для оценки специфической активности антител к поверхностному антигену вируса гепатита В в препаратах иммуноглобулинов человека

Актуальность. Препараты иммуноглобулинов человека, содержащие в составе антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В (HBsAg), являются средством экстренной профилактики гепатита В у взрослых и детей и применяются для лечения легких и среднетяжелых форм острого вирусного гепатита В. Клиническая эффективность таких препаратов определяется специфической активностью, оцениваемой по содержанию антител к поверхностному антигену вируса гепатита В (anti-HBs антитела), которую в настоящее время определяют с использованием метода иммуноферментного анализа (ИФА).

Цель. Анализ различных математических методов оценки экспериментальных данных, полученных с применением ИФА для определения активности антител к поверхностному антигену вируса гепатита В в препаратах иммуноглобулинов человека.

Материалы и методы. В работе использовали международный стандартный образец иммуноглобулина человека, содержащий anti-HBs антитела; препараты иммуноглобулинов; набор реагентов для иммуноферментного качественного и количественного определения антител к HBsAg в сыворотке (плазме) крови.

Результаты. С использованием сэндвич-варианта ИФА установлена зависимость получаемого результата определения концентрации anti-HBs антител от выбора способа построения калибровочного графика («ручной» подход, метод параллельных линий с использованием программы «PARALINE», метод линейной регрессии, 4-параметрическая логистическая модель). Разброс полученных значений концентрации anti-HBs антител составил ±19 МЕ/мл от среднего значения. Установлено, что неверно подобранный метод обработки данных может приводить к ошибочным расчетам значений активности (концентрации) анализируемого вещества в испытуемом образце.

Выводы. Показана необходимость совершенствования математических методов оценки экспериментальных данных, используемых для определения концентрации anti-HBs антител в препаратах иммуноглобулинов человека, и важность перехода от «ручного» к автоматизированному обсчету получаемых результатов (например, с использованием 4-параметрической логистической модели) в соответствии с требованиями, предъявляемыми к биоаналитическим методам испытаний, и с учетом возможностей современного оборудования.

1. Maddrey WC. Hepatitis B: an important public health issue. J Med Virol. 2000;61(3):362–6. https://doi.org/10.1002/1096-9071(200007)61:3%3C362::aid-jmv14%3E3.0.co;2-i

2. Tabatabaei MS, Ahmed М. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Methods Mol Biol. 2022;2508:115–34. https://doi.org/10.1007/978-1-0716-2376-3_10

3. Нечаев АВ, Кудашева ЭЮ, Лешина СА, Корнилова ОГ, Коновалова ЕС, Стручкова ИН и др. Теоретическое и экспериментальное обоснование выбора перспективных методов оценки количественного содержания иммуноглобулинов классов G, А и М в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека. Иммунология. 2019;40(3):41–50. https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-13005

4. Свежова НВ, Шаркова ВЕ, Громов ДБ, Головаченко ВА, Полынцев ДГ. Методы математической обработки данных в иммуноферментном анализе. I. Теоретические основы. Клиническая лабораторная диагностика. 2008;(1):3–9. EDN: IISVNB

5. Петухов ВГ. Метод параллельных линий для количественной оценки качества стандартных образцов и других МИБП в иммуноферментном анализе. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2004;(1):19–23.

6. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика; 1998.

7. Shanmugham R, Thirumeni N, Rao VS, Pitta V, Kasthuri S, Singanallur NB, et al. Immunocapture enzyme-linked immunosorbent assay for assessment of in vitro potency of recombinant hepatitis B vaccines. Clin Vaccine Immunol. 2010;17(8):1252–60. https://doi.org/10.1128/cvi.00192-10