Адъюванты вакцин стимулируют формирование сильного и продолжительного иммунного ответа, а их использование в вакцинах позволяет уменьшить концентрацию антигенов, повысить эффективность и снизить производственные затраты [1–4]. Соединения на основе алюминия (алюминия гидроксид, алюминия фосфат, алюминиево-калиевые квасцы) используют в вакцинах практически сто лет. Адъювантный эффект соединений на основе алюминия впервые описал в 1926 г. А. Гленни, который получил адсорбированный дифтерийный анатоксин и доказал, что его эффективность выше неадсорбированного анатоксина. Такие адъюванты в настоящее время широко используют в вакцинах против гепатита А и В, дифтерии, столбняка, коклюша, гемофильной инфекции типа b, вируса папилломы человека, менингококковой инфекции (серогруппы B и ABCWY), а также пневмококковой инфекции [5][6].

Вакцины производят как монопрепараты, но в основном как комбинированные препараты, состоящие из двух и более антигенов. Первая комбинированная адсорбированная вакцина для профилактики дифтерии, столбняка и коклюша (АКДС-вакцина) широко применяется с середины 40-х годов прошлого столетия. АКДС-вакцина является ключевой в календаре прививок в каждой стране мира. Начиная с 1990-х годов реализация стратегии профилактики и контроля инфекционных заболеваний привела к созданию новых комбинаций вакцин на основе АКДС-вакцины [7]. Новые комбинированные вакцины предусматривают профилактику бактериальных и вирусных инфекций, некоторые из них предназначены для людей без ограничения по возрасту. В настоящее время известно около 15 различных комбинаций вакцин на основе АКДС1.

Применение комбинированных многокомпонентных вакцин позволяет обеспечить широкий охват населения вакцинацией, эффективнее соблюдать режим вакцинации, сократить количество инъекций и визитов к врачу и снизить логистические издержки, особенно в странах с ограниченными ресурсами [8][9]. Несмотря на преимущества многокомпонентных вакцин, существует ряд нерешенных проблем, связанных с антигенной интерференцией, выбором совместимых адъювантов, сложностями производства и различиями в требованиях национальных регуляторных органов. Каждый антиген в составе комбинированной вакцины производится отдельно в соответствии со своими правилами и стандартами контроля качества. Затем антигены объединяют в единый препарат, что делает общий процесс производства достаточно сложным и дорогостоящим. Это ограничивает число производителей, способных осуществить крупномасштабное производство поливалентных вакцин [5].

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) и регуляторные органы некоторых стран разработали ряд нормативных документов, включая руководства и рекомендации по производству и контролю качества комбинированных вакцин2. Документы ВОЗ составляют основу для услуги преквалификации ВОЗ и закупки вакцин для глобальных программ иммунизации Организацией Объединенных Наций. Эти документы также могут быть приняты национальными регуляторными органами и производителями в качестве основных требований к производству и контролю качества препаратов.

При производстве вакцин соблюдаются строгие требования контроля качества для каждого этапа производственного цикла, обеспечивающие безопасность и эффективность от партии к партии. Одним из важных показателей качества является степень адсорбции антигенов на адъюванте (в Российской Федерации используется термин «полнота сорбции»)3. Постоянный уровень степени адсорбции компонентов вакцины от серии к серии также указывает на стабильность процесса производства вакцины. Требования к показателю степени адсорбции компонентов АКДС-вакцины менялись на протяжении всего периода существования препарата. В Руководстве ВОЗ по производству и качеству вакцины против столбняка (1977 г.) упоминается, что должно быть адсорбировано не менее 80% анатоксина4. Согласно существующим требованиям ВОЗ и Европейской фармакопеи (Ph. Eur.) степень адсорбции компонентов вакцины должна соответствовать степени адсорбции серий, безопасность и эффективность которых была подтверждена в клинических испытаниях5. В рекомендациях ВОЗ для АКДС-вакцины нет прямого указания на величину степени адсорбции дифтерийного (ДА) и столбнячного (СА) анатоксинов, а есть только указания на то, что требования должны быть утверждены национальным контрольным органом. В США минимальные требования к СА и ДА для взрослых составляют не менее 75% адсорбции дифтерийного компонента. Отсутствие международных требований к полноте сорбции вызывает сложности в адекватной оценке качества большого разнообразия АКДС-вакцин, присутствующих на современном фармацевтическом рынке.

Цель работы — анализ данных литературы и требований нормативных документов к определению полноты сорбции дифтерийного и столбнячного анатоксинов в составе комбинированных вакцин для совершенствования системы контроля качества и гармонизации национальных требований с мировыми стандартами качества.

Несмотря на то что адъюванты на основе алюминия используются в широкой медицинской практике с 1940-х годов, точный механизм действия остается до сих пор неясным. Адъювантное действие гидроксида алюминия проявляется в эффекте депо, стимуляции фагоцитоза антиген-презентирующими клетками, дестабилизации мембраны дендритных клеток, активации системы комплемента, стимуляции и дифференцировке CD4⁺ Т-клеток [5][10][11]. В экспериментах было показано, что адсорбированный ДА может сохраняться в месте инъекции более 7 нед. [5]. Исследования последних десятилетий продемонстрировали, что адъюванты избирательно стимулируют дендритные клетки, индуцируя выработку цитокинов и стимулируя высвобождение антигена. Таким образом, адъюванты оказывают прямое или косвенное воздействие на клетки, участвующие в формировании иммунного ответа.

Иммуностимулирующий ответ выражается в развитии воспалительной реакции в месте инъекции адсорбированной вакцины. Воспалительная реакция на введение вакцины играет ведущую роль в формировании иммунного ответа [1][12][13]. В экспериментах на мышах было показано, что через несколько часов в месте инъекции появлялись нейтрофилы и макрофаги. Макрофаги поглощают частицы адъюванта, что стимулирует активную миграцию эозинофилов, макрофагов и антигенпрезентирующих клеток [14]. G.L. Morefield с соавт. [10] и M.W. Munks с соавт. [15] продемонстрировали что введение вакцины индуцирует миграцию нейтрофилов, которые выделяют цитокины: интерлейкин-1 бета, интерлейкин-5 и хемокиновый лиганд 2. В свою очередь, это ведет к активации Т-клеток, моноцитов и тучных клеток, привлекая к очагу воспаления нейтрофилы и эозинофилы. Адъюванты усиливают ответы как T-, так и B-лимфоцитов, что приводит к увеличению пула B-клеток памяти и долгоживущих плазматических клеток, секретирующих антитела.

Адъювант может усиливать способность моноцитов и дендритных клеток к захвату антигена в макрофагах и периферической крови. Комплексы, содержащие адъюванты на основе алюминия, способствуют активации и созреванию антигенпрезентирующих клеток [1][10][16][17]. Результаты исследований [1][10][18] показали, что адъюванты активируют дифференцировку моноцитов в дендритные клетки, тем самым увеличивая способность к захвату антигена. Зрелые антигенпрезентирующие макрофаги особенно важны для формирования иммунного ответа, который обеспечивает долгосрочную защиту. Адъювант также способствует переносу антигенпрезентирующих клеток в лимфоидную ткань. После подкожной или внутримышечной инъекции такие клетки продолжают мигрировать в отдаленные лимфатические узлы и селезенку [19]. Кроме того, дендритные клетки попадают в кровь через грудной проток лимфатической системы и мигрируют в различные органы. Адъювант на основе алюминия также может индуцировать выработку интерлейкина-1 бета и интерлейкина-18 [1][10][17], способствуя дифференцировке CD4⁺ Т-клеток в Th2-клетки и усиливая выработку антител.

Таким образом, иммунный ответ, вызываемый адсорбированными вакцинами, формируется посредством комплекса механизмов. Результаты современных исследований механизмов действия вакцин, адсорбированных на адъювантах на основе алюминия, еще раз доказывают, что степень адсорбции антигенов является одним из важных показателей качества вакцины, которому должна соответствовать вакцина в течение всего срока годности.

Антигены, входящие в состав многокомпонентных комбинированных вакцин, отличаются по своей природе. Вследствие чего производство комбинированных адсорбированных вакцин является сложным процессом. Известно, что компоненты вакцины могут оказывать взаимное влияние друг на друга из-за физических, химических и иммунологических взаимодействий. Проблема заключается и в том, что число возможных взаимодействий между различными компонентами в комбинированных вакцинах не увеличивается линейно по мере добавления антигенов. Эффект взаимного влияния компонентов вакцины непредсказуем и должен быть изучен для каждого продукта [11][20][21]. Тщательное изучение взаимодействия антигена и адъюванта имеет основополагающее значение для предотвращения непредвиденных результатов взаимодействия и для обеспечения стабильности вакцины после процесса сорбции. Выбор технологии адсорбции может отчасти способствовать решению проблемы.

Существуют следующие технологии адсорбции антигенов в комбинированных вакцинах: последовательная адсорбция, конкурентная адсорбция, раздельная адсорбция.

Последовательная адсорбция заключается в том, что адъювант помещают в реактор, куда последовательно добавляют антигены. В данной технологии степень адсорбции зависит от адъюванта, последовательности вносимых антигенов, условий сорбции — рН и изоэлектрической точки антигена. Эта технология достаточно проста, но имеет риски, связанные с тем, что в зависимости от очередности внесения компонентов может происходить частичная десорбция уже сорбированных [22][23].

Конкурентная адсорбция — сорбция in situ, когда в реактор вносят сразу все компоненты вакцинной смеси. В этом случае антигены конкурируют за место на поверхности адъюванта. Такая технология сорбции была разработана одной из первых в истории вакцинного дела, когда была установлена способность солей алюминия усиливать иммунный ответ [24]. Однако в подобном процессе существуют серьезные риски, так как на этапе установления термодинамического равновесия ранее адсорбированные антигены могут снова десорбироваться. Кроме того, одни антигены могут маскировать другие посредством образования «белковой короны», которая из-за высокой плотности адсорбированных антигенов может блокировать или уменьшать доступ клеток иммунной системы к целевому антигену. В исследованиях степени адсорбции некоторых вакцин [24] в надосадочной жидкости доля неадсорбированных антигенов составила более 50% и количество неадсорбированного антигена в супернатанте менялось в процессе хранения.

Раздельная адсорбция — адсорбция антигенов в индивидуально оптимизированных и контролируемых условиях. Раздельная адсорбция каждого антигена является лучшим способом достижения стабильной и полной адсорбции. Применение полностью сорбированных антигенов для сведения всех компонентов вакцины в готовую форму, а именно их разбавление, смешивание и корректировка значения рН, не приведут к десорбции антигенов в течение срока годности вакцины [24].

Таким образом, производство адсорбированных вакцин является сложным процессом, но при соблюдении определенных условий возможно производство вакцин с полной адсорбцией антигенов в течение всего срока годности. Для каждой новой комбинированной вакцины необходима индивидуальная разработка условий адсорбции, даже если вакцина содержит хорошо известные компоненты.

Безопасность, эффективность и стабильность вакцины являются основными требованиями для обеспечения ожидаемой иммунологической защиты в течение всего срока годности вакцинного препарата. Учитывая, что в комбинированных вакцинах все еще существуют неизученные взаимодействия между компонентами вакцины, минимальным требованием является производство безопасного и стабильного препарата. При производстве препарата процесс адсорбции антигенов зависит не только от характеристик антигенов. Значительное влияние оказывают размер и тип используемого соединения алюминия, заряды адъювантов и антигенов. Физико-химические свойства частиц, такие как размер, заряд, гидрофобность, морфология, шероховатость поверхности, кривизна, гибкость, влияют на характер и степень адсорбции белкового антигена [11][21][25].

На процесс адсорбции влияют некоторые технические параметры производственных условий, таких как порядок добавления реагентов, скорость смешивания, геометрия лопастей [20], и качественные характеристики самого адсорбента. Для АКДС-вакцины в качестве адъюванта часто используют гель алюминия гидроксида (АлГ). Одни производители вакцин производят гель АлГ самостоятельно, другие используют коммерчески доступные продукты, например Alhydrogel (Дания), или сочетают производство геля АлГ и адсорбцию антигенов в процессах in situ. Единые требования к качеству геля АлГ для адсорбции антигена не установлены ВОЗ. Тем не менее в документе ВОЗ № 9876 уделено внимание ключевым качественным характеристикам адъюванта, которые должны быть установлены: размер частиц и адсорбционная способность — важные показатели качества адъюванта для формирования иммунного ответа, стабильность pH и отсутствие посторонних примесей (например, сульфатов, хлоридов и др.), апирогенность и изоэлектрическая точка. Некоторые из них должны контролироваться для каждой партии адъюванта, в том числе по ряду биохимических и биологических характеристик. В других исследованиях показано, что размер частиц адъюванта оказывает значительное влияние на формирование специфических антител, а именно, чем меньше размер частиц, тем сильнее иммунный ответ [5][10][11][23][26][27].

В связи с отсутствием международных нормативных требований к гелю АлГ каждый производитель может разработать частные нормы и критерии оценки, вследствие чего сравнить физико-химические и биологические свойства АлГ различных производителей не представляется возможным. Кроме того, какие-либо упоминания о прямых сравнениях коммерчески доступных АлГ в рецензируемой научной литературе авторами не обнаружены. В свою очередь, в Ph. Eur. и Фармакопее США установлены требования к гелю АлГ, используемому для адсорбции. С требованиями Ph. Eur. гармонизированы требования к адъювантам на основе соединений алюминия в Китайской фармакопее. В Индийской фармакопее7 (монография, посвященная адъювантам) описываются основные физико-химические свойства, которые должны быть изучены и определены, при этом нормативы не установлены. В Российской Федерации в настоящее время отсутствуют фармакопейные требования к качеству геля АлГ, используемого в качестве адъюванта. Опубликован проект общей фармакопейной статьи8, который полностью гармонизирован с Ph. Eur. Сравнение нормативных требований к гелю АлГ Европейской и Китайской фармакопей, фармакопеи США представлено в таблице 1.

В фармакопеях определены требования не только к физико-химическим и биологическим качественным характеристикам (табл. 1), но и в отношении содержания примесей. Тесты на сорбционную активность и седиментацию являются критически важными. Сорбционная активность — показатель, по которому определяют максимальное количество антигена, которое может прочно связаться с единицей массы адъюванта. Тест с бычьим сывороточным альбумином (BSA) является «золотым стандартом» для оценки сорбционной способности геля АлГ9. BSA — модельный белок, для которого хорошо изучен и детально описан механизм электростатического взаимодействия с гелем АлГ [28]. Определение скорости седиментации не является сложным в выполнении тестом: в градуированный цилиндр наливают гель АлГ и оставляют на ровной поверхности, а через 24 ч визуально определяют объем надосадочной жидкости. Скорость седиментации — важный индикатор качества структуры геля, который показывает, насколько частицы склонны к агрегации, а также является косвенным показателем размера частиц и стабильности суспензии.

В России не разработаны фармакопейные требования к гелю АлГ. Производители адсорбированных вакцин закупают коммерчески доступный гель АлГ или производят in-house. В основном представлены коммерчески доступные гели алюминия гидроокиси, например Alhydrogel (Дания) фармакопейного качества и продукт производства ФКП «Щелковский биокомбинат»10, на официальном сайте которого указаны способ получения и описание продукта.

В открытом доступе авторы данной статьи не обнаружили информации о спецификациях на гели АлГ, производимые in-house. В работах, посвященных получению АлГ и изучению его свойств [29–32], сорбционную активность геля АлГ оценивали по способности сорбировать краситель конго красный методом колориметрии. Очевидно, что методы, применяемые для оценки качественных характеристик геля АлГ, должны быть адекватными для обеспечения безопасности и стабильности конечного продукта11, следовательно, должны быть валидированы и стандартизированы. Поскольку в Государственной фармакопее Российской Федерации (ГФ РФ) требования к гелю АлГ, используемому в качестве адъюванта, не сформулированы, следует полагать, что российские производители вакцин для контроля качества геля АлГ применяют требования и методы in-house.

Гель АлГ для адсорбции антигенов является одним из ключевых компонентов вакцины, который напрямую взаимодействует с иммунной системой, и его чистота, стабильность и стандартизованность по качественным характеристикам определяют главные свойства вакцины — безопасность и эффективность на протяжении всего срока годности. В то же время нормативные требования в Российской Федерации к АлГ как к адъюванту основаны только на общей фармакопейной статье12, что является недостаточным для формирования практических регуляторных подходов по надзору за качеством адъювантов в вакцинах на основе АКДС.

В настоящее время отсутствуют международные требования к величине степени адсорбции компонентов АКДС-вакцины. Тем не менее производители АКДС-вакцин устанавливают требования и определяют эту величину как минимум на стадии получения адсорбированного антигена и/или на стадии сведения компонентов. Существуют три метода13, пригодных для определения содержания адсорбированных ДА и СА: иммуноферментный анализ (ИФА); ракетный иммуноэлектрофорез (РИФ); реакция флокуляции по Рамону.

Метод РИФ основан на электрофоретическом движении антигена в геле, содержащем специфические антитела. При действии электрического тока антиген мигрирует, образуя преципитат с антителами, формируя пики в виде «ракет». Высота «ракеты» прямо пропорциональна концентрации антигена.

Методы ИФА и РИФ предусматривают испытание целого образца вакцины (вакцину десорбируют для удаления адъюванта) и надосадочной жидкости, которую получают путем центрифугирования. Для постановки методов требуется специальное оборудование и соответствующие критичные реагенты, такие как моноклональные и/или поликлональные антитела, а также стандартные сыворотки. Величину степени адсорбции рассчитывают как отношение содержания анатоксина в надосадочной жидкости (супернатант) к содержанию анатоксина в целом образце вакцины и выражают в процентах (формула (1))14:

(1)

где А — количество анатоксина в целом образце вакцины, Lf/мл; В — количество анатоксина в супернатанте, Lf/мл.

Содержание неадсорбированных анатоксинов в реакции флокуляции определяют в надосадочной жидкости. При взаимодействии антигена с антителом, взятых в эквивалентном количестве, происходит образование видимых хлопьев — флокулятов. Метод является полуколичественным; результат выражают как содержание неадсорбированного анатоксина в надосадочной жидкости, значение которого не должно превышать регламентированного содержания. Степень адсорбции выражают в общепринятых международных единицах флокуляции Lf (limit of flocculation, flocculation value, флоккулирующая единица). Согласно Рекомендациям ВОЗ15 по производству и контролю качества АКДС-вакцины методом РИФ и в реакции флокуляции по Рамону, определяют активность, чистоту и содержание антигена. Для оценки степени адсорбции ДА и СА рекомендован метод ИФА.

В Ph. Eur. требование к контролю степени адсорбции анатоксинов в готовой форме вакцины отсутствует, количественное содержание неадсорбированных анатоксинов в надосадочной жидкости не лимитируется. В Российской Федерации подход к оценке данного показателя качества иной — установлены строгие требования к полноте сорбции антигенов в готовом препарате16. В отношении ДА этот показатель должен составлять не более 1 Lf/мл в надосадочной жидкости; показатель определяют в реакции флокуляции по Рамону; СА — не более 1 ЕС/мл в надосадочной жидкости (ЕС — единица связывания). ЕС представляет собой такое количество анатоксина, которое способно связать 1 МЕ (международная единица) соответствующей антитоксической сыворотки; показатель определяют в тесте in vivo на белых мышах17. Если исследование удовлетворяет этим условиям, считают, что сорбция антигена полная.

Сравнение существующих методов определения степени адсорбции ДА и СА в АКДС-вакцине представлено в таблице 2. Метод определения степени адсорбции СА на мышах не отражен, поскольку применяется только в Российской Федерации и результат выражается не в общепринятых международных единицах.

ИФА является наиболее высокочувствительным из трех рассматриваемых методов и характеризуется пределом количественного определения18: ДА — 0,005 Lf/мл, СА — 0,002 Lf/мл. Для контроля степени адсорбции возможно применение как прямого, так и непрямого теста ИФА. Критичными реагентами (два или три наименования) являются международные стандарты NIBSC (The National Institute for Biological Standards and Control), которые можно заменить на стандарты in-house при условии их калибровки относительно международных стандартов. Метод РИФ считают менее точным и чувствительным по сравнению с ИФА. Постановка реакции флокуляции не связана с использованием специального оборудования, но для работы необходимы стандартные сыворотки, откалиброванные относительно международных стандартов. Реакция флокуляции непригодна для количественного определения антигенов, сорбированных на АлГ. Таким образом, несмотря на высокую стоимость постановки метода ИФА, только данный метод позволяет с наибольшей точностью определить количество адсорбированных антигенов.

Оценка качества адъюванта и степени адсорбции антигенов на нем имеет решающее значение для безопасности и эффективности вакцины. Необходимость адсорбции компонентов АКДС-вакцин на адъювантах и важность ее количественной оценки являются предметом рассмотрения с точки зрения эффективности конечного вакцинного продукта [22][26][33][34]. Данные некоторых исследований свидетельствуют о том, что количество антигена, адсорбированного на адъюванте, не коррелирует с титром антител, полученных в результате вакцинации, из чего следует вывод, что подход к оценке качества вакцины по данному показателю может быть пересмотрен. Вне зависимости от современных исследований производители АКДС-вакцин не планируют отказываться от определения степени адсорбции антигенов на определенных стадиях производственного цикла. Этот показатель остается важным маркером стабильности производства и качества вакцины не только для производителей, но и для регуляторных органов.

Сравнительная оценка современных требований к показателю степени адсорбции ДА и СА в АКДС-вакцине выявила, что в Российской Федерации не выработаны нормативные требования к качеству геля алюминия как адъюванту. Применяемые в производстве адсорбированных препаратов коммерчески доступные препараты АлГ имеют существенные различия в качественных характеристиках. Кроме того, производитель вакцины должен самостоятельно определять их перечень, нормы, профиль безопасности и оценивать соответствие качеству. Ввиду критического влияния качества АлГ на безопасность и иммуногенность вакцины качественные характеристики и методы их контроля должны быть установлены в ГФ РФ, что позволит более системно понимать процесс адсорбции и надежно гарантировать стабильность производственного процесса.

В вакцинах российского производства содержание столбнячного компонента и степень его адсорбции оценивают методом in vivo на белых мышах, выражают в единицах связывания (ЕС), а не в Lf, как установлено ВОЗ. Разница подходов к оценке качества и единиц выражения степени адсорбции ограничивает конкурентоспособность отечественных вакцин по сравнению с зарубежными. Следует отметить, что эффективность российских вакцин против дифтерии и столбняка отвечает международным требованиям, о чем также свидетельствует низкая заболеваемость дифтерией и столбняком среди всех групп населения19. Для гармонизации требований к содержанию СА необходимо провести сравнительные испытания активности образцов столбнячных анатоксинов в реакции флокуляции и в реакции связывания антитоксина для оценки возможности перехода от ЕС к Lf. Результаты данной работы будут иметь научно-практическую значимость для гармонизации требований к выражению содержания СА, исключения необходимости работы с патогенным материалом при заражении животных, а также замены метода in vivo на in vitro в русле следования принципам 3Rs.

Степень адсорбции антигенов в реакции флокуляции по Рамону определяют не только в Российской Федерации, но и, например, в Таиланде [23]. С целью соответствия производства и контроля АКДС-вакцины рекомендациям ВОЗ Государственная фармацевтическая организация Таиланда провела сравнительные испытания реакции флокуляции и ИФА. Полученные результаты позволили сделать вывод, что ИФА является наиболее подходящим методом для оценки степени адсорбции анатоксинов. В ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России были проведены предварительные испытания степени сорбции ДА и СА в отечественных вакцинах методом ИФА, которые показали, что степень адсорбции для каждого из анатоксинов составила более 90%. В настоящее время существуют объективные предпосылки и возможности для замены применяемых в Российской Федерации методик определения степени адсорбции ДА и СА на количественную и более робастную методику ИФА.

Анализ требований нормативных документов и данных литературы указывает на необходимость изменения используемых в Российской Федерации подходов к контролю степени адсорбции антигенов в комбинированных АКДС-вакцинах. Целесообразно формирование отдельных нормативных требований к гелю алюминия гидроксида, в том числе требований к ключевым показателям (размер частиц, сорбционная активность, наличие посторонних примесей).

Очевидна потребность усовершенствования существующих методик определения степени адсорбции дифтерийного и столбнячного анатоксинов. Стандартизация требований к качеству геля алюминия гидроксида для адсорбции и переход на более точные методы исследований позволят уменьшить различия в нормативных требованиях к комбинированным АКДС-вакцинам, принимая во внимание современные подходы к регистрации и взаимному признанию вакцин.

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства критериям ICMJE. Наибольший вклад распределен следующим образом: Е.И. Комаровская — концепция работы, написание текста рукописи, формулировка выводов; К.А. Лыско — идея исследования, формулировка выводов.

Благодарности. Коллектив авторов благодарит О.В. Проскурину (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России) за выполнение экспериментальной части.

Использование генеративного искусственного интеллекта. Авторы заявляют, что не использовали генеративный ИИ при подготовке рукописи.

Author contributions. All authors confirm that they meet the ICMJE criteria for authorship. The most significant contributions were as follows. E.I. Komarovskaya conceptualised the study, drafted the manuscript, formulated the conclusions. K.A. Lysko conceptualized the research idea and formulated the conclusions.

Acknowledgements. The authors thank to O.V. Proskurina (Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products) for performing the experimental part.

Use of generative artificial intelligence. The authors declare that no generative AI was used during the preparation of this manuscript.

1. Diphtheria, tetanus, pertussis containing vaccines: Market and supply. UNICEF; 2023. https://www.unicef.org/supply/media/17606/file/Diphtheria-Tetanus-Pertussis-Vaccine-Containing-Market-and-Supply-Update-June-2023.pdf Gavi vaccine funding guidelines. https://www.gavi.org/sites/default/files/support/guidelines-2026/gavi-60-funding-guidelines-annexes.pdf2. Technical report series, No. 800. WHO; 1990. Technical report series, No. 980. WHO; 2012. Manual for quality control of diphtheria, tetanus and pertussis vaccines. WHO; 2013.3. ОФС.1.7.1.0004.15 Вакцины и анатоксины. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.4. Manual for the production and control of vaccines: tetanus toxoid. WHO; 1977. https://iris.who.int/handle/10665/701665. Technical report series, No. 980. WHO; 2012. Manual for quality control of diphtheria, tetanus and pertussis vaccines. WHO; 2013.6. Guidelines on the nonclinical evaluation of vaccine adjuvants and adjuvanted vaccines. Technical Report Series No. 987, Annex 2. WHO; 2014.7. 2.7.16 Adjuvants for vaccines. Indian Pharmacopoeia. IX ed; 2022.8. Алюминия гидроксид гидратированный для адсорбции. Проект ОФС. https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia-projects/izdanie-15/alyuminiya-gidroksid-gidratirovannyy-dlya-adsorbtsii/?vers=65139. Guidelines on the quality, safety and efficacy of vaccines prepared by recombinant DNA technology. Technical Report Series No. 927, Annex 1. WHO; 2005. USP <1149> "Vaccine Adjuvants". United States Pharmacopeia. USP-NF/PF. Rockville; 2024.10. Гель гидроокиси алюминия. https://biocombinat.ru/catalog/8/93/11. Committee for Medicinal Products for Human Use. Guideline on adjuvants in vaccines for human use. London: EMA; 2005. Guidelines on the nonclinical evaluation of vaccine adjuvants and adjuvanted vaccines. Technical Report Series No. 987, Annex 2. WHO; 2014.12. ОФС.1.1.0006 Субстанции для фармацевтического применения. Государственная фармакопея Российской Федерации. XV изд. М.; 2025.13. Manual for quality control of diphtheria, tetanus and pertussis vaccines. WHO; 2013.14. Там же.15. Там же.16. ФС.3.3.1.0010.15 Вакцина коклюшно-дифтерийно-cтолбнячная адсорбированная (АКДС-вакцина). Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.17. ОФС.1.7.2.0032.15 Определение содержания анатоксинов в реакции антитоксинсвязывания. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.; 2018.18. Manual for quality control of diphtheria, tetanus and pertussis vaccines. WHO; 2013.19. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, https://www.rospotrebnadzor.ru