biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2026-729biopreparat-729Research ArticleСТАНДАРТИЗАЦИЯ И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВАSTANDARDIZATION AND QUALITY CONTROLИнактивация Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae при производстве гриппозных вакцинInactivation of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae during influenza vaccine productionhttps://orcid.org/0000-0002-3670-5614СавинаН. Н.SavinaN. N.

Савина Наталья Николаевна

ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

Natalya N. Savina

52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

n.n.savina@niivs.ruhttps://orcid.org/0009-0000-2435-6114АлиевМ. Ш.AlievM. Sh.

Алиев Магомед Шахбаддин оглы

ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

Magomed Sh. Aliev

52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

m.s.aliev@niivs.ruhttps://orcid.org/0009-0009-8640-9766РеутскийА. И.ReutskiyA. I.

Реутский Александр Игоревич

ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

Alexander I. Reutskiy

52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

a.i.reutskiy@niivs.ruhttps://orcid.org/0009-0001-6697-169XГороховаТ. В.GorokhovaT. V.

Горохова Тамара Викторовна

ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

Tamara V. Gorokhova

52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

t.v.gorokhova@niivs.ruhttps://orcid.org/0009-0007-4590-5961БабкинаО. С.BabkinaO. S.

Бабкина Ольга Сергеевна

ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

Olga S. Babkina

52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

o.s.babkina@niivs.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6824-1503ПанкратовС. В.PankratovS. V.

Панкратов Сергей Вячеславович, канд. вет. наук, доцент

ул. Черниговская, д. 5, Санкт-Петербург, 196084

Sergei V. Pankratov, Cand. Sci. (Vet.), Assoc. Prof.

5 Chernigovskaya St., Saint Petersburg 196084

2000step@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2121-2048СероваН. Ю.SerovaN. Yu.

Серова Наталья Юрьевна, канд. вет. наук

д. 21, лит А, д. Горбунки, Ломоносовский район, Ленинградская область, 188502

Natalia Yu. Serova, Cand. Sci. (Vet.)

21A Orlinskaya zona, Gorbunki, Lomonosovskiy district, Leningrad region 188502

serovanatalia@mail.ruФедеральное государственное унитарное предприятие «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентстваРоссияSaint Petersburg Scientific Research Institute of Vaccines and Sera and the Enterprise for the Production of Bacterial PreparationsRussian FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины»РоссияSaint Petersburg State University of Veterinary MedicineRussian FederationОбщество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное предприятие «Авивак»РоссияAVIVAC NPP LLCRussian Federation202605102026263349358Copyright © Савина Н.Н., Алиев М.Ш., Реутский А.И., Горохова Т.В., Бабкина О.С., Панкратов С.В., Серова Н.Ю., 20262026Савина Н.Н., Алиев М.Ш., Реутский А.И., Горохова Т.В., Бабкина О.С., Панкратов С.В., Серова Н.Ю.Savina N.N., Aliev M.S., Reutskiy A.I., Gorokhova T.V., Babkina O.S., Pankratov S.V., Serova N.Y.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/729ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. При производстве гриппозных вакцин используются куриные эмбрионы, что сопровождается рисками контаминации конечного продукта микоплазмами птиц Mycoplasma gallisepticum и M. synoviae, представляющими потенциальную опасность для человека. В связи с этим актуальной представляется оценка эффективности инактивации указанных контаминантов на полупродуктах гриппозных вакцин с использованием инактиваторов (β-пропиолактон, ультрафиолетовое облучение) и детергентов.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Оценить динамику инактивации M. gallisepticum и M. synoviae в полупродуктах гриппозных вакцин при воздействии β-пропиолактона, ультрафиолетового облучения и детергентов (н-октил-β-D-глюкопиранозид, тетрадецилтриметиламмония бромид) для определения эффективности этих воздействий в условиях производства вакцин.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. В работе использовали M. synoviae штамм WVU1853 (АТСС) и M. gallisepticum (ФГБУ «ВГНКИ»). Для оценки динамики инактивации проводили контаминацию полупродуктов гриппозных вакцин, содержащих вирус гриппа человека, культурами микоплазм в концентрации не менее 4 lg КОЕ/мл. Инактивацию осуществляли при следующих условиях: 0,09% β-пропиолактон при температуре 4 °C в течение 12 ч; ультрафиолетовое облучение (мощность 60 Вт) при толщине слоя контаминированных полупродуктов ≤1,1 мм в течение 5 мин; 0,98% н-октил-β-D-глюкопиранозид и 0,07% тетрадецилтриметиламмоний бромид при температуре 18 °C в течение 60 мин. Концентрацию микоплазм M. gallisepticum и M. synoviae в испытуемых образцах оценивали методом определения колониеобразующих единиц (КОЕ).

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Сразу после внесения β-пропиолактона концентрация M. gallisepticum снижалась на 1,88±0,20 lg КОЕ/мл, M. synoviae — на 2,17±0,37 lg КОЕ/мл. Через 4 ч инактивации жизнеспособные микоплазмы обоих видов не обнаруживались. При воздействии ультрафиолетового облучения жизнеспособные M. gallisepticum не обнаруживались через 1 мин, а M. synoviae — через 0,5 мин. Сразу после добавления детергентов (н-октил-β-D-глюкопиранозида или тетрадецилтриметиламмоний бромида) жизнеспособные M. gallisepticum и M. synoviae не выявлялись.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Все исследованные типы инактивации микоплазм при производстве гриппозных вакцин (β-пропиолактон, ультрафиолетовое облучение, н-октил-β-D-глюкопиранозид и тетрадецилтриметиламмония бромид) обеспечивают снижение жизнеспособности M. gallisepticum и M. synoviae более чем на 4 lg КОЕ/мл. Описанные подходы к оценке динамики инактивации микоплазм птиц могут быть использованы для изучения устойчивости других контаминантов к различным способам инактивации и химическим реагентам.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. The use of chicken embryos in influenza vaccine production carries the risk of contaminating the final product with the avian mycoplasmas, Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae, which pose a potential hazard to humans. Therefore, evaluating the effectiveness of inactivating these contaminants in influenza vaccine intermediates using inactivators (β-propiolactone, ultraviolet irradiation) and detergents is important.

AIM

AIM. This study aimed to evaluate the inactivation dynamics of M. gallisepticum and M. synoviae in influenza vaccine intermediates following exposure to β-propiolactone, ultraviolet irradiation, and detergents (n-octyl-β-D-glucopyranoside, tetradecyltrimethylammonium bromide) to determine their effectiveness under vaccine production conditions.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. M. synoviae strain WVU1853 (ATCC) and M. gallisepticum (VGNKI) were used. To assess inactivation dynamics, influenza vaccine intermediates containing human influenza virus were spiked with mycoplasma cultures at a concentration of at least 4 lg CFU/mL. Inactivation was performed under the following conditions: 0.09% β-propiolactone at 4 °C for 12 hours; ultraviolet irradiation (60 W) with a layer thickness of the contaminated intermediates ≤1.1 mm for 5 min; 0.98% n-octyl-β-D-glucopyranoside and 0.07% tetradecyltrimethylammonium bromide at 18 °C for 60 min. The concentrations of M. gallisepticum and M. synoviae in the test samples were determined by the colony-forming unit (CFU) assay.

RESULTS

RESULTS. Immediately after β-propiolactone addition, the concentration of M. gallisepticum decreased by 1.88±0.20 lg CFU/mL, and that of M. synoviae decreased by 2.17±0.37 lg CFU/mL. After 4 hours of inactivation, no viable mycoplasmas of either species were detected. Under ultraviolet irradiation, viable M. gallisepticum were not detected after 1 min, and M. synoviae were not detected after 0.5 min. No viable M. gallisepticum or M. synoviae were detected immediately after the addition of detergents (n-octyl-β-D-glucopyranoside or tetradecyltrimethyl-ammonium bromide).

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. All studied mycoplasma inactivation methods used in influenza vaccine production (β-propiolactone, ultraviolet irradiation, n-octyl-β-D-glucopyranoside, and tetradecyltrimethylammonium bromide) reduce the viability of M. gallisepticum and M. synoviae by more than 4 lg CFU/mL. The described approaches for assessing the inactivation dynamics of avian mycoplasmas can be used to study the resistance of other contaminants to various inactivation methods and chemical reagents.

микоплазмыMycoplasma gallisepticumMycoplasma synoviaeгриппозные вакциныинактивацияβ-пропиолактонУФ-облучениен-октил-β-D-глюкопиранозидтетрадецилтриметиламмония бромидmycoplasmasMycoplasma gallisepticumMycoplasma synoviaeinfluenza vaccinesinactivationβ-propiolactoneultraviolet irradiationn-octyl-β-D-glucopyranosidetetradecyltrimethylammonium bromideReferencesMugunthan SP, Kannan G, Chandra HM, Paital B. Infection, transmission, pathogenesis and vaccine development against Mycoplasma gallisepticum. Vaccines (Basel). 2023;11(2):469. https://doi.org/10.3390/vaccines11020469Mugunthan SP, Kannan G, Chandra HM, Paital B. Infection, transmission, pathogenesis and vaccine development against Mycoplasma gallisepticum. Vaccines (Basel). 2023;11(2):469. https://doi.org/10.3390/vaccines11020469Christensen NH, Yavari CA, McBain AJ, Bradbury JM. Investigations into the survival of Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae and Mycoplasma iowae on materials found in the poultry house environment. Avian Pathol. 1994;23(1):127–43. https://doi.org/10.1080/03079459408418980Christensen NH, Yavari CA, McBain AJ, Bradbury JM. Investigations into the survival of Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae and Mycoplasma iowae on materials found in the poultry house environment. Avian Pathol. 1994;23(1):127–43. https://doi.org/10.1080/03079459408418980David SA, Volokhov DV, Ye Z, Chizhikov V. Evaluation of Mycoplasma inactivation during production of biologics: egg-based viral vaccines as a model. Appl Environ Microbiol. 2010;76(9):2718–28. https://doi.org/10.1128/AEM.02776-09David SA, Volokhov DV, Ye Z, Chizhikov V. Evaluation of Mycoplasma inactivation during production of biologics: egg-based viral vaccines as a model. Appl Environ Microbiol. 2010;76(9):2718–28. https://doi.org/10.1128/AEM.02776-09Clark MI. Management of breeding in small poultry production units. In: Noakes DE, Parkinson TJ, England G, eds. Veterinary reproduction and obstetrics. 10th ed. Saunders Ltd; 2019. P. 526–40. https://doi.org/10.1016/B978-0-7020-7233-8.00030-6Clark MI. Management of breeding in small poultry production units. In: Noakes DE, Parkinson TJ, England G, eds. Veterinary reproduction and obstetrics. 10th ed. Saunders Ltd; 2019. P. 526–40. https://doi.org/10.1016/B978-0-7020-7233-8.00030-6Лыско СБ. Способы обеззараживания инкубационных яиц от микоплазм. Студенческая научно-практическая конференция «Методы повышения эффективности инновационных исследований в регионах СКФО». Грозный; 2023. С. 107–12. https://doi.org/10.36684/116-1-2023-107-112Lysko SB. Methods for disinfecting hatching eggs from mycoplasmas. Student scientiffc and practical conference “Methods for increasing the efffciency of innovative research in the regions of the North Caucasus Federal District”. Grozny; 2023. P. 107–12 (In Russ.). https://doi.org/10.36684/116-1-2023-107-112Haussmann C, Hauschild F, Jobst B, Novartis AG. Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens. Patent of the United States No. US6986808P; 2008.Haussmann C, Hauschild F, Jobst B, Novartis AG. Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens. Patent of the United States No. US6986808P; 2008.Burt DS, Jones DH, Lowell GH, et al. Proteosome influenza vaccine. Patent of the United States No. US18247600P; 2000.Burt DS, Jones DH, Lowell GH, et al. Proteosome influenza vaccine. Patent of the United States No. US18247600P; 2000.Трухин ВП, Евтушенко АЭ, Красильников ИВ и др. Способ получения антигена или антигенов для производства противогриппозной вакцины и вакцина на его основе. Патент Российской Федерации № RU2019118695A; 2019. EDN: FIGFSLTrukhin VP, Evtushenko AE, Krasilnikov IV, et al. A method for obtaining an antigen or antigens for the production of an influenza vaccine and a vaccine based on it. Patent of the Russian Federation No. RU2019118695A; 2019 (In Russ.). EDN: FIGFSLShi H, Ross TM. Inactivated recombinant influenza vaccine: The promising direction for the next generation of influenza vaccine. Expert Rev Vaccines. 2024;23(1):409–18. https://doi.org/10.1080/14760584.2024.2333338Shi H, Ross TM. Inactivated recombinant influenza vaccine: The promising direction for the next generation of influenza vaccine. Expert Rev Vaccines. 2024;23(1):409–18. https://doi.org/10.1080/14760584.2024.2333338Трухин ВП, Евтушенко АЭ, Савина НН и др. Способ получения концентрата вируса гриппа для получения вакцины. Патент Российской Федерации № RU2839314 С2; 2025. Trukhin VP, Evtushenko AE, Savina NN, et al. Method for producing an influenza virus concentrate for producing a vaccine. Patent of the Russian Federation No. RU2839314 С2; 2025 (In Russ.). EDN: SFAAZETrukhin VP, Evtushenko AE, Savina NN, et al. Method for producing an influenza virus concentrate for producing a vaccine. Patent of the Russian Federation No. RU2839314 С2; 2025 (In Russ.). EDN: SFAAZEKon TC, Onu A, Berbecila L, et al. Influenza vaccine manufacturing: Effect of inactivation, splitting and site of manufacturing. Comparison of influenza vaccine production processes. PloS One. 2016;11(3):e0150700. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150700Kon TC, Onu A, Berbecila L, et al. Influenza vaccine manufacturing: Effect of inactivation, splitting and site of manufacturing. Comparison of influenza vaccine production processes. PloS One. 2016;11(3):e0150700. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0150700Hessling M, Gierke AM, Sicks B, et al. Sensitivity of influenza virus to ultraviolet irradiation. GMS Hyg Infect Control. 2022;17:Doc20. https://doi.org/10.3205/dgkh000423Hessling M, Gierke AM, Sicks B, et al. Sensitivity of influenza virus to ultraviolet irradiation. GMS Hyg Infect Control. 2022;17:Doc20. https://doi.org/10.3205/dgkh000423Красильников ИВ, Иванов АВ, Белякова ОВ и др. Способ получения тетравалентной субъединичной противогриппозной вакцины. Патент Российской Федерации № RU2740751 С1; 2021. EDN: FMGRUJKrasilnikov IV, Ivanov AV, Belyakova OV, et al. Method for producing a tetravalent subunit influenza vaccine. Patent of the Russian Federation No. RU2740751 С1; 2021 (In Russ.). EDN: FMGRUJАлсынбаев ММ, Загидуллин НВ, Кедик СА. Вакцина против гриппа и способ ее получения. Патент Российской Федерации № RU2446824 С2; 2012. EDN: GUUJYTAlsynbaev MM, Zagidullin NV, Kedik SA. Influenza vaccine and method for its production. Patent of the Russian Federation No. RU2446824 С2; 2012 (In Russ.). EDN: GUUJYTСавина НН, Екимов АА, Трухин ВП и др. Оценка методов инактивирования аденовируса птиц при производстве гриппозных вакцин. Экстремальная биомедицина. 2021;23(3):84–9. https://doi.org/10.47183/mes.2021.032Savina NN, Ekimov AA, Trukhin VP, et al. Evaluation of avian adenovirus inactivation methods used in the production of influenza vaccines. Extreme Medicine. 2021;23(3):84–9 (In Russ.). https://doi.org/10.47183/mes.2021.032Савина НН, Екимов АА, Шуклина МА и др. Оценка методов инактивирования вируса лейкоза птиц при производстве гриппозных вакцин. Экстремальная биомедицина. 2022;24(4):60–5. https://doi.org/10.47183/mes.2022.047Savina NN, Ekimov AA, Trukhin VP, et al. Evaluation of methods of avian leucosis virus inactivation in production of influenza vaccines. Extreme Medicine. 2022;24(4):60–5 (In Russ.). https://doi.org/10.47183/mes.2022.047Kundsin RB. Characterization of Mycoplasma aerosols as to viability, particle size, and lethality of ultraviolet irradiation. J Bacteriol. 1966;91(3):942–4. https://doi.org/10.1128/jb.91.3.942-944.1966Kundsin RB. Characterization of Mycoplasma aerosols as to viability, particle size, and lethality of ultraviolet irradiation. J Bacteriol. 1966;91(3):942–4. https://doi.org/10.1128/jb.91.3.942-944.1966Mizuno M, Kimbara S, Ichise H, et al. Cleaning methods for biosafety cabinet to eliminate residual mycoplasmas, viruses, and endotoxins after changeover. Regen Ther. 2025;28:73–80. https://doi.org/10.1016/j.reth.2024.11.020Mizuno M, Kimbara S, Ichise H, et al. Cleaning methods for biosafety cabinet to eliminate residual mycoplasmas, viruses, and endotoxins after changeover. Regen Ther. 2025;28:73–80. https://doi.org/10.1016/j.reth.2024.11.020Atalla H, Lysnyansky I, Raviv Y, Rottem S. Mycoplasma gallisepticum inactivated by targeting the hydrophobic domain of the membrane preserves surface lipoproteins and induces a strong immune response. PloS One. 2015;10(3):e0120462. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0120462Atalla H, Lysnyansky I, Raviv Y, Rottem S. Mycoplasma gallisepticum inactivated by targeting the hydrophobic domain of the membrane preserves surface lipoproteins and induces a strong immune response. PloS One. 2015;10(3):e0120462. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0120462

The authors declare that there are no conflicts of interest present.