Суханова Светлана Михайловна, канд. биол. наук
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Svetlana M. Sukhanova, Cand. Sci. (Biol.)
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
Бердникова Зинаида Евтропиевна, канд. биол. наук
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Zinaida E. Berdnikova, Cand. Sci. (Biol.)
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
Фадейкина Ольга Васильевна, канд. биол. наук
Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051
Olga V. Fadeikina, Cand. Sci. (Biol.)
8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051
ВВЕДЕНИЕ. Выявление микоплазм является одной из наиболее сложных проблем при контроле микробной контаминации биологических лекарственных препаратов (БЛП). Для обнаружения микоплазм в БЛП и стандартизации микробиологического метода контроля необходимы высокочувствительные питательные среды и фармакопейные стандартные образцы (ФСО) тест-штаммов различных видов микоплазм.
ЦЕЛЬ. Разработка и аттестация нового фармакопейного стандартного образца Acholeplasma laidlawii PG8 для проведения испытаний биологических лекарственных препаратов на присутствие микоплазм микробиологическим методом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Разработку ФСО проводили согласно требованиям Государственной фармакопеи Российской Федерации (ГФ РФ) с использованием штамма A. laidlawii PG8 (ГКПМ 930002, ATCC 23206, NCTC 10116), питательной среды Каган, сыворотки крови лошади. Аттестация ФСО включала определение значения титра штамма A. laidlawii PG8 методом наиболее вероятных чисел и испытания по следующим показателям качества: «Описание», «Наличие вакуума», «Время растворения», «Внешний вид растворенного образца», «Стерильность», «Потеря в массе при высушивании», «Однородность массы (средняя масса и отклонение от средней массы)».
РЕЗУЛЬТАТЫ. Проведена разработка ФСО A. laidlawii PG8 и составлена спецификация ФСО. Приготовлены лиофилизированные образцы основного и рабочего банков культуры A. laidlawii PG8. Установлено, что процедура лиофилизации не оказывает существенного воздействия на жизнеспособность штамма. Показана стабильность значений титра штамма (10⁸ КОЕ/мл), культуральных и физико-химических свойств образцов по критически важным для обеспечения качества и надежности показателям в течение двух лет хранения при температуре минус 20–30°С. Аттестованы три серии ФСО A. laidlawii PG8. Значения титра серий ФСО варьировались от 10×10⁸ до 21×10⁸ КОЕ/мл. Показана сопоставимость разработанного ФСО со стандартным образцом Европейской фармакопеи BRP A. laidlawii, серия 1 (титр 2,45×10⁶ КОЕ/мл). На основании результатов исследований ФСО A. laidlawii PG8 включен в Реестр ФСО ГФ РФ.
ВЫВОДЫ. Разработан и аттестован новый ФСО A. laidlawii PG8. ФСО может быть использован для оценки ростовых свойств питательных сред, определения наличия ингибирующего действия, а также в качестве положительного контроля при испытаниях БЛП и биологических материалов, применяемых в их производстве, на присутствие микоплазм микробиологическим методом согласно требованиям ГФ РФ. Внедрение ФСО будет способствовать стандартизации и повышению качества контроля БЛП, а также гармонизации требований ГФ РФ с международными стандартами.
INTRODUCTION. Mycoplasmas are one of the most challenging types of microbial contamination to detect in biological products (BP). Detecting micoplasmas in the BPs and standardizing microbiological control method necessitates highly sensitive culture media and pharmacopeial reference standards (RS) for test strains of various mycoplasmas.
AIM. This study aimed to develop and certify the new pharmacopeial reference standard Acholeplasma laidlawii PG8 for mycoplasma identification in the BPs using the microbiological method.
MATERIALS AND METHODS. A. laidlawii PG8 (NCPМ 930002, ATCC 23206, NCTC 10116) strain, Kagan's medium, and horse serum was used to develop the reference standard in compliance with the State Pharmacopoeia of the Russian Federation (SP RF). The certification included determination of strain titre by the most probable number method and quality tests for: Description, Vacuum, Reconstitution time, Description of dissolved sample, Sterility, Loss on drying, and Mass homogeneity (average mass and average deviation).
RESULTS. Development and specification of A. laidlawii PG8 reference standard was completed. Lyophilised samples of the master and working bank of A. laidlawii PG8 strain culture were prepared. It was established that the lyophilization process does not significantly affect strain viability. The stability of strain titers (108 CFU/mL), cultural, and physicochemical properties of the samples was demonstrated for critical quality and reliability indicators during two years of storage at -20 to -30°C. Three batches of A. laidlawii PG8 RS were certified. The calculated titer values ranged from 10×108 to 21×108 CFU/mL. The pharmacopoeial reference standard is found to be comparable to the European Pharmacopoeia reference standard A. laidlawii BRP, batch 1 (titer 2.45×106 CFU/mL). As a result of the conducted research, A. laidlawii PG8 RS was included in the Register and Collection of Reference Standards of the Russian Pharmacopoeia.
CONCLUSIONS. A new A. laidlawii PG8 reference standard has been developed and certified that can be used to evaluate the nutritive properties of culture media; determine the inhibitory effects; and serve as a positive control in BP and material tests for the presence of mycoplasmas using the microbiological method in accordance with SP RF requirements. Introducing the new RS will contribute to standardization and improve BP control, as well as harmonization of the Russian compendial requirements with the international standards.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.