Особенности методического подхода к определению специфической активности интерферона альфа типа

Для препаратов интерферона альфа типа (ИФН) одним из наиболее значимых показателей, характеризующих их фармацевтическое качество и фармакологическую эффективность, является специфическая противовирусная активность. Для определения специфической активности используют биологический метод количественного определения противовирусной активности на культуре клеток. Цель работы: выбор наиболее оптимальных условий проведения анализа по определению специфической активности препаратов ИФН in vitro. Материалы и методы: количественное определение специфической противовирусной активности проводили с использованием культур клеток гомологичного и гетерологичного происхождения: Vero; MDBK; Hep-2; А-549 и вирусов: везикулярного стоматита (VSV) штамма Индиана и энцефаломиокардита мышей (ЕМС) в дозе 100 ТЦД₅₀/0,1 мл. В качестве образцов ИФН использовали международный стандарт активности рекомбинантного интерферона альфа-2b (Interferon alpha 2b, human, rDNA, E. coli-derived 2nd WHO International Standart 1999 NIBSC, code № 95/566) и интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, субстанция-раствор (серия 040214, ООО «Фармапарк», Россия). Результаты: анализ полученных данных позволил определить наиболее чувствительные к действию ИФН комбинации клеточных линий и индикаторного вируса; оптимальную концентрацию эмбриональной сыворотки в среде и временные параметры; предпочтительный способ учета результатов испытания. Выводы: выбраны оптимальные условия проведения анализа по определению специфической активности препаратов ИФН – наиболее чувствительными к интерферону альфа являются комбинации клеточная культура/вирус: клетки MDBK/вирус VSV и клетки Hep-2/вирус EMC; время инкубирования интерферона с клеточной культурой – 24 ч; концентрация эмбриональной телячьей сыворотки в питательной среде, используемой для разведений препаратов интерферона – 2–5 %. При учете результатов исследования противовирусной активности интерферона более предпочтительным является инструментальный способ, как более современный, объективный, точный и менее трудоемкий.

1. Pestka S, Langer JA, Zoon KC, Samuel CE. Interferons and their actions. Annu Rev Biochem. 1987;56:727–77. https://doi.org/10.1146/annurev.bi.56.070187.003455

2. Stark GR, Kerr IM, Williams BR, Silverman RH, Schreiber RD. How cells respond to interferons. Annu Rev Biochem. 1998;67:227–64. https://doi.org/10.1146/annurev.biochem.67.1.227

3. Biron CA. Interferons alpha and beta as immune regulators — a new look. Immunity. 2001;14(6):661–4. https://doi.org/10.1016/s1074-7613(01)00154-6

4. Quesada JR, Gutterman JU, Hersh EM. Treatment of hairy cell leukemia with alpha interfe rons. Cancer. 1986;57(8 Suppl):1678–80. https://doi.org/10.1002/1097-0142(19860415)57:8+%3C1678::aid-cncr2820571308%3E3.0.co;2-6

5. Baron S, Tyring SK, Fleischmann WR Jr, Coppenhaver DH, Niesel DW, Klimpel GR, et al. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications. JAMA. 1991;266(10):1375– 83. https://doi.org/10.1001/jama.266.10.1375

6. Larocque L, Bliu A, Xu Ranran, Diress A, Wang J, Lin R, et al. Bioactivity determination of native and variant forms of therapeutic interferons. J Biomed Biotechnol. 2011;2011:174615. https://doi.org/10.1155/2011/174615

7. Meager A, Gaines Das R, Zoon K, Mire-Sluis A. Establishment of new and replacement World Health Organization International Biological Standards for human interferon alpha and omega. J Immunol Methods. 2001;257(1–2):17–33. https://doi.org/10.1016/s0022-1759(01)00460-4

8. Авдеева ЖИ, Алпатова НА, Солдатов АА, Бондарев ВП, Бунятян НД, Меркулов ВА и др. Особенности доклинических исследований биотехнологических лекарственных препаратов. Иммунология. 2015;36(5):306–12.

9. Meager A. Assays for antiviral activity. Methods Mol Biol. 2004;249:121–34. https://doi.org/10.1385/1-59259-667-3:121

10. Алпатова НА, Авдеева ЖИ, Солдатов АА, Бондарев ВП, Медуницын НВ. Принципы оценки специфической активности биотехнологических лекарственных препаратов. Цитокины и воспаление. 2015;14(3):10–8.

11. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М.: Практика; 1998.