Изучение вакцины против клещевого энцефалита

Актуальность. Клещевой энцефалит — один из наиболее актуальных для здоровья населения России антропозооноз, контроль над которым требует широкого охвата вакцинопрофилактикой. Масштабная вакцинация невозможна без разработки новых вакцин, например с применением перевиваемой линии клеток Vero, обладающих улучшенным профилем безопасности и эффективности.

Цель. Расширенное изучение ключевых показателей качества новой  вакцины  «ВероКСЭН» против клещевого энцефалита, полученной с использованием  перевиваемой линии клеток Vero.

Материалы и методы. В технологии создания вакцины реализованы современные подходы: накопление производственного штамма вируса клещевого энцефалита № 205 (дальневосточный субтип) в клетках перевиваемой линии Vero; использование для заключительной тонкой очистки вирусного антигена эксклюзионной хроматографии на полимерных сорбентах; введение дополнительных методов контроля. Вакцину «ВероКСЭН» получали способом, описанным в  патенте  на  изобретение  №  2678431.  Контроль  готового  продукта проводили в соответствии с методиками, описанными в Государственной фармакопее Российской Федерации. Для лабораторного изучения  вакцины  и  полупродуктов  на  мышах линии Balb/с  были  разработаны  и  внедрены  оригинальные  новые  методы  контроля, а также применялись: электрофорез в полиакриламидном геле, иммуноферментный анализ, иммуноблот с суммарными антителами против вируса клещевого энцефалита и моноклональными антителами против гликопротеина E,  метод полимеразной цепной  реакции    с обратной транскрипцией, высокоэффективная жидкостная хроматография. При расширенном лабораторном исследовании протективной  активности  использовали  тест-штаммы субтипов «Абсеттаров» (западный), «Софьин» (дальневосточный) и «Корзухин» (сибирский). Оценку инфекционной  активности  вируса  клещевого  энцефалита  проводили  при помощи фармакопейного метода титрования на беспородных мышах. Результаты исследований оценивали при помощи статистических методов анализа с вычислением среднего арифметического и среднеквадратичного отклонения.

Результаты. Изучены ключевые показатели качества новой вакцины против клещевого энцефалита «ВероКСЭН» и ее полупродуктов. Показано, что выбранный режим инактивации снижает инфекционную активность вирусного сбора до недетектируемого уровня через 24 ч, при этом антигенная активность сохраняется на уровне около 100%  от  исходного значения.  Этапы тонкой  очистки, а  также разработанные оригинальные методики  и технологии позволили получить цельновирионную фракцию с чистотой до 98,2% и удалить технологические примеси (ДНК клеток-продуцентов, бычий сывороточный альбумин, формальдегид, бактериальные эндотоксины) до уровней, соответствующих нормативным требованиям. Изучение стабильности вакцины на сроке хранения до  36  мес. подтвердило ее соответствие нормативным показателям.

Выводы. Новая вакцина обладает высокой специфической активностью в  отношении  вируса клещевого энцефалита для штаммов «Абсеттаров», «Софьин» и «Корзухин»: минимальная иммунизирующая доза (МИД₅₀) составила 0,007, 0,00125 и 0,00093 мл соответственно.

1. Riccardi N, Antonello RM, Luzzati R, Zajkowska J, di Bella S, Giacobbe DR, et al. Tick-borne encephalitis in Europe: a brief update on epidemiology, diagnosis, prevention, and treatment. Eur J Intern Med. 2019;62:1–6. https://doi.org/10.1016/j.ejim.2019.01.004

2. Johnson N, Migne CV, Gonzalez G. Tick-borne encephalitis. Curr Opin Infect Dis. 2023;36(3):198–202. https://doi.org/10.1097/qco.0000000000000924

3. Luan Y, Gou J, Zhong D, Ma L, Yin C, Shu M, et al. The tick-borne pathogens: an overview of China’s situation. Acta Parasitol. 2023;68(1):1–20. https://doi.org/10.1007/s11686-023-00658-1

4. Андаев ЕИ, Никитин АЯ, Толмачева МИ, Зарва ИД, Яцменко ЕВ, Матвеева ВА и др. Эпидемиологическая ситуация по клещевому вирусному энцефалиту в Российской Федерации в 2022 г. и прогноз ее развития на 2023 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2023;(1):6–16. https://doi.org/10.21055/0370-1069-2023-1-6-16

5. Orenstein W, Offit P, Edwards K, Plotkin S. Plotkin’s Vaccines. 7th ed. Elsevier; 2017.

6. Vidor E, Meschievitz C, Plotkin S. Fifteen years of experience with Vero-produced enhanced potency inactivated poliovirus vaccine. Pediatr Infect Dis J. 1997;16(3):312–22. https: //doi.org/10.1097/00006454-199703000-00011

7. Vorovitch MF, Grishina KG, Volok VP, Chernokhaeva LL, Grishin KV, Karganova GG, Ishmukhametov AA. Evervac: phase I/II study of immunogenicity and safety of a new adjuvant-free TBE vaccine cultivated in Vero cell culture. Hum Vaccin Immunother. 2020;16(9):2123–30. https://doi.org/10.1080/21645515.2020.1757990

8. Стронин ОВ, Колтунов АA, Епанчинцев АА, Шарова ОИ, Учуватова ЕВ, Дьяконова ЕВ и др. Способ получения вакцины клещевого энцефалита. Патент Российской Федерации № 2678431; 2017.

9. Weber K, Osborn M. The reliability of molecular weight determinations by dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. J Biol Chem. 1969;244:4406–12. PMID: 5806584

10. Zlatkovic J, Tsouchnikas G, Jarmer J, Koessl C, Stiasny K, Heinz FX. Aluminum hydroxide influences not only the extent but also the fine specificity and functional activity of antibody responses to tick-borne encephalitis virus in mice. J Virol. 2013;87(22): 12187–95. https://doi.org/10.1128/JVI.01690-13

11. Heinz FX, Kunz C. Chemical crosslinking of tick-borne encephalitis virus and its subunits. J Gen Virol. 1980;46(2):301–9. https://doi.org/10.1099/0022-1317-46-2-301