biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2025-25-2-182-192biopreparat-654Research ArticleТЕМА НОМЕРА: ТРЕНДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВISSUE TOPIC: TRENDS IN QUALITY CONTROL AND STANDARDISATION OF BIOLOGICALSАттестация фармакопейного стандартного образца для оценки специфической активности адсорбированного столбнячного анатоксина на морских свинкахCertification of a pharmacopoeial reference standard for potency testing of adsorbed tetanus toxoid in guinea pigshttps://orcid.org/0000-0002-9035-6072КомаровскаяЕ. И.KomarovskayaE. I.

Комаровская Елена Игоревна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Elena I. Komarovskaya

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Komarovskaya@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8473-7442ФадейкинаО. В.FadeikinaO. V.

Фадейкина Ольга Васильевна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga V. Fadeikina, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

fadeikina@expmed.ruhttps://orcid.org/0009-0000-4276-4744ЛыскоК. А.LyskoK. A.

Лыско Ксения Андреевна, канд. техн. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Ksenia A. Lysko, Cand. Sci. (Techn.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

lysko@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8698-2890ВолковаР. А.VolkovaR. A.

Волкова Рауза Асхатовна, д-р биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Rauza A. Volkova, Dr. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

volkova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1439-2052КорниловаО. Г.KornilovaO. G.

Корнилова Ольга Геннадьевна, д-р фарм. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga G. Kornilova, Dr. Sci. (Pharm.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation202525062025252182192Copyright © Комаровская Е.И., Фадейкина О.В., Лыско К.А., Волкова Р.А., Корнилова О.Г., 20252025Комаровская Е.И., Фадейкина О.В., Лыско К.А., Волкова Р.А., Корнилова О.Г.Komarovskaya E.I., Fadeikina O.V., Lysko K.A., Volkova R.A., Kornilova O.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/654ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. В настоящее время национальный фармакопейный стандартный образец (ФСО.3.2.00247) для оценки активности адсорбированного столбнячного анатоксина (СА) аттестован только на мышах, в то время как международный стандартный образец (МСО) ВОЗ аттестован на двух видах животных — мышах и морских свинках. В связи с формированием регуляторной системы Евразийского экономического союза (ЕАЭС) и гармонизацией Фармакопеи ЕАЭС с Европейской фармакопеей актуально дополнить аттестованную характеристику ФСО.3.2.00247 значением специфической активности, установленной методом летального заражения на морских свинках.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Определение величины специфической активности фармакопейного стандартного образца адсорбированного столбнячного анатоксина методом летального заражения на морских свинках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. В работе использовали четвертый МСО ВОЗ адсорбированного СА (4th WHO International Standard for tetanus toxoid adsorbed), ФСО для оценки активности адсорбированного СА (ФСО.3.2.00247, серия 011-210619). Определение специфической активности ФСО адсорбированного СА проводили методом летального заражения относительно МСО на морских свинках в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи (монография 2.7.8). В работе использованы 352 аутбредные морские свинки весом 250–350 г. Животных по 8–10 особей равномерно распределяли по опытным группам для проведения иммунизации: 4 группы для МСО и ФСО соответственно. Через 28–30 сут проводили инъекции столбнячного токсина — 50 LD50. Результат оценивали в течение 5 сут, регистрируя клинические признаки столбнячной интоксикации согласно международной шкале. Для контроля активности столбнячного токсина группе неиммунизированных животных из той же партии вводили соответственно 2; 1; 0,5; 0,25 LD50 токсина. Величину специфической активности ФСО и LD50 токсина рассчитывали по формуле Кербера.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Разработана программа аттестации ФСО.3.2.00247 (серия 011-210619). Проведена аттестация ФСО методом летального заражения на морских свинках. По результатам четырех испытаний установлено значение специфической активности ФСО.3.2.00247, которое составило 220 МЕ/ампула. Полученные экспериментальные данные являются основанием для внесения изменений в паспорт ФСО.3.2.00247 (серия 011-210619) путем дополнения его значением активности, определенным на морских свинках (220 МЕ/ампула). Представленные результаты свидетельствуют о возможности использования ФСО не только в методе летального заражения, но и в альтернативных методах контроля, в том числе в иммуноферментном анализе.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Аттестованная характеристика фармакопейного стандартного образца адсорбированного столбнячного анатоксина может быть дополнена значением специфической активности, установленной методом летального заражения на морских свинках — 220 МЕ/ампула.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. Currently, the national pharmacopoeial reference standard (RS) FSO.3.2.00247 for the potency of adsorbed tetanus toxoid (TT) is certified only in mice, whereas the WHO International Standard (IS) for TT is certified in two animal species — mice and guinea pigs. Given the development of the Eurasian Economic Union (EAEU) regulatory framework and the harmonization of the EAEU Pharmacopoeia with the European Pharmacopoeia, it is necessary to augment the certified characteristic of FSO.3.2.00247 with the potency value determined by the lethal challenge assay in guinea pigs.

AIM

AIM. This study aimed to determine the potency of the pharmacopoeial reference standard for tetanus toxoid adsorbed using the lethal challenge assay in guinea pigs.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. The study used the 4th WHO International Standard for tetanus toxoid adsorbed and the FSO for potency testing of TT adsorbed (FSO.3.2.00247, series 011-210619). The potency of the pharmacopoeial RS was assessed relative to the IS using the lethal challenge method in guinea pigs, in accordance with the European Pharmacopoeia (monograph 2.7.8). A total of 352 outbred guinea pigs (250–350 g) were used. Animals were evenly distributed into experimental groups (8–10 animals per group) for immunization: four groups for the IS and four for the pharmacopoeial RS. After 28–30 days, the animals were injected with tetanus toxin (50 LD50). Results were evaluated over five days, with clinical signs of tetanus intoxication monitoring in accordance with the international scoring system. To control tetanus toxin activity, a group of non-immunized animals received injections of 2, 1, 0.5, and 0.25 LD50 of the toxin. The potency of the pharmacopoeial RS and the LD50 of the toxin were calculated using Kerber’s formula.

RESULTS

RESULTS. A certification program for FSO.3.2.00247 (series 011-210619) was developed. The pharmacopoeial RS was certified using the lethal challenge assay in guinea pigs. Four experimental studies were shown that the potency of FSO.3.2.00247 was determined to be 220 IU/ampoule. Specification of FSO.3.2.00247 (series 011-210619) may be augmented with the potency value 220 IU/ampoule for guinea pigs based on the findings obtained. The results demonstrate that pharmacopoeial RS may be used not only in the lethal challenge assay but also in alternative methods for quality control, including enzyme-linked immunosorbent assay.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. The certified characteristic of the pharmacopoeial reference standard for potency testing of tetanus toxoid adsorbed may be augmented with the potency value determined by the lethal challenge assay in guinea pigs — 220 IU/ampoule.

фармакопейный стандартный образецмеждународный стандартный образецспецифическая активностьметод летального зараженияадсорбированный столбнячный анатоксинАКДС-вакцинаpharmacopoeial reference standardinternational standardpotencylethal challenge methodtetanus toxoid adsorbedDPT vaccineРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00001-25-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР № 124022200103-5).This study was conducted by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products as part of the applied research funded under State Assignment No. 056-00001-25-00 (R&D Registry No. 124022200103-5).ReferencesJones CE, Danovaro-Holliday MC, Mwinnyaa G, Gacic-Dobo M, Francis L, Grevendonk J, et al. Routine vaccination coverage — Worldwide, 2023. MMWR. 2024;73(43):978–84. https://doi.org/10.15585/mmwr.mm7343a4Jones CE, Danovaro-Holliday MC, Mwinnyaa G, Gacic-Dobo M, Francis L, Grevendonk J, et al. Routine vaccination coverage — Worldwide, 2023. MMWR. 2024;73(43):978–84. https://doi.org/10.15585/mmwr.mm7343a4Shattock AJ, Johnson HC, Sim SY, Carter A, Lambach P, Hutubessyet RCW, et al. Contribution of vaccination to improved survival and health: modelling 50 years of the Expanded Programme on Immunization. Lancet. 2024;403(10441):2307–16. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(24)00850-xShattock AJ, Johnson HC, Sim SY, Carter A, Lambach P, Hutubessyet RCW, et al. Contribution of vaccination to improved survival and health: modelling 50 years of the Expanded Programme on Immunization. Lancet. 2024;403(10441):2307–16. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(24)00850-xPopoff MR. Tetanus in animals. J Vet Diagn Invest. 2020; 32(2):184–91. https://doi.org/10.1177/1040638720906814Popoff MR. Tetanus in animals. J Vet Diagn Invest. 2020; 32(2):184–91. https://doi.org/10.1177/1040638720906814Gupta RK, Anderson R, Cecchini D, Rost B, Xu J, Gendreau K, et al. Evaluation of a guinea pig model to assess interference in the immunogenicity of different components of a combination vaccine comprising diphtheria, tetanus and acellular pertussis (DTaP) vaccine and haemophilus influenzae type B capsular polysaccharide conjugate vaccine. Biologicals. 1999;27(2):167–76. https://doi.org/10.1006/biol.1999.0204Gupta RK, Anderson R, Cecchini D, Rost B, Xu J, Gendreau K, et al. Evaluation of a guinea pig model to assess interference in the immunogenicity of different components of a combination vaccine comprising diphtheria, tetanus and acellular pertussis (DTaP) vaccine and haemophilus influenzae type B capsular polysaccharide conjugate vaccine. Biologicals. 1999;27(2):167–76. https://doi.org/10.1006/biol.1999.0204Lilley E, Coppens E, Das P, Galaway F, Isbrucker R, Sheridan S, et al. Integrating 3Rs approaches in WHO guidelines for the batch release testing of biologicals: Responses from a survey of vaccines and biological therapeutics manufacturers. Biologicals. 2023;81:101660. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2022.11.002Lilley E, Coppens E, Das P, Galaway F, Isbrucker R, Sheridan S, et al. Integrating 3Rs approaches in WHO guidelines for the batch release testing of biologicals: Responses from a survey of vaccines and biological therapeutics manufacturers. Biologicals. 2023;81:101660. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2022.11.002Hassall L, Yara DA, Riches-Duit R, Rigsby P, Dobly A, Vermeulen M, et al. Development of a monoclonal antibody sandwich ELISA for the quality control of human and animal tetanus vaccines. ALTEX. 2024;41(4):588–604. https://doi.org/10.14573/altex.2401171Hassall L, Yara DA, Riches-Duit R, Rigsby P, Dobly A, Vermeulen M, et al. Development of a monoclonal antibody sandwich ELISA for the quality control of human and animal tetanus vaccines. ALTEX. 2024;41(4):588–604. https://doi.org/10.14573/altex.2401171Шахназаров БА. Фармакопея ЕАЭС как гармонизирующая основа требований к качеству лекарственных средств в ЕАЭС и за его пределами. Актуальные проблемы российского права. 2022;17(11):183–93. https://doi.org/10.17803/1994-1471.2022.144.11.183-193Shakhnazarov BA. The EAEU Pharmacopoeia as a harmonizing basis for the requirements for the quality of medicines in the EAEU and beyond. Actual Problems of Russian Law. 2022;17(11):183–93 (In Russ.). https://doi.org/10.17803/1994-1471.2022.144.11.183-193Корнилова ОГ, Багирова ВЛ. Фармакопейная стандартизация биологических лекарственных препаратов: основные принципы в условиях единого фармацевтического рынка стран Евразийского экономического союза. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2025;25(1):71–82. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-1-71-82Kornilova OG, Bagirova VL. Pharmacopoeial standardisation of biological medicinal products: Basic principles for the common pharmaceutical market of the Eurasian Economic Union. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2025;25(1):71–82 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2025-25-1-71-82Hendriksen CFM, Steen B. Refinement of vaccine potency testing with the use of humane endpoints. ILAR J. 2000;41(2):105–13. https://doi.org/10.1093/ilar.41.2.105Hendriksen CFM, Steen B. Refinement of vaccine potency testing with the use of humane endpoints. ILAR J. 2000;41(2):105–13. https://doi.org/10.1093/ilar.41.2.105Stokes W. Humane endpoints for laboratory animals used in regulatory testing. ILAR J. 2002;43(Suppl 1):31–8. https://doi.org/10.1093/ilar.43.Suppl_1.S31Stokes W. Humane endpoints for laboratory animals used in regulatory testing. ILAR J. 2002;43(Suppl 1):31–8. https://doi.org/10.1093/ilar.43.Suppl_1.S31Ашмарин ИП, Воробьев АА. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз; 1962.Ashmarin IP, Vorobiev AA. Statistical methods in microbiological research. Leningrad: Medgiz; 1962 (In Russ.).Tierney R, Stickings P, Hockley J, Rigsby P, Iwaki M, Sesardic D. Collaborative study for the calibration of a replacement International Standard for Tetanus Toxoid Adsorbed. Biologicals. 2011;39(6):404–16. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2011.09.007Tierney R, Stickings P, Hockley J, Rigsby P, Iwaki M, Sesardic D. Collaborative study for the calibration of a replacement International Standard for Tetanus Toxoid Adsorbed. Biologicals. 2011;39(6):404–16. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2011.09.007

The authors declare that there are no conflicts of interest present.