biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2026-26-3-299-310biopreparat-816Research ArticleТЕМА НОМЕРА: мРНК-ТЕХНОЛОГИИ В БИОМЕДИЦИНЕ: СОВРЕМЕННЫЕ ДОСТИЖЕНИЯ И РЕГУЛЯТОРНАЯ ПРАКТИКАISSUE TOPIC: mRNA TECHNOLOGIES IN BIOMEDICINE: CURRENT ADVANCES AND REGULATORY PRACTICEСтруктурная и функциональная стабильность лиофилизированной неинкапсулированной мРНК, синтезированной in vitro, при длительном храненииStructural and functional stability of lyophilized nonencapsulated mRNA synthesized in vitro during long-term storagehttps://orcid.org/0000-0003-0664-3587ШарабринС. В.SharabrinS. V.

Шарабрин Сергей Валерьевич - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Sergei V. Sharabrin - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

sharabrin.sv@gmail.comhttps://orcid.org/0009-0006-1538-5195КрасниковаС. И.KrasnikovaS. I.

Красникова Светлана Игоревна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Svetlana I. Krasnikova.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

krasnikova_si@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4889-6865КисаковД. Н.KisakovD. N.

Кисаков Денис Николаевич - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Denis N. Kisakov - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

kisakov_dn@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7214-1855КисаковаЛ. А.KisakovaL. A.

Кисакова Любовь Александровна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Lyubov A. Kisakova.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

orlova_la@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1733-9524СтаростинаЕ. В.StarostinaE. V.

Старостина Екатерина Владимировна - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Ekaterina V. Starostina - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

starostina_ev@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0768-1561БоргояковаМ. Б.BorgoyakovaM. B.

Боргоякова Мария Борисовна - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Mariya B. Borgoyakova - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

borgoyakova_mb@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0003-6524-3222ЛитвиноваВ. Р.LitvinovaV. R.

Литвинова Виктория Руслановна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Victoria R. Litvinova.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

viktoriya_litvinova_1999@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0009-4563-2099ЯковлевВ. А.YakovlevV. A.

Яковлев Владимир Андреевич.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Vladimir A. Yakovlev.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

yakovlev_va@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0001-5203-2130ЯковлеваЕ. В.YakovlevaE. V.

Яковлева Елена Витальевна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Elena V. Yakovleva.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

tigeeva_ev@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0002-3191-1360ИвановаК. И.IvanovaK. I.

Иванова Ксения Ивановна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Ksenia I. Ivanova.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

ivanova_ki@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9181-0487БондарьА. А.BondarA. A.

Бондарь Александр Анатольевич - канд. хим. наук.

проспект Академика Лаврентьева, д. 8, г. Новосибирск, 630090

Alexander A. Bondar - Cand. Sci. (Chem.).

8 Academician Lavrentyev Ave., Novosibirsk 630090

alex.bondar@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0009-2309-0137МакароваК. П.MakarovaK. P.

Макарова Кристина Петровна.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Kristina P. Makarova.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

makarova_kp@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0008-0706-8119ВахитовД. И.VahitovD. I.

Вахитов Данил Игоревич.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Danil I. Vahitov.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

vahitov_di@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5028-5647ВолосниковаЕ. А.VolosnikovaE. A.

Волосникова Екатерина Александровна - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Ekaterina A. Volosnikova - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

kulenok84@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2808-4309РудомётовА. П.RudometovA. P.

Рудомётов Андрей Павлович - канд. биол. наук.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Andrey P. Rudometov - Cand. Sci. (Biol.).

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

rudometov_ap@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5356-0843ИльичёвА. А.IlyichevA. A.

Ильичёв Александр Алексеевич - д-р биол. наук, проф.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Alexander A. Ilyichev - Dr. Sci. (Biol.), Prof.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

ilyichev@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4365-8809КарпенкоЛ. И.KarpenkoL. I.

Карпенко Лариса Ивановна - д-р биол. наук, доцент.

р.п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Larisa I. Karpenko - Dr. Sci. (Biol.), Assoc. Prof.

Koltsovo, Novosibirsk Region, 630559

karpenko@vector.nsc.ruФедеральное бюджетное учреждение науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекаРоссияState Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”Russian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины им. Д.Г. Кнорре Сибирского отделения Российской академии наукРоссияInstitute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of the Russian Academy of SciencesRussian Federation202605102026263299310Copyright © Шарабрин С.В., Красникова С.И., Кисаков Д.Н., Кисакова Л.А., Старостина Е.В., Боргоякова М.Б., Литвинова В.Р., Яковлев В.А., Яковлева Е.В., Иванова К.И., Бондарь А.А., Макарова К.П., Вахитов Д.И., Волосникова Е.А., Рудомётов А.П., Ильичёв А.А., Карпенко Л.И., 20262026Шарабрин С.В., Красникова С.И., Кисаков Д.Н., Кисакова Л.А., Старостина Е.В., Боргоякова М.Б., Литвинова В.Р., Яковлев В.А., Яковлева Е.В., Иванова К.И., Бондарь А.А., Макарова К.П., Вахитов Д.И., Волосникова Е.А., Рудомётов А.П., Ильичёв А.А., Карпенко Л.И.Sharabrin S.V., Krasnikova S.I., Kisakov D.N., Kisakova L.A., Starostina E.V., Borgoyakova M.B., Litvinova V.R., Yakovlev V.A., Yakovleva E.V., Ivanova K.I., Bondar A.A., Makarova K.P., Vahitov D.I., Volosnikova E.A., Rudometov A.P., Ilyichev A.A., Karpenko L.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/816ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Низкая физико-химическая стабильность мРНК и зависимость современных мРНК-вакцин от успешности инкапсуляции в липидные наночастицы и соблюдения обязательных условий холодовой цепи ограничивают их хранение и транспортировку. Перспективным подходом является лиофилизация неинкапсулированной мРНК с последующей доставкой методом струйной инжекции. Однако сохранение ее структуры и функциональной активности при длительном хранении изучено недостаточно.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Оценка структурной и функциональной стабильности лиофилизированной неинкапсулированной мРНК при длительном хранении и ее иммуногенности в составе трехвалентной мРНК-вакцины против сезонного гриппа, вводимой мышам методом струйной инжекции.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. мРНК-GFP (мРНК, кодирующую зеленый флуоресцентный белок (GFP)) лиофилизировали с различными криопротекторами и хранили при −20, 4 и 20 °C. Функциональную активность определяли после трансфекции клеток HEK293 по экспрессии GFP, целостность мРНК — методом микрочипового электрофореза. Иммуногенность лиофилизированной и нелиофилизированной вакцины «мРНК-Вектор-Флю» оценивали на самках инбредных мышей BALB/c после двукратной струйной иммунизации методами ИФА (иммуноферментный анализ), РТГА (реакция торможения гемагглютинации), вирус-нейтрализации и IFN-γ ELISpot (метод иммуноферментных пятен для выявления клеток, секретирующих интерферон-γ).

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. По результатам предварительного скрининга для дальнейших исследований была выбрана композиция с 10% трегалозы, обеспечивавшая сохранение функциональной активности мРНК-GFP на уровне, наиболее близком к контрольному препарату. Лиофилизированная мРНК-GFP сохраняла функциональную активность после 12 мес. хранения при всех исследованных температурах; статистически значимых различий с мРНК, синтезированной непосредственно перед применением, не выявлено (p>0,05). Основная фракция мРНК сохранялась, хотя после 6–12 мес., особенно при 20 °C, выявлялись минорные фракции частично деградированной мРНК. После 3 мес. хранения вакцины при 4 °C средние геометрические титры антител к гемагглютининам вирусов гриппа H1, H3 и HB составили 1:382 000, 1:628 000 и 1:273 000 против 1:710 000, 1:628 000 и 1:328 000 в группе нелиофилизированной вакцины. Титры в РТГА составляли 1:37–1:80, вируснейтрализующих антител — 1:50–1:90; число IFN-γ-секретирующих клеток — 440 и 500 SFC (пятнообразующих клеток) на 1×106 спленоцитов. Значимых межгрупповых различий не выявлено.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Лиофилизация с 10% трегалозы обеспечивала сохранение функциональной активности неинкапсулированной мРНК в течение 12 мес., несмотря на признаки частичной деградации при 20 °C. После 3 мес. хранения при 4 °C трехвалентная вакцина сохраняла способность индуцировать гуморальный и Т-клеточный иммунный ответ у мышей. Полученные данные подтверждают перспективность сочетания лиофилизации и струйной инжекции для разработки стабильных мРНК-вакцин.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. The low physicochemical stability of mRNA and the dependence of current mRNA vaccines on the successful encapsulation into lipid nanoparticles and adherence to mandatory cold chain requirements limit their storage and transportation. A promising approach is the lyophilization of nonencapsulated mRNA with its subsequent delivery by jet injection. However, the preservation of its structure and functional activity during long-term storage has been insufficiently studied.

AIM

AIM. To evaluate the structural and functional stability of lyophilized nonencapsulated mRNA during long-term storage and its immunogenicity as a component of a trivalent mRNA vaccine against seasonal influenza administered to mice by jet injection.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. mRNA encoding green fluorescent protein (GFP) was lyophilized with various cryoprotectants and stored at −20, 4, and 20 °C. Its functional activity was determined by GFP expression after transfection of HEK293 cells, and its integrity was analyzed by microchip electrophoresis. The immunogenicity of the lyophilized and nonlyophilized mRNA-Vector-Flu vaccine was evaluated in female inbred BALB/c mice after two jet immunizations by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), hemagglutination inhibition (HAI) assay, virus neutralization assay, and interferon gamma (IFN-γ) enzyme-linked immunospot (ELISpot) assay.

RESULTS

RESULTS. Based on the results of a preliminary screening, a 10% trehalose formulation was selected for further studies because it preserved the functional activity of GFP mRNA at the level closest to that of the control preparation. The lyophilized GFP mRNA retained its functional activity after 12 months of storage at all tested temperatures; no statistically significant differences were found compared with the mRNA synthesized immediately before use (p>0.05). The major mRNA fraction was preserved, although minor fractions of partially degraded mRNA were detected after 6–12 months, particularly at 20 °C. After 3 months of storage of the vaccine at 4 °C, the geometric mean antibody titers against hemagglutinin subtype 1 (H1), hemagglutinin subtype 3 (H3), and influenza B hemagglutinin (HB) were 1:382,000, 1:628,000, and 1:273,000, respectively, compared with 1:710,000, 1:628,000, and 1:328,000 in the nonlyophilized vaccine group. HAI titers were 1:37–1:80, virus-neutralizing antibody titers were 1:50–1:90; and the numbers of IFN-γ-secreting cells were 440 and 500 spot-forming cells (SFC) per 1×106 splenocytes. No significant between-group differences were identified.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. Lyophilization with 10% trehalose preserved the functional activity of nonencapsulated mRNA for 12 months despite signs of partial degradation at 20 °C. After 3 months of storage at 4 °C, the trivalent vaccine retained its ability to induce humoral and T-cell immune responses in mice. These findings support the potential of combining lyophilization and jet injection for the development of stable mRNA vaccines.

мРНК-вакцинылиофилизациявирус гриппа человекаструйная инжекцияиммуногенностьИФАвируснейтрализациятрегалозамышилипидные наночастицымикрочиповой электрофорезmRNA vaccineslyophilizationhuman influenza virusjet injectionimmunogenicityELISAvirus neutralizationtrehalosemicelipid nanoparticlesmicrochip electrophoresisРабота выполнена в рамках государственного задания ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.The study was conducted under the state assignment of the State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”.ReferencesPardi N, Hogan MJ, Porter FW, Weissman D. mRNA vaccines — A new era in vaccinology. Nat Rev Drug Discov. 2018;17(4):261–79. https://doi.org/10.1038/nrd.2017.243Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, Weissman D. mRNA vaccines — A new era in vaccinology. Nat Rev Drug Discov. 2018;17(4):261–79. https://doi.org/10.1038/nrd.2017.243Chaudhary N, Weissman D, Whitehead KA. mRNA vaccines for infectious diseases: principles, delivery and clinical translation. Nat Rev Drug Discov. 2021;20(11):817–38. https://doi.org/10.1038/s41573-021-00283-5Chaudhary N, Weissman D, Whitehead KA. mRNA vaccines for infectious diseases: principles, delivery and clinical translation. Nat Rev Drug Discov. 2021;20(11):817–38. https://doi.org/10.1038/s41573-021-00283-5Chheda U, Pradeepan S, Esposito E, et al. Factors affecting stability of RNA — Temperature, length, concentration, pH, and buffering species. J Pharm Sci. 2024;113(2):377–85. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2023.11.023Chheda U, Pradeepan S, Esposito E, et al. Factors affecting stability of RNA — Temperature, length, concentration, pH, and buffering species. J Pharm Sci. 2024;113(2):377–85. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2023.11.023Hou X, Zaks T, Langer R, Dong Y. Lipid nanoparticles for mRNA delivery. Nat Rev Mater. 2021;6(12):1078–94. https://doi.org/10.1038/s41578-021-00358-0Hou X, Zaks T, Langer R, Dong Y. Lipid nanoparticles for mRNA delivery. Nat Rev Mater. 2021;6(12):1078–94. https://doi.org/10.1038/s41578-021-00358-0Crommelin DJA, Anchordoquy TJ, Volkin DB, et al. Addressing the cold reality of mRNA vaccine stability. J Pharm Sci. 2021;110(3):997–1001. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2020.12.006Crommelin DJA, Anchordoquy TJ, Volkin DB, et al. Addressing the cold reality of mRNA vaccine stability. J Pharm Sci. 2021;110(3):997–1001. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2020.12.006Oude Blenke E, Örnskov E, Schöneich C, et al. The storage and inuse stability of mRNA vaccines and therapeutics: Not a cold case. J Pharm Sci. 2023;112(2):386–403. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2022.11.001Oude Blenke E, Örnskov E, Schöneich C, et al. The storage and inuse stability of mRNA vaccines and therapeutics: Not a cold case. J Pharm Sci. 2023;112(2):386–403. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2022.11.001Packer M, Gyawali D, Yerabolu R, et al. A novel mechanism for the loss of mRNA activity in lipid nanoparticle delivery systems. Nat Commun. 2021;12(1):6777. https://doi.org/10.1038/s41467-021-26926-0Packer M, Gyawali D, Yerabolu R, et al. A novel mechanism for the loss of mRNA activity in lipid nanoparticle delivery systems. Nat Commun. 2021;12(1):6777. https://doi.org/10.1038/s41467-021-26926-0Wang C, Tang X, Jiang C, et al. Intradermal delivery of SARS-CoV-2 RBD3-Fc mRNA vaccines via a needle-free injection system induces robust immune responses in rats. Front Immunol. 2025;16:1530736. https://doi.org/10.3389/fimmu.2025.1530736Wang C, Tang X, Jiang C, et al. Intradermal delivery of SARS-CoV-2 RBD3-Fc mRNA vaccines via a needle-free injection system induces robust immune responses in rats. Front Immunol. 2025;16:1530736. https://doi.org/10.3389/fimmu.2025.1530736Abbasi S, Matsui-Masai M, Yasui F, et al. Carrier-free mRNA vaccine induces robust immunity against SARS-CoV-2 in mice and non-human primates without systemic reactogenicity. Mol Ther. 2024;32(5):1266–83. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2024.03.022Abbasi S, Matsui-Masai M, Yasui F, et al. Carrier-free mRNA vaccine induces robust immunity against SARS-CoV-2 in mice and non-human primates without systemic reactogenicity. Mol Ther. 2024;32(5):1266–83. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2024.03.022Kisakov DN, Karpenko LI, Kisakova LA, et al. Jet injection of naked mRNA encoding the RBD of the SARS-CoV-2 spike protein induces a high level of a specific immune response in mice. Vaccines (Basel). 2025;13(1):65. https://doi.org/10.3390/vaccines13010065Kisakov DN, Karpenko LI, Kisakova LA, et al. Jet injection of naked mRNA encoding the RBD of the SARS-CoV-2 spike protein induces a high level of a specific immune response in mice. Vaccines (Basel). 2025;13(1):65. https://doi.org/10.3390/vaccines13010065Sharabrin SV, Ilyichev AA, Kisakov DN, et al. Needle-free jet-delivered mRNA-vaccine encoding influenza A(H1N1)pdm09 hemagglutinin protects mice from lethal virus infection. Mol Biol. 2025;59(3):376–89. https://doi.org/10.1134/S0026893325700062Sharabrin SV, Ilyichev AA, Kisakov DN, et al. Needle-free jet-delivered mRNA-vaccine encoding influenza A(H1N1)pdm09 hemagglutinin protects mice from lethal virus infection. Mol Biol. 2025;59(3):376–89. https://doi.org/10.1134/S0026893325700062Yakovlev VA, Litvinova VR, Rudometova NB, et al. Immunogenic and protective properties of mRNA vaccine encoding hemagglutinin of avian influenza A/H5N8 virus, delivered by lipid nanoparticles and needle-free jet injection. Vaccines (Basel). 2025;13(8):883. https://doi.org/10.3390/vaccines13080883Yakovlev VA, Litvinova VR, Rudometova NB, et al. Immunogenic and protective properties of mRNA vaccine encoding hemagglutinin of avian influenza A/H5N8 virus, delivered by lipid nanoparticles and needle-free jet injection. Vaccines (Basel). 2025;13(8):883. https://doi.org/10.3390/vaccines13080883Muramatsu H, Lam K, Bajusz C, et al. Lyophilization provides long-term stability for a lipid nanoparticle-formulated, nucleoside-modified mRNA vaccine. Mol Ther. 2022;30(5):1941–51. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2022.02.001Muramatsu H, Lam K, Bajusz C, et al. Lyophilization provides long-term stability for a lipid nanoparticle-formulated, nucleoside-modified mRNA vaccine. Mol Ther. 2022;30(5):1941–51. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2022.02.001Suzuki Y, Miyazaki T, Muto H, et al. Design and lyophilization of lipid nanoparticles for mRNA vaccine and its robust immune response in mice and nonhuman primates. Mol Ther Nucleic Acids. 2022;30:226–40. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2022.09.017Suzuki Y, Miyazaki T, Muto H, et al. Design and lyophilization of lipid nanoparticles for mRNA vaccine and its robust immune response in mice and nonhuman primates. Mol Ther Nucleic Acids. 2022;30:226–40. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2022.09.017Khan MFH, Baudin F, Sudalaiyadum Perumal A, Kamen AA. Freeze-drying of mRNA-LNPs vaccines: A review. Vaccines (Basel). 2025;13(8):853. https://doi.org/10.3390/vaccines13080853Khan MFH, Baudin F, Sudalaiyadum Perumal A, Kamen AA. Freeze-drying of mRNA-LNPs vaccines: A review. Vaccines (Basel). 2025;13(8):853. https://doi.org/10.3390/vaccines13080853Arte KS, Chen M, Patil CD, et al. Recent advances in drying and development of solid formulations for stable mRNA and siRNA lipid nanoparticles. J Pharm Sci. 2025;114(2):805–15. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2024.12.013Arte KS, Chen M, Patil CD, et al. Recent advances in drying and development of solid formulations for stable mRNA and siRNA lipid nanoparticles. J Pharm Sci. 2025;114(2):805–15. https://doi.org/10.1016/j.xphs.2024.12.013Sharabrin SV, Krasnikova SI, Kisakov DN, et al. A naked lyophilized mRNA vaccine against seasonal influenza, administered by jet injection, provides a robust response in immunized mice. Vaccines (Basel). 2026;14(1):56. https://doi.org/10.3390/vaccines14010056Sharabrin SV, Krasnikova SI, Kisakov DN, et al. A naked lyophilized mRNA vaccine against seasonal influenza, administered by jet injection, provides a robust response in immunized mice. Vaccines (Basel). 2026;14(1):56. https://doi.org/10.3390/vaccines14010056Gross FL, Bai Y, Jefferson S, et al. Measuring influenza neutralizing antibody responses to A(H3N2) viruses in human sera by microneutralization assays using MDCK-SIAT1 cells. J Vis Exp. 2017;(129):56448. https://doi.org/10.3791/56448Gross FL, Bai Y, Jefferson S, et al. Measuring influenza neutralizing antibody responses to A(H3N2) viruses in human sera by microneutralization assays using MDCK-SIAT1 cells. J Vis Exp. 2017;(129):56448. https://doi.org/10.3791/56448Gonzalez TJ, Boothby TC. Properties governing dry-state stability of RNA in amorphous sugar formulations. Commun Mater. 2025;6:129. https://doi.org/10.1038/s43246-025-00850-yGonzalez TJ, Boothby TC. Properties governing dry-state stability of RNA in amorphous sugar formulations. Commun Mater. 2025;6:129. https://doi.org/10.1038/s43246-025-00850-yLiu XH, Song HP, Tao LL, et al. Trehalose-loaded LNPs enhance mRNA stability and bridge the in vitro–in vivo efficacy gap. npj Vaccines. 2025;10:201. https://doi.org/10.1038/s41541-025-01253-3Liu XH, Song HP, Tao LL, et al. Trehalose-loaded LNPs enhance mRNA stability and bridge the in vitro–in vivo efficacy gap. npj Vaccines. 2025;10:201. https://doi.org/10.1038/s41541-025-01253-3Khan MFH, Sudalaiyadum Perumal A, Kamen AA. Investigation on a freeze-drying process for long-term stability of mRNA-LNPs. Vaccines (Basel). 2026;14(3):242. https://doi.org/10.3390/vaccines14030242Khan MFH, Sudalaiyadum Perumal A, Kamen AA. Investigation on a freeze-drying process for long-term stability of mRNA-LNPs. Vaccines (Basel). 2026;14(3):242. https://doi.org/10.3390/vaccines14030242

The authors declare that there are no conflicts of interest present.