Валидационные исследования методики спирального посева для определения «Специфической активности» лактосодержащих пробиотических препаратов

Актуальность. Определение количества жизнеспособных клеток является важным микробиологическим исследованием при оценке качества лекарственных препаратов, содержащих живые микроорганизмы. Для оптимизации трудовых и материальных затрат, повышения точности и воспроизводимости испытаний целесообразно применение частично автоматизированных инструментальных методов, к которым относится метод спирального посева.

Цель. Проведение валидационных исследований методики спирального посева при испытании по показателю «Специфическая активность» биологических лекарственных препаратов, содержащих живые бактериальные клетки, на примере лактосодержащего пробиотического лекарственного препарата.

Материалы и методы. В исследовании использовали культуру Lactiplantibacillus plantarum, выделенную из образца пробиотического лекарственного препарата. Спиральный посев на агаризованные питательные бактериологические среды осуществляли с помощью автоматической системы нанесения пробы Eddy Jet 2 с последующим автоматическим учетом результатов с применением счетчика колоний IUL Flash & Go. Валидационные исследования проводили согласно требованиям Государственной фармакопеи Российской Федерации (ОФС.1.1.0021.18).

Результаты. Определены основные валидационные характеристики методики спирального посева: рабочий диапазон от 10⁴ до 10⁵ КОЕ/мл, предел количественного определения — 10² КОЕ/мл, коэффициент линейной детерминации R² — 0,99. Правильность методики спирального посева при определении специфической активности составила 93% с повторяемостью 4,9%.

Выводы. Методика спирального посева с применением автоматического счетчика колоний может использоваться при оценке качества лактосодержащих пробиотических лекарственных препаратов по показателю «Специфическая активность», поскольку результаты валидационных исследований подтверждают аналогичность анализируемых характеристик методу Коха, который применяется в настоящее время в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации. Использование методики спирального посева способствует оптимизации затрат и повышению точности результатов испытаний.

1. Zheng J, Wittouck S, Salvetti E, Franz CMAP, Harris HMB, Mattarelli P, et al. A taxonomic note on the genus Lactobacillus: description of 23 novel genera, emended description of the genus Lactobacillus Beijerinck 1901, and union of Lactobacillaceae and Leuconostocaceae. Int J Syst Evol Microbiol. 2020;70(4):2782–858. https://doi.org/10.1099/ijsem.0.004107

2. Nordström EA, Teixeira C, Montelius C, Jeppsson B, Larsson N. Lactiplantibacillus plantarum 299v (LP299V®): three decades of research. Benef Microbes. 2021;12(5):441–65. https://doi.org/10.3920/BM2020.0191

3. Dias FRS, Lourenço FR. Measurement uncertainty evaluation and risk of false conformity assessment for microbial enumeration tests. J Microbiol Methods. 2021;189:106312. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2021.106312

4. Буйлова ИА, Гунар ОВ. Практические аспекты применения валидационных параметров на примере методик определения количественного содержания микроорганизмов в лекарственных препаратах. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2020;10(4):267–72. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2020-10-4-267-272

5. Donnelly CB, Gilchrist JE, Peeler JT, Campbell JE. Spiral plate count method for the examination of raw and pasteurized milk. Appl Environ Microbiol. 1976;32(1):21–7. https://doi.org/10.1128/aem.32.1.21-27.1976

6. Miyamoto-Shinohara Y, Imaizumi T, Sukenobe J, Murakami Y, Kawamura S, Komatsu Y. Survival rate of microbes after freeze-drying and long-term storage. Cryobiology. 2000;41(3):251–5. https://doi.org/10.1006/cryo.2000.2282

7. Соколов ДМ, Соколов МС. Автоматизация микробиологических исследований при оценке безопасности пищевых продуктов и сырья. Молочная промышленность. 2014;(2):70–3. EDN: RVAMEP

8. Ben-David A, Davidson СE. Estimation method for serial dilution experiments. J Microbiol Methods. 2014;107:214–21. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2014.08.023