Preview

БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение

Расширенный поиск

Разработка и валидация методики определения концентрации антитела человека, блокирующего связывание PD-1 с лигандами, в сыворотке крови яванского макака методом биослойной интерферометрии

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-4-257-267

Полный текст:

Аннотация

Целью некоторых видов иммунотерапии злокачественных опухолей является восстановление способности Т-клеток распознавать и уничтожать опухолевые клетки. Сверхэкспрессия лиганда запрограммированной клеточной смерти (PD-L1) распространена во многих опухолях человека и связана с плохим прогнозом для пациента. Разработка моноклональных антител, специфичных к PD-L1 или PD-1, является перспективным направлением в иммунотерапии злокачественных новообразований. Однако прежде чем лекарственный препарат на основе терапевтического антитела появится на фармацевтическом рынке, необходимо убедиться в его безопасности и эффективности, то есть провести доклинические и клинические исследования в полном объеме. Цель работы: разработать и валидировать биоаналитическую методику, позволяющую без внесения дополнительных меток определить концентрацию моноклонального антитела, специфичного к PD-1 человека, в сыворотке крови биологической тест-системы в ходе проведения доклинических исследований. Материалы и методы: в работе использовали антиген в виде димера внеклеточного домена рецептора PD-1, ковалентно связанного с Fc-фрагментом иммуноглобулина человека (R&D Systems, США). Антиген иммобилизовали на биосенсоры Dip and Read Protein A (Fortebio, США). Терапевтическое моноклональное анти-PD-1 антитело GNR-051 произведено в ООО «МБЦ «Генериум» (Россия). Используемые в качестве матрицы образцы сыворотки крови здоровых яванских макак получены в ФГБНУ «НИИ МП» (г. Сочи, Россия). Оценку связывания проводили с помощью интерферометра Octet® QKe (Fortebio, США) в режиме наблюдения в реальном времени дозозависимой скорости формирования комплекса антиген–антитело. Результаты: представлены экспериментальные данные по разработке и валидации методики определения концентрации препарата моноклонального терапевтического антитела, связывающегося с клеточным рецептором PD-1, в сыворотке крови яванского макака в диапазоне концентраций антитела 2–2500 мкг/мл. Проведена оценка устойчивости параметров градуировочной кривой, оценка правильности и прецизионности между опытами и внутри опыта, оценка линейности разведения, исследована специфичность и селективность методики. Выводы: разработана и валидирована методика определения концентрации препарата моноклонального терапевтического антитела на основе биослойной интерферометрии. Показано соответствие методики требованиям нормативных документов ЕврАзЭС по основным валидационным характеристикам – аналитическому диапазону, правильности, прецизионности и селективности.

Об авторах

К. В. Ульянова
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Ульянова Ксения Владимировна,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



А. А. Казаров
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Казаров Александр Александрович,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



М. С. Пантюшенко
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Пантюшенко Марина Семеновна, канд. биол. наук,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



А. А. Оленев
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Оленев Александр Андреевич,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



И. В. Лягоскин
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Лягоскин Иван Владимирович, канд. биол. наук,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



В. М. Симонов
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Россия

Симонов Владимир Михайлович,

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125



Список литературы

1. Pardoll DM. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 2012;12(4):252–64. https://doi.org/10.1038/nrc3239

2. Wu Y, Chen W, Xu ZP, Gu W. PD-L1 distribution and perspective for cancer immunotherapy – blockade, knockdown, or inhibition. Front Immunol. 2019;10:2022. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.02022

3. Deng R, Bumbaca D, Pastuskovas CV, Boswell CA, West D, Cowan KJ, et al. Preclinical pharmacokinetics, pharmacodynamics, tissue distribution, and tumor penetration of anti-PD-L1 monoclonal antibody, an immune checkpoint inhibitor. MAbs. 2016; 8(3):593–603. https://doi.org/10.1080/19420862.2015.1136043

4. Xiaomo Wu, Zhongkai Gu, Yang Chen, Borui Chen, Wei Chen, Liqiang Weng, Xiaolong Liu. Application of PD-1 blockade in cancer immunotherapy. Comput Struct Biotechnol J. 2019;17:661–74. https://doi.org/10.1016/j.csbj.2019.03.006

5. Лепик КВ. Ингибиторы иммунных контрольных точек в терапии лимфом. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2018;11(4):303–12.

6. Rizzoli R, Yasothan U, Kirkpatrick P. Denosumab. Nat Rev Drug Discov. 2010;9(8):591–2. https://doi.org/10.1038/nrd3244


Для цитирования:


Ульянова К.В., Казаров А.А., Пантюшенко М.С., Оленев А.А., Лягоскин И.В., Симонов В.М. Разработка и валидация методики определения концентрации антитела человека, блокирующего связывание PD-1 с лигандами, в сыворотке крови яванского макака методом биослойной интерферометрии. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2020;20(4):257-267. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-4-257-267

For citation:


Ulyanova K.V., Kazarov A.A., Pantyushenko M.S., Olenev A.A., Lyagoskin I.V., Simonov V.M. Development and Validation of a Biolayer Interferometry Method for Determination of Human Anti-PD-1 Monoclonal Antibody Concentration in Cynomolgus Serum. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2020;20(4):257-267. (In Russ.) https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-4-257-267

Просмотров: 461


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2221-996X (Print)
ISSN 2619-1156 (Online)