biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2026-794biopreparat-794Research ArticleСтатьиОценка противовирусной активности интерферона α-2b в отношении SARS-CoV-2 в культуре клеток аденокарциномы легкого человека Calu-3Antiviral activity of interferon α-2b against SARS-CoV-2 in Calu-3 human lung adenocarcinoma cell culturehttps://orcid.org/0009-0003-5745-7589ХохловаД. М.KhokhlovaD. M.

Хохлова Дарья Михайловна

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Daria M. Khokhlova

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

https://orcid.org/0000-0001-8428-4482ГрачеваА. В.GrachevaA. V.

Грачева Анастасия Вячеславовна

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Anastasiia V. Gracheva

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

https://orcid.org/0000-0002-6417-3301КорчеваяЕ. Р.KorchevayaE. R.

Корчевая Екатерина Романовна

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Ekaterina R. Korchevaya

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

https://orcid.org/0009-0008-5123-4946МасленниковаА. С.MaslennikovaA. S.

Масленникова Ася Сергеевна

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Asya S. Maslennikova

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

https://orcid.org/0000-0002-7755-2714ЛеневаИ. А.LenevaI. A.

Ленева Ирина Анатольевна, д-р биол. наук

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Irina A. Leneva, Dr. Sci. (Biol.)

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

https://orcid.org/0000-0003-1757-8389СвитичО. А.SvitichO. A.

Свитич Оксана Анатольевна, д-р мед. наук, проф., академик РАН

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064;

ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Москва, 119048

Oxana A. Svitich, Dr. Sci. (Med.), Prof., Academician of RAS

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064;

8-2 Trubetskaya St., Moscow 119048

https://orcid.org/0000-0001-5808-2246ЗверевВ. В.ZverevV. V.

Зверев Виталий Васильевич, д-р биол. наук, проф., академик РАН

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064;

ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Москва, 119048

Vitaly V. Zverev, Dr. Sci. (Biol.), Prof., Academician of RAS

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064;

8-2 Trubetskaya St., Moscow 119048

https://orcid.org/0000-0001-7385-5083ФайзулоевЕ. Б.FaizuloevE. B.

Файзулоев Евгений Бахтиерович, д-р биол. наук

Малый Казенный переулок, д. 5а, Москва, 105064

Evgeny B. Faizuloev, Dr. Sci. (Biol.)

Maly Kazenny pereulok, 5a, Moscow 105064

faizuloev@mail.ruФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»РоссияI.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»; Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет)РоссияI.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera; I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)Russian Federation20262608202600Принято в печать (Online First)794Copyright © Хохлова Д.М., Грачева А.В., Корчевая Е.Р., Масленникова А.С., Ленева И.А., Свитич О.А., Зверев В.В., Файзулоев Е.Б., 20262026Хохлова Д.М., Грачева А.В., Корчевая Е.Р., Масленникова А.С., Ленева И.А., Свитич О.А., Зверев В.В., Файзулоев Е.Б.Khokhlova D.M., Gracheva A.V., Korchevaya E.R., Maslennikova A.S., Leneva I.A., Svitich O.A., Zverev V.V., Faizuloev E.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/794ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. Несмотря на переход коронавируса SARS-CoV-2 в разряд возбудителей сезонных респираторных вирусных инфекций, проблема разработки лекарственных препаратов против COVID-19 остается актуальной. Процесс создания противовирусных препаратов требует использования адекватной клеточной модели инфекции для поиска и испытания ингибиторов вирусной репродукции.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Изучение возможности использования тест-системы на основе культуры клеток аденокарциномы легкого человека Calu-3 для оценки показателей противовирусной активности в отношении SARS-CoV-2 рекомбинантного человеческого интерферона α-2b (ИФНα-2b).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Коронавирус SARS-CoV-2 (штамм Dubrovka, GenBank ID: MW514307.1) выращивали в культуре клеток почки африканской зеленой мартышки — Vero. Инфекционную активность вируса и противовирусную активность ИФНα-2b определяли в культурах клеток Vero и Calu-3. Противовирусную активность ИФНα-2b в тест-системе на основе клеток Calu-3 оценивали по накоплению вирусного антигена (метод клеточного ИФА), а в референсной тест-системе на основе клеток Vero — по выживаемости клеток (МТТ-тест).

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Определены оптимальные условия оценки противовирусной активности в клетках Calu-3 по накоплению в зараженных клетках антигена SARS-CoV-2 методом клеточного ИФА. Исследование рекомбинантного ИФНα-2b в культуре клеток Calu-3, зараженной SARS-CoV-2, показало возможность высокочувствительного определения таких показателей противовирусной активности, как среднеэффективная вирусингибирующая концентрация (ИК50) и химиотерапевтический индекс. При разных дозах заражения и схемах применения ИФНα-2b тест-система на основе клеток Calu-3 при оценке активности ИФНα-2b воспроизводимо проявляла большую чувствительность, чем референсная тестсистема. Так, чувствительность определения противовирусной активности ИФНα-2b в отношении SARS-CoV-2, выраженная в значениях ИК50, в клетках Calu-3 более чем на 2 lg (от  100 до 290 раз) превышала чувствительность в клетках Vero. Выявленные различия в чувствительности двух тест-систем могут быть связаны как с применением разных методов детекции результата — по выживаемости клеток или по накоплению вирусного антигена, так и с наличием в клетках Vero дефицита генов, связанных с интерфероновым ответом.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. При выборе тест-системы для оценки активности иммуномодулирующих препаратов (человеческий ИФНα-2b, индукторы интерферона) предпочтительно использовать клетки Calu-3, определяя противовирусную активность по накоплению вирусного антигена. В клетках Vero с оценкой противовирусной активности по выживаемости клеток терапевтический потенциал подобных препаратов может быть сильно недооценен.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. Despite the reclassification of the SARS-CoV-2 coronavirus as an etiological agent of seasonal respiratory viral infections, the problem of developing drugs against COVID-19 remains relevant. The development of antiviral drugs requires an adequate cellular model of infection to search for and test inhibitors of viral reproduction.

AIM

AIM. To study the feasibility of using a Calu-3 human lung adenocarcinoma cell culture-based test system to evaluate the antiviral activity of recombinant human interferon α-2b (IFNα-2b) against SARS-CoV-2.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. SARS-CoV-2 coronavirus, Dubrovka strain (GenBank ID: MW514307.1) was grown in African green monkey kidney (Vero) cell culture. The infectious activity of the virus and the antiviral activity of IFNα-2b were determined in Vero and Calu-3 cell cultures. The antiviral activity of IFNα-2b in Calu-3 cells was assessed by viral antigen accumulation (In-Cell ELISA), and in the Vero cell-based reference test system by cell viability (MTT assay).

RESULTS

RESULTS. Optimal conditions for evaluating antiviral activity in Calu-3 cells by measuring viral antigen accumulation in infected cells using In-Cell ELISA have been determined. A study of recombinant IFNα-2b in a Calu-3 cell culture infected with SARS-CoV-2 demonstrated the possibility of highly sensitive determination of antiviral activity indicators such as 50% inhibitory concentration (IC50) and selectivity index. At different infection doses and treatment regimens, the Calu-3-based test system consistently showed greater sensitivity than the reference test system when evaluating IFNα-2b activity. Thus, in Calu-3 cells, the sensitivity of detecting IFNα-2b antiviral activity against SARS-CoV-2, expressed as IC50 values, was more than 2 log10 (i.e., 100- to 290-fold) higher than that in Vero cells. The observed differences in the sensitivity of the two test systems may be due to both the different endpoint measurement methods (viral antigen accumulation vs. cell viability) and the deficiency in interferon response genes in Vero cells.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. When choosing a test system for evaluating the activity of immunomodulatory drugs (human IFNα-2b, interferon inducers), it is preferable to use Calu-3 cells and determine antiviral activity by viral antigen accumulation. In Vero cells, with assessment of antiviral activity based on cell viability, the therapeutic potential of such drugs may be greatly underestimated.

SARS-CoV-2культура клетокCalu-3клеточный ИФАVeroпротивовирусная активностьинтерферон α-2b человекаИФНα-2bSARS-CoV-2cell cultureCalu-3In-Cell ELISAVeroantiviral activityhuman interferon α-2bIFNα-2bИсследование выполнено при финансовом обеспечении Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (тема НИР государственного задания FGFS-2025-0001).The research was carried out with financial support from the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (research topic of the state assignment FGFS-2025-0001).ReferencesBestion E, Halfon P, Mezouar S, Mège JL. Cell and animal models for SARS-COV-2 research. Viruses. 2022;14(7):1507. https://doi.org/10.3390/v14071507Bestion E, Halfon P, Mezouar S, Mège JL. Cell and animal models for SARS-COV-2 research. Viruses. 2022;14(7):1507. https://doi.org/10.3390/v14071507Zhu N, Zhang D, Wang W, et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China. 2019. N Engl J Med. 2020;382(8):727–33. https://doi.org/10.1056/nejmoa2001017Zhu N, Zhang D, Wang W, et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China. 2019. N Engl J Med. 2020;382(8):727–33. https://doi.org/10.1056/nejmoa2001017Pires De Souza GA, Le Bideau M, Boschi C, et al. Choosing a cellular model to study SARS-CoV-2. Front Cell Infect Microbiol. 2022;12:1003608. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.1003608Pires De Souza GA, Le Bideau M, Boschi C, et al. Choosing a cellular model to study SARS-CoV-2. Front Cell Infect Microbiol. 2022;12:1003608. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.1003608Исакова-Сивак ИН, Степанова ЕА, Руденко ЛГ и др. Противовирусная активность препарата ВИФЕРОН® в форме суппозиториев ректальных in vitro в отношении SARS-CoV-2. Инфекция и иммунитет. 2022;12(1):142–8. https://doi.org/10.15789/2220-7619-IVA-1708Isakova-Sivak IN, Stepanova EA, Rudenko LG, et al. In vitro antiviral activity of VIFERON® rectal suppositories against SARS-CoV-2. Russian Journal of Infection and Immunity. 2022;12(1):142–48 (In Russ.). https://doi.org/10.15789/2220-7619-IVA-1708Карташова НП, Иванина АВ, Глубокова ЕА и др. Противовирусная активность комбинации интерферона альфа-2b и таурина in vitro в отношении вируса SARS-CoV-2. Антибиотики и химиотерапия. 2022;67(9–10):35–41. https://doi.org/10.37489/0235-2990-2022-67-9-10-35-41Kartashova NP, Ivanina AV, Glubokova EA, et al. Antiviral activity of interferon alpha-2b and taurine combination against SARS-CoV-2 in vitro. Antibiotics and Chemotherapy. 2022;67(9–10):35–41 (In Russ.). https://doi.org/10.37489/0235-2990-2022-67-9-10-35-41Логинова СЯ, Щукина ВН, Савенко СВ, Борисевич СВ. Активность человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b in vitro в отношении вируса SARS-CoV-2. Вопросы вирусологии. 2021;16(2):123–8. https://doi.org/10.36233/0507-4088-13Loginova SY, Shсhukina VN, Savenko SV, Borisevich SV. In vitro activity of human recombinant alpha-2b interferon against SARS-CoV-2 virus. Problems of Virology. 2021;66(2):123–8 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0507-4088-13Leneva I, Kartashova N, Poromov A, et al. Antiviral activity of umifenovir in vitro against a broad spectrum of coronaviruses, including the novel SARS-CoV-2 virus. Viruses. 2021;13(8):1665. https://doi.org/10.3390/v13081665Leneva I, Kartashova N, Poromov A, et al. Antiviral activity of umifenovir in vitro against a broad spectrum of coronaviruses, including the novel SARS-CoV-2 virus. Viruses. 2021;13(8):1665. https://doi.org/10.3390/v13081665Грачева АВ, Корчевая ЕР, Кудряшова АМ, и др. Адаптация МТТ-теста для определения нейтрализующих антител к вирусу SARS-CoV-2. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2021;98(3):253–65. https://doi.org/10.36233/0372-9311-136Gracheva AV, Korchevaya ER, Kudryashova AM, et al. Adaptation of the MTT assay for detection of neutralizing antibodies against the SARS-CoV-2 virus. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2021;98(3):253–65 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0372-9311-136Osada N, Kohara A, Yamaji T, et al. The genome landscape of the African green monkey kidney-derived Vero cell line. DNA Res. 2014;21(6):673–83. https://doi.org/10.1093/dnares/dsu029Osada N, Kohara A, Yamaji T, et al. The genome landscape of the African green monkey kidney-derived Vero cell line. DNA Res. 2014;21(6):673–83. https://doi.org/10.1093/dnares/dsu029Fogh J, Fogh JM, Orfeo T. One hundred and twenty-seven cultured human tumor cell lines producing tumors in nude mice. J Natl Cancer Inst. 1977;59(1):221–6. https://doi.org/10.1093/jnci/59.1.221Fogh J, Fogh JM, Orfeo T. One hundred and twenty-seven cultured human tumor cell lines producing tumors in nude mice. J Natl Cancer Inst. 1977;59(1):221–6. https://doi.org/10.1093/jnci/59.1.221Aiewsakun P, Phumiphanjarphak W, Ludowyke N, et al. Systematic exploration of SARS-CoV-2 adaptation to Vero E6, Vero E6/TMPRSS2, and Calu-3 Cells. Genome Biol Evol. 2023;15(4):evad035. https://doi.org/10.1093/gbe/evad035Aiewsakun P, Phumiphanjarphak W, Ludowyke N, et al. Systematic exploration of SARS-CoV-2 adaptation to Vero E6, Vero E6/TMPRSS2, and Calu-3 Cells. Genome Biol Evol. 2023;15(4):evad035. https://doi.org/10.1093/gbe/evad035Hoffmann M, Kleine-Weber H, Pöhlmann S. A multibasic cleavage site in the spike protein of SARS-CoV-2 Is essential for infection of human lung cells. Mol Cell. 2020;78(4):779–84.e5. https://doi.org/10.1016/j.molcel.2020.04.022Hoffmann M, Kleine-Weber H, Pöhlmann S. A multibasic cleavage site in the spike protein of SARS-CoV-2 Is essential for infection of human lung cells. Mol Cell. 2020;78(4):779–84.e5. https://doi.org/10.1016/j.molcel.2020.04.022Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor. Cell. 2020;181(2):271–80.e8. https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.02.052Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor. Cell. 2020;181(2):271–80.e8. https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.02.052Pereira EPV, da Silva Felipe SM, de Freitas RM, et al. Transcriptional profiling of SARS-CoV-2-infected Calu-3 cells reveals immune-related signaling pathways. Pathogens. 2023;12(11):1373. https://doi.org/10.3390/pathogens12111373Pereira EPV, da Silva Felipe SM, de Freitas RM, et al. Transcriptional profiling of SARS-CoV-2-infected Calu-3 cells reveals immune-related signaling pathways. Pathogens. 2023;12(11):1373. https://doi.org/10.3390/pathogens12111373Felgenhauer U, Schoen A, Gad HH, et al. Inhibition of SARS-CoV-2 by type I and type III interferons. J Biol Chem. 2020;295(41):13958–64. https://doi.org/10.1074/jbc.ac120.013788Felgenhauer U, Schoen A, Gad HH, et al. Inhibition of SARS-CoV-2 by type I and type III interferons. J Biol Chem. 2020;295(41):13958–64. https://doi.org/10.1074/jbc.ac120.013788Понежева ЖБ, Гришаева АА, Маннанова ИВ и др. Профилактическая эффективность рекомбинантного интерферона альфа-2b в условиях пандемии COVID-19. Лечащий Врач. 2020;(12):56–60. https://doi.org/10.26295/OS.2020.29.66.011Ponezheva ZhB, Grishaeva AA, Mannanova IV, et al. Рreventive efficacy of interferon alpha-2b in the COVID-19 pandemic. Lechaschi Vrach. 2020;(12):56–60 (In Russ.). https://doi.org/10.26295/OS.2020.29.66.011Афанасьева ОИ, Головачева ЕГ, Осидак ЛВ и др. Показатели цитокинового статуса у детей с ОРВИ на фоне терапии интраназальными препаратами интерферона. Детские инфекции. 2021;20(4):6–12. https://doi.org/10.22627/2072-8107-2021-20-4-6-12Afanasyeva OI, Golovacheva EG, Osidak LV, et al. Cytokine status indicators in children with acute respiratory viral infections after treatment with intranasal interferon-based medicine. Children Infections. 2021;20(4):6–12 (In Russ.) https://doi.org/10.22627/2072-8107-2021-20-4-6-12Lee JH, Koepke L, Kirchhoff F, Sparrer KMJ. Interferon antagonists encoded by SARS-CoV-2 at a glance. Med Microbiol Immunol. 2023;212(2):125–31. https://doi.org/10.1007/s00430-022-00734-9Lee JH, Koepke L, Kirchhoff F, Sparrer KMJ. Interferon antagonists encoded by SARS-CoV-2 at a glance. Med Microbiol Immunol. 2023;212(2):125–31. https://doi.org/10.1007/s00430-022-00734-9Kehrer T, Cupic A, Ye C, et al. Impact of SARS-CoV-2 ORF6 and its variant polymorphisms on host responses and viral pathogenesis. Cell Host Microbe. 2023;31(10):1668–84.e12. https://doi.org/10.1016/j.chom.2023.08.003Kehrer T, Cupic A, Ye C, et al. Impact of SARS-CoV-2 ORF6 and its variant polymorphisms on host responses and viral pathogenesis. Cell Host Microbe. 2023;31(10):1668–84.e12. https://doi.org/10.1016/j.chom.2023.08.003Ramakrishnan MA. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J Virol. 2016;5(2):85–6. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Ramakrishnan MA. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J Virol. 2016;5(2):85–6. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65(1–2):55–63. https://doi.org/10.1016/0022-1759(83)90303-4Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65(1–2):55–63. https://doi.org/10.1016/0022-1759(83)90303-4Gracheva AV, Korchevaya ER, Ammour YI, et al. Immunogenic properties of SARS-CoV-2 inactivated by ultraviolet light. Arch Virol. 2022;167(11):2181–91. https://doi.org/10.1007/s00705-022-05530-7Gracheva AV, Korchevaya ER, Ammour YI, et al. Immunogenic properties of SARS-CoV-2 inactivated by ultraviolet light. Arch Virol. 2022;167(11):2181–91. https://doi.org/10.1007/s00705-022-05530-7Park BK, Kim D, Park S, et al. Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection. Biomol Ther (Seoul). 2021;29(3):273–81. https://doi.org/10.4062/biomolther.2020.226Park BK, Kim D, Park S, et al. Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection. Biomol Ther (Seoul). 2021;29(3):273–81. https://doi.org/10.4062/biomolther.2020.226Desmyter J, Melnick JL, Rawls WE. Defectiveness of interferon production and of rubella virus interference in a line of African green monkey kidney cells (Vero). J Virol. 1968;2(10):955–61. https://doi.org/10.1128/jvi.2.10.955-961.1968Desmyter J, Melnick JL, Rawls WE. Defectiveness of interferon production and of rubella virus interference in a line of African green monkey kidney cells (Vero). J Virol. 1968;2(10):955–61. https://doi.org/10.1128/jvi.2.10.955-961.1968Takayama K. In vitro and animal models for SARS-CoV-2 research. Trends Pharmacol Sci. 2020;41(8):513–7. https://doi.org/10.1016/j.tips.2020.05.005Takayama K. In vitro and animal models for SARS-CoV-2 research. Trends Pharmacol Sci. 2020;41(8):513–7. https://doi.org/10.1016/j.tips.2020.05.005Chew T, Noyce R, Collins SE, et al. Characterization of the interferon regulatory factor 3‑mediated antiviral response in a cell line deficient for IFN production. Mol Immunol. 2009;46(3):393–9. https://doi.org/10.1016/j.molimm.2008.10.010Chew T, Noyce R, Collins SE, et al. Characterization of the interferon regulatory factor 3‑mediated antiviral response in a cell line deficient for IFN production. Mol Immunol. 2009;46(3):393–9. https://doi.org/10.1016/j.molimm.2008.10.010Kozlovskaya LI, Piniaeva AN, Ignatyev GM, et al. Long-term humoral immunogenicity, safety and protective efficacy of inactivated vaccine against COVID-19 (CoviVac) in preclinical studies. Emerg Microbes Infect. 2021;10(1):1790–806. https://doi.org/10.1080/22221751.2021.1971569Kozlovskaya LI, Piniaeva AN, Ignatyev GM, et al. Long-term humoral immunogenicity, safety and protective efficacy of inactivated vaccine against COVID-19 (CoviVac) in preclinical studies. Emerg Microbes Infect. 2021;10(1):1790–806. https://doi.org/10.1080/22221751.2021.1971569Barrett PN, Mundt W, Kistner O, Howard MK. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines. Expert Rev Vaccines. 2009;8(5):607–18. https://doi.org/10.1586/erv.09.19Barrett PN, Mundt W, Kistner O, Howard MK. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines. Expert Rev Vaccines. 2009;8(5):607–18. https://doi.org/10.1586/erv.09.19Grossegesse M, Bourquain D, Neumann M, et al. Deep time course proteomics of SARS-CoV- and SARS-CoV-2-infected human lung epithelial cells (Calu-3) reveals strong induction of interferon-stimulated gene expression by SARS-CoV-2 in contrast to SARS-CoV. J Proteome Res. 2022;21(2):459–69. https://doi.org/10.1021/acs.jproteome.1c00783Grossegesse M, Bourquain D, Neumann M, et al. Deep time course proteomics of SARS-CoV- and SARS-CoV-2-infected human lung epithelial cells (Calu-3) reveals strong induction of interferon-stimulated gene expression by SARS-CoV-2 in contrast to SARS-CoV. J Proteome Res. 2022;21(2):459–69. https://doi.org/10.1021/acs.jproteome.1c00783Chen R, Fulton KM, Tran A, et al. Integrated immunopeptidomics and proteomics study of SARS-CoV-2-infected Calu-3 cells reveals dynamic changes in allele-specific HLA abundance and antigen presentation. Mol Cell Proteomics. 2023;22(10):100645. https://doi.org/10.1016/j.mcpro.2023.100645Chen R, Fulton KM, Tran A, et al. Integrated immunopeptidomics and proteomics study of SARS-CoV-2-infected Calu-3 cells reveals dynamic changes in allele-specific HLA abundance and antigen presentation. Mol Cell Proteomics. 2023;22(10):100645. https://doi.org/10.1016/j.mcpro.2023.100645Xu S, Chen X, Meng F, et al. Development of an in-cell ELISA for the titration of porcine reproductive and respiratory syndrome virus using monoclonal antibodies against its nucleocapsid protein. Vet J. 2026;317:106695. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2026.106695Xu S, Chen X, Meng F, et al. Development of an in-cell ELISA for the titration of porcine reproductive and respiratory syndrome virus using monoclonal antibodies against its nucleocapsid protein. Vet J. 2026;317:106695. https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2026.106695Magnus CL, Jaber ZH, Hiergeist A, et al. SARS-CoV-2 evolution enhances endocytic uptake while preserving TMPRSS2-dependent fusion. Front Immunol. 2026;16:1736891. https://doi.org/10.3389/fimmu.2025.1736891Magnus CL, Jaber ZH, Hiergeist A, et al. SARS-CoV-2 evolution enhances endocytic uptake while preserving TMPRSS2-dependent fusion. Front Immunol. 2026;16:1736891. https://doi.org/10.3389/fimmu.2025.1736891Nchioua R, Schundner A, Klute S, et al. Reduced replication but increased interferon resistance of SARS-CoV-2 omicron BA.1. Life Sci Alliance. 2023;6(6):e202201745. https://doi.org/10.26508/lsa.202201745Nchioua R, Schundner A, Klute S, et al. Reduced replication but increased interferon resistance of SARS-CoV-2 omicron BA.1. Life Sci Alliance. 2023;6(6):e202201745. https://doi.org/10.26508/lsa.202201745

The authors declare that there are no conflicts of interest present.