biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-87Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИзучение биологической и генетической стабильности штамма № 205 вируса клещевого энцефалита, применяемого для производства вакцин клещевого энцефалита ЭнцеВир, ЭнцеВир Нео детскийAnalysis of biological and genetic stability of tick-borne encephalitis strain 205 used in the production of tick-borne encephalitis vaccines EnceVir and EnceVir Neo for childrenВоробьеваМ. С.VorobyevaM. S.

Главный эксперт управления экспертизы противовирусных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП, д-р мед. наук, профессор

Chief expert of the Division for Evaluation of Antiviral Medicinal Immunobiological Products of the Centre for Evaluation and Control of Medicinal Immunobiological Products. Doctor of Medical Sciences, professor

noemail@neicon.ruИгнатьевГ. М.IgnatyevG. M.

Заместитель директора, д-р мед. наук, профессор

Deputy director. Doctor of Medical Sciences, professor

noemail@neicon.ruНетесоваН. А.NetesovaN. A.

Заместитель директора, д-р биол. наук

Deputy director. Doctor of Biological Sciences

noemail@neicon.ruОтрашевскаяЕ. В.OtrashevskayaE. V.

Начальник отдела НИОКР

Head of the R&D Department

noemail@neicon.ruСтавицкаяН. Х.StavitskayaN. Kh.

Консультант, д-р мед. наук, профессор

Consultant. Doctor of Medical Sciences, professor

noemail@neicon.ruЩербининаМ. С.ShcherbininaM. S.

Эксперт 2-й категории лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП

2nd professional category expert of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

noemail@neicon.ruСаркисянК. А.SarkisyanK. A.

Начальник лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. мед. наук

Head of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality. Candidate of Medical Sciences

noemail@neicon.ruШевцовВ. А.ShevtsovV. A.

Начальник управления экспертизы противовирусных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП, канд. мед. наук

Head of the Division for Evaluation of Antiviral Medicinal Immunobiological Products of the Centre for Evaluation and Control of Medicinal Immunobiological Products. Candidate of Medical Sciences

noemail@neicon.ruРукавишниковА. В.RukavishnikovA. V.

аместитель начальника управления экспертизы противовирусных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП, канд. биол. наук

Deputy head of the Division for Evaluation of Antiviral Medicinal Immunobiological Products of the Centre for Evaluation and Control of Medicinal Immunobiological Products. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruБондаревВ. П.BondarevV. P.

Директор Центра экспертизы и контроля МИБП, д-р мед. наук, профессор

Director of the Centre for Evaluation and Control of Medicinal Immunobiological Products. Doctor of Medical Sciences, professor

noemail@neicon.ruНаучный центр экспертизы средств медицинского примененияРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationСанкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратовРоссияSaint-Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial ProductsRussian FederationНПО «СибЭнзим»РоссияScientific-Production Association SibEnzyme LtdRussian FederationНаучно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»РоссияScientific-Production Association «Microgen»Russian FederationФилиал НПО по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» «НПО «Вирион»Россия«Virion» Tomsk Branch of the Scientific-Production Association «Microgen»Russian Federation20172002201817295102Copyright © Воробьева М.С., Игнатьев Г.М., Нетесова Н.А., Отрашевская Е.В., Ставицкая Н.Х., Щербинина М.С., Саркисян К.А., Шевцов В.А., Рукавишников А.В., Бондарев В.П., 20182018Воробьева М.С., Игнатьев Г.М., Нетесова Н.А., Отрашевская Е.В., Ставицкая Н.Х., Щербинина М.С., Саркисян К.А., Шевцов В.А., Рукавишников А.В., Бондарев В.П.Vorobyeva M.S., Ignatyev G.M., Netesova N.A., Otrashevskaya E.V., Stavitskaya N.K., Shcherbinina M.S., Sarkisyan K.A., Shevtsov V.A., Rukavishnikov A.V., Bondarev V.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/87

Представлены результаты многолетнего изучения биологической и генетической стабильности штамма № 205 вируса клещевого энцефалита, используемого в ФГУП «НПО «Микроген» для производства культуральных инактивированных очищенных сорбированных вакцин клещевого энцефалита: ЭнцеВир (для вакцинации взрослых) и ЭнцеВир Нео детский (для вакцинации детей). Биологическую стабильность штамма № 205 изучали на этапах получения посевных серий вируса при пассажах на аутбредных белых мышах: исходный производственный штамм № 205, производственный «штаммовый запас». Лиофилизаты производственных посевных серий изучали на различных сроках хранения при температуре минус 20 °С (до 9 лет и более). Определяли показатели биологической активности (титры вируса клещевого энцефалита (КЭ) в lg LD50/мл) при различных способах заражения аутбредных белых мышей, а также определяли подлинность (специфичность) штамма № 205 по отношению к эталонному в реакции биологической нейтрализации (РБН) в соответствии с требованиями фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на вышеуказанные вакцины КЭ. Эти же материалы, а также одну из серий вакцины КЭ, полученной на основе производственного «штаммового запаса» вируса КЭ штамма № 205 (лиофилизат 1986 г.), изучали на сохранность генетической стабильности в процессе пассирования и длительного хранения методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и секвенирования. Впервые показана биологическая и генетическая стабильность вируса КЭ, штамм № 205, в процессе производства вакцин КЭ.

The article presents the results of a long-term study of biological and genetic stability of tick-borne encephalitis strain 205 which is used by the FSUE «SPA «Microgen» to produce tick-borne encephalitis vaccines EnceVir (for adults) and EnceVir Neo for children, both of which are tissue cultured, inactivated, purified, and sorbed. The biological stability of strain 205 was studied at the seed lot stage using passages on outbred white mice: initial production strain 205 and production «stock strain». Lyophilisates of production seed lots were studied at different storage intervals at -20 °С (up to 9 years of storage and more). Biological activity parameters (tick-borne encephalitis virus (TBEV) titre in log LD50/ml) were studied by using different ways of infecting outbred white mice, and strain 205 identification (specificity) was determined by comparing it to a reference strain in a biological neutralization assay (BNA) according to the manufacturer’s specifications for the vaccines concerned. The same materials and a batch of TBEV vaccine produced from the production «stock strain» (lyophilisate of 1986) were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing for genetic stability during passaging and long-term storage. The results of the study made it possible to demonstrate the biological and genetic stability of strain 205 during production of TBEV vaccines.

клещевой энцефалитвакцинацияпроизводство вакцин клещевого энцефалитабиологическая и генетическая стабильностьподлинность в реакции биологической нейтрализациипассажи через мозг аутбредных белых мышейполимеразная цепная реакцияпраймерысеквенированиеtick-borne encephalitisvaccinationproduction of tick-borne encephalitis vaccinesbiological and genetic stabilityidentification in a biological neutralization assayoutbred white mouse brain passagepolymerase chain reactionprimerssequencingReferencesВоробьева МС, Меркулов ВА, Ладыженская ИП, Рукавишников АВ, Шевцов ВА. История создания и оценки качества современных вакцин КЭ отечественного и зарубежного производства. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения 2013; (3): 40-4.Vorobieva MS, Merkulov VA, Ladyzhenskaya IP, Rukavishnikov AV, Shevtsov VA. The history and quality evaluation of tick-borne encephalitis vaccine. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya 2013; (3): 40–4 (in Russian).Barrett PN, Plotkin SA, Ehrlich HJ. Tick-borne encephalitis virus vaccines. In: Plotkin SA, Orenstein WA, Offit PA, eds. Vaccines. Philadelphia: Saunders Elsevier; 2008. P. 841-56.Barrett PN, Plotkin SA, Ehrlich HJ. Tick-borne encephalitis virus vaccines. In: Plotkin SA, Orenstein WA, Offit PA, eds. Vaccines. Philadelphia: Saunders Elsevier; 2008. P. 841–56.Морозова ОВ. Проблемы и перспективы профилактики, диагностики и лечения клещевого энцефалита. Российский медицинский журнал 2014; 20(6): 26-31.Morozova OV. Problems and prospects of prevention, diagnosis and treatment of tick-borne encephalitis. Rossiyskiy meditsinskiy zhurnal 2014; 20(6): 26–31 (in Russian).Pastorino BA, Peyrefitte CN, Grandadam M, Thill MC, Tolou HJ, Bessaud M. Mutagenesis analysis of the NS2B determinants of the Alkhurma virus NS2B-NS3 protease activation. J Gen Virol. 2006; 87: 3279-83.Pastorino BA, Peyrefitte CN, Grandadam M, Thill MC, Tolou HJ, Bessaud M. Mutagenesis analysis of the NS2B determinants of the Alkhurma virus NS2B-NS3 protease activation. J Gen Virol. 2006; 87: 3279–83.Pöllabauer EM, Pavlova BG, Löw-Baselli A, Fritsch S, Prymula R, Angermayr R, et al. Comparison of immunogenicity and safety between two paediatric TBE vaccines. Vaccine 2010; 28(29): 4680-5.Pöllabauer EM, Pavlova BG, Löw-Baselli A, Fritsch S, Prymula R, Angermayr R, et al. Comparison of immunogenicity and safety between two paediatric TBE vaccines. Vaccine 2010; 28(29): 4680–5.Горбунов МА, Павлова ЛИ, Воробьева МС, Расщепкина МН, Стронин ОВ. Результаты клинических испытаний вакцины против клещевого энцефалита ЭнцеВир. Эпидемиология и вакцинопрофилактика 2002; (1): 64-8.Gorbunov MA, Pavlova LI, Vorobieva MS, Raschepkina MN, Stronin OB. Results of clinical trials of a vaccine against tick-borne encephalitis EnceVir. Epidemiologiya i vaktsinoprofilaktika 2002; (1): 64–8 (in Russian).Романенко ВВ, Анкудинова АВ, Килячина АС. Эффективность программы массовой вакцинопрофилактики клещевого энцефалита в Свердловской области. Вестник УГМА 2010; (21): 125-32.Romanenko VV, Ankudinova AV, Kilyachina AS. The effectiveness of the program of mass vaccination encephalitis in the Sverdlovsk Region. Vestnik UGMA 2010; (21): 125–32 (in Russian).Воробьева МС, Расщепкина МН, Красильников ИВ, Мищенко ИА, Шарова ОИ, Рюмина ТА, Билалова ГП. Результаты лабораторных испытаний модифицированной вакцины против клещевого энцефалита «ЭнцеВир», производства ФГУП «ВИРИОН». В кн.: Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов. Тезисы конференции, 2001. С. 8-11.Vorobieva MS Raschepkina MN, Krasilnikov IV, Mischenko IA, Sharov OI, Ryumin TA Bilalova GP. The results of laboratory tests of the modified vaccine «EnñeVir» against tick-borne encephalitis, produced by FSUE «VIRION». In: Topical issues of development, production and use of immunobiological and pharmaceutical preparations. Abstracts of Conference, 2001. P. 8–11 (in Russian).Котыков ИВ, Киселева НН, Федоров ЮВ Изучение популяции производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита. В кн.: Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума «Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита», 1990. С. 71-2.Kotykov IV, Kiseleva NN, Fedorov YuV. Study of the population of production strain 205 of the virus of tick-borne encephalitis. In: Abstracts of the All-Union Symposium «Modern epidemiology problems, diagnosis and prevention of tick-borne encephalitis», 1990. P. 71–2 (in Russian).Holzmann H, Vorobyova MS, Ladyzhenskaya IP, Forenczi E, Kundi M, Kunz C, Heinz FX. Molecular epidemiology of tick-borne encephalitis virus: cross-protection between European and Far Eastern subtypes. Vaccine 1992; 10(5): 345-9.Holzmann H, Vorobyova ÌS, Ladyzhenskaya IP, Forenczi E, Kundi M, Kunz C, Heinz FX. Molecular epidemiology of tick-borne encephalitis virus: cross-protection between European and Far Eastern subtypes. Vaccine 1992; 10(5): 345–9.ICH Guidance, Q5D: Derivation and Characterisation of Cell Substrates Used for Production of Biotechnological/Biological Products (63 FR 50244; September 21, 1998).ICH Guidance, Q5D: Derivation and Characterisation of Cell Substrates Used for Production of Biotechnological/Biological Products (63 FR 50244; September 21, 1998).Андреев ЮЛ, Маева ТВ, Кедич ЛА, Золина ЕД, Куслий АГ. Физико-химическая и иммунологическая характеристика вакцины «Геп-а-ин-вак» при различных условиях хранения. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2008; (4): 26-8.Andreev YuL, Maeva TV, Kedich LA, Zolina ED, Kusliy AG. Physico-chemical and immunological characteristics of the vaccine «Hep-in-a-vak» at different storage conditions. Biopreparation. Prevention, Diagnosis, Treatment 2008; (4): 26–8 (in Russian).Ecker M, Allison SL, Meixner T, Heinz FX. Sequence analysis and genetic classification of tick-borne encephalitis viruses from Europe and Asia. J Gen Virol. 1999; 80(1): 179-85.Ecker M, Allison SL, Meixner T, Heinz FX. Sequence analysis and genetic classification of tick-borne encephalitis viruses from Europe and Asia. J Gen Virol. 1999; 80(1): 179–85.ICH Guidance, Q5A(R1): Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin (63 FR 51074; September 24, 1998).ICH Guidance, Q5A(R1): Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin (63 FR 51074; September 24, 1998).Akey DL, Brown WC, Dutta S, Konwerski J, Jose J, Jurkiw TJ, et al. Flavivirus NS1 structures reveal surfaces for associations with membranes and the immune system. Science 2014; 343(6173): 881-5.Akey DL, Brown WC, Dutta S, Konwerski J, Jose J, Jurkiw TJ, et al. Flavivirus NS1 structures reveal surfaces for associations with membranes and the immune system. Science 2014; 343(6173): 881–5.Leung JY, Pijlman GP, Kondratieva N, Hyde J, Mackenzie JM, Khromykh AA. Role of nonstructural protein NS2A in flavivirus assembly. J Virol. 2008; 82(10): 4731-41.Leung JY, Pijlman GP, Kondratieva N, Hyde J, Mackenzie JM, Khromykh AA. Role of nonstructural protein NS2A in flavivirus assembly. J Virol. 2008; 82(10): 4731–41.Kofler RM, Heinz FX, Mandl CW. Capsid protein C of tick-borne encephalitis virus tolerates large internal deletions and is a favorable target for attenuation of virulence. J Virol. 2002; 76(7): 3534-43.Kofler RM, Heinz FX, Mandl CW. Capsid protein C of tick-borne encephalitis virus tolerates large internal deletions and is a favorable target for attenuation of virulence. J Virol. 2002; 76(7): 3534–43.Mandl CW, Heinz FX, Stockl E, Kunz C. Genome sequence of tick-borne encephalitis virus (Western subtype) and comparative analysis of nonstructural proteins with other flaviviruses. Virology 1989; 173(1): 291-301.Mandl CW, Heinz FX, Stockl E, Kunz C. Genome sequence of tick-borne encephalitis virus (Western subtype) and comparative analysis of nonstructural proteins with other flaviviruses. Virology 1989; 173(1): 291–301.Zent O, Bröker M. Tick-borne encephalitis vaccines: past and present. Expert Rev Vaccines 2005; 4(5): 747-55.Zent O, Bröker M. Tick-borne encephalitis vaccines: past and present. Expert Rev Vaccines. 2005; 4(5): 747–55.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.