Preview

БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение

Расширенный поиск

Физико-химические и биологические свойства биоподобного и референтного препаратов тканевого активатора плазминогена

https://doi.org/10.30895/2221-996X-2019-19-1-39-49

Полный текст:

Аннотация

Рекомбинантный тканевой активатор плазминогена (международное непатентованное название — алтеплаза), разработанный и зарегистрированный компанией АО «ГЕНЕРИУМ» (Россия), является полным аналогом лекарственного препарата Актилизе®, используемого для лечения заболеваний, сопровождающихся тромбообразованием, таких как инфаркт миокарда, тромбоэмболия легочной артерии и ишемический инсульт. Цель работы: провести комплексное исследование сопоставимости физико-химических и биологических характеристик лекарственного препарата Ревелиза® и референтного препарата Актилизе® для оценки их биоподобия. Материалы и методы: сравнительное пептидное картирование с определением сопоставимости хроматографических профилей триптических гидролизатов проводилось методами ОФ-ВЭЖХ и масс-спектрометрии, определение молекулярно-массового распределения — методами масс-спектрометрии и электрофореза в полиакриламидном геле по Леммли. Для определения чистоты и гомогенности препаратов, а также содержания родственных примесей (олигомеров, фрагментов) использовали метод гель-фильтрации; исследование профиля N-гликозилирования осуществляли методом гидрофильной ВЭЖХ, определение тотального содержания сиаловых кислот — методом Свеннерхольма. Оценку связывания белка с фибрином и фибриногеном человека проводили методом поверхностного плазмонного резонанса, сравнение специфической активности — методом лизиса фибринового сгустка. Результаты: в ходе исследований было продемонстрировано полное совпадение пептидных карт анализируемых препаратов, что свидетельствует об идентичности аминокислотной последовательности алтеплазы в составе сравниваемых препаратов. Также сравнительно были определены молекулярная масса и содержание интактной одноцепочечной формы белка в лекарственных препаратах, количественно охарактеризованы посттрансляционные модификации, содержание сиаловых кислот и нейтральных сахаров. При изучении профиля N-гликозилирования обнаружены незначительные различия в процентном содержании мультиантенных комплексных гликанов. Специфичность алтеплазы оценивали при образовании белковых комплексов с природными лигандами алтеплазы — фибрином и ингибитором активатора плазминогена первого типа, при этом достоверных различий обнаружено не было. При сравнении специфической активации фибринолитической активности плазминогена в тесте на скорость лизиса фибринового сгустка была продемонстрирована сопоставимость препаратов Ревелиза® и Актилизе®. Выводы: проведенные сравнительные экспериментальные исследования показали отсутствие различий в структуре, гетерогенности распределения зарядов, содержании примесей, а также специфической активности алтеплазы в составе лекарственного препарата Ревелиза® и референтного препарата Актилизе®, что позволяет сделать вывод о сопоставимости препаратов по физико-химическим и биологическим свойствам.

Об авторах

В. Д. Гусарова
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела аналитических методов ООО «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»


М. С. Пантюшенко
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела аналитических методов


В. М. Симонов
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
научный сотрудник отдела аналитических методов


Р. Р. Шукуров
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
канд. биол. наук, начальник лаборатории физико-химических методов отдела аналитических методов


Р. А. Хамитов
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
д-р мед. наук, профессор, генеральный директор


А. Ю. Вишневский
Общество с ограниченной ответственностью «Международный биотехнологический центр «ГЕНЕРИУМ»
Россия
канд. биол. наук, начальник отдела аналитических методов


Список литературы

1. Guzzetta AW, Basa LJ, Hancock WS, Keyt BA, Bennett WF. Identification of carbohydrate structures in glycoprotein peptide maps by the use of LC/MS with selected ion extraction with special reference to tissue plasminogen activator and a glycosylation variant produced by site directed mutagenesis. Anal Chem. 1993;65(21):2953–62.

2. Spellman MW, Basa LJ, Leonard CK, Chakel JA, O’ConnorJV, Wilson S, van Halbeek H. Carbohydrate structures of human tissue plasminogen activator expressed in Chinese hamster ovary cells. J Biol Chem. 1989;264(24):14100–11.

3. Harris RJ, Leonard CK, Guzzetta AW, Spellman MW. Tissue plasminogen activator has an O-linked fucose attached to threonine-61 in the epidermal growth factor domain. Biochemistry. 1991;30(9):2311–4.

4. Parekh RB, Dwek RA, Thomas JR, Opdenakker G, Rademacher TW, Wittwer AJ, et al. Cell-type-specific and site-specific N-glycosylation of type I and type II human tissue plasminogen activator. Biochemistry. 1989;28(19):7644–62.

5. Wittwer AJ, Howard SC, Carr LS, Harakas NK, Feder J, Parekh RB, et al. Effects of N-glycosylation on in vitro activity of Bowes melanoma and human colon fibroblast derived tissue plasminogen activator. Biochemistry. 1989;28(19):7662–9.

6. Berg DT, Burck PJ, Berg DH, Grinnell BW. Kringle glycosylation in a modified human tissue plasminogen activator improves functional properties. Blood. 1993;81(5):1312–22.

7. Cole ES, Nichols EH, Poisson L, Harnois ML, Livingston DJ. In vivo clearance of tissue plasminogen activator: The complex role of sites of glycosylation and level of sialylation. Fibrinilysis. 1993;7(1):15–22. https://doi.org/10.1016/0268-9499(93)90050-6

8. Chloupek RC, Harris RJ, Leonard CK, Keck RG, Keyt BA, Spellman MW, et al. Study of the primary structure of recombinant tissue plasminogen activator by reversedphase high-performance liquid chromatographic tryptic mapping. J Chromatogr. 1989;463(2):375–96.

9. Kim PY, Tieu LD, Stafford AR, Fredenburgh JC, Weitz JI. A high affinity interaction of plasminogen with fibrin is not essential for efficient activation by tissue-type plasminogen activator. J Biol Chem. 2012;287(7):4652–61. https://doi.org/10.1074/jbc.M111.317719

10. Björquist P, Brohlin M, Ehnebom J, Ericsson M, Kristansen C, Pohl G, Deinum J. Plasminogen activator inhibitor type-1 interacts exclusively with the proteinase domain of tissue plasminogen activator. Biochim Biophys Acta. 1994;1209(2):191–202.


Для цитирования:


Гусарова В.Д., Пантюшенко М.С., Симонов В.М., Шукуров Р.Р., Хамитов Р.А., Вишневский А.Ю. Физико-химические и биологические свойства биоподобного и референтного препаратов тканевого активатора плазминогена. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2019;19(1):39-49. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2019-19-1-39-49

For citation:


Gusarova V.D., Pantyushenko M.S., Simonov V.M., Shukurov R.R., Khamitov R.A., Vishnevskiy A.Y. Physico-Chemical and Biological Properties of Biosimilar and Reference Tissue Plasminogen Activator Products. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2019;19(1):39-49. (In Russ.) https://doi.org/10.30895/2221-996X-2019-19-1-39-49

Просмотров: 95


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2221-996X (Print)
ISSN 2619-1156 (Online)