biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2024-24-3-279-293biopreparat-584Research ArticleТЕМА НОМЕРА: РАЗРАБОТКА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ, ЛЕЧЕБНЫХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВОВИРУСНОГО ДЕЙСТВИЯISSUE TOPIC: DEVELOPMENT OF MEDICINAL PRODUCTS FOR DIAGNOSIS, TREATMENT, AND PREVENTION OF VIRAL INFECTIONSМолекулярно-генетические методы контроля качества инактивированных вакцин на модели вируса Чикунгунья: подлинность штамма и полнота инактивации вирусаMolecular genetic methods for quality control of inactivated vaccines using a Chikungunya virus model: vaccine strain identification and completeness of virus inactivationhttps://orcid.org/0000-0002-8600-7347ОксаничА. С.OksanichA. S.

Оксанич Алексей Сергеевич, канд. биол. наук

Малый Казенный пер., д. 5а, 105064, Москва

 

Alexey S. Oksanich, Cand. Sci. (Biol.)

5A Maly Kazenny Ln., Moscow 105064

oksanich@yahoo.comhttps://orcid.org/0000-0003-3264-6722СамарцеваТ. Г.SamartsevaT. G.

Самарцева Татьяна Геннадьевна

Малый Казенный пер., д. 5а, 105064, Москва

Tatiana G. Samartseva

5A Maly Kazenny Ln., Moscow 105064

samartseva08020@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8446-1853КааК. В.KaaK. V.

Каа Константин Владимирович

Ул. Погодинская д. 10, стр. 1, Москва, 119121

Konstantin V. Kaa

10/1 Pogodinskaya St., Moscow 119121

kaa_23@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2491-4072ОтрашевскаяЕ. В.OtrashevskaiaE. V.

Отрашевская Елена Викторовна

Малый Казенный пер., д. 5а, 105064, Москва

Elena V. Otrashevskaia

5A Maly Kazenny Ln., Moscow 105064

e.v.otrashevskaja@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2765-3525КраськоА. Г.KraskoA. G.

Красько Анатолий Геннадиевич, канд. мед. наук

Ул. Филимонова, д. 23, г. Минск, 220114

Anatoli G. Krasko, Cand. Sci. (Med.)

23 Filimonov St., Minsk 220114

kraskoa@gmail.comhttps://orcid.org/0009-0006-7527-6951ЛапутинаА. Г.LaputinaA. G.

Лапутина Армине Германовна

Малый Казенный пер., д. 5а, 105064, Москва

Armine G. Laputina

5A Maly Kazenny Ln., Moscow 105064

minoshat@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9896-5403НетесоваН. А.NetesovaN. A.

Нетесова Нина Александровна, д-р биол. наук

АБК, к. 12а, Кольцово, Новосибирская область, 630559

Nina A. Netesova, Dr. Sci. (Biol.)

12/A ABK, Koltsovo, Novosibirsk Region 630559

ninanet@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9731-3681ИгнатьевГ. М.IgnatyevG. M.

Игнатьев Георгий Михайлович, д-р мед. наук, проф.

Малый Казенный пер., д. 5а, 105064, Москва; ул. Свободы, д. 52, г. Красное Село, Санкт-Петербург, 198320

George M. Ignatyev, Dr. Sci. (Med.), Prof.

5A Maly Kazenny Ln., Moscow 105064; 52 Svobody St., Krasnoe Selo, Saint Petersburg 198320

marburgman@mail.ruФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»РоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Федерального медико-биологического агентстваРоссияCentre for Strategic Planning and Management of Biomedical Health RisksRussian FederationГосударственное учреждение «Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии»БеларусьRepublican Research and Practical Center for Epidemiology and MicrobiologyBelarusФедеральное бюджетное учреждение науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекаРоссияState Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”Russian FederationФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»; Федеральное государственное унитарное предприятие «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентстваРоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera; Saint Petersburg Scientific Research Institute of Vaccines and Serums and the Enterprise for the Production of Bacterial PreparationsRussian Federation202403102024243Разработка диагностических, лечебных и профилактических препаратов противовирусного действия279293Copyright © Оксанич А.С., Самарцева Т.Г., Каа К.В., Отрашевская Е.В., Красько А.Г., Лапутина А.Г., Нетесова Н.А., Игнатьев Г.М., 20242024Оксанич А.С., Самарцева Т.Г., Каа К.В., Отрашевская Е.В., Красько А.Г., Лапутина А.Г., Нетесова Н.А., Игнатьев Г.М.Oksanich A.S., Samartseva T.G., Kaa K.V., Otrashevskaia E.V., Krasko A.G., Laputina A.G., Netesova N.A., Ignatyev G.M.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/584ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ. При разработке и производстве инактивированных вакцин важными критериями безопасности и качества препарата являются полнота инактивации вируса и подлинность вакцинного штамма. Для осуществления контроля качества инактивированных вакцин наиболее перспективным представляется использование молекулярно-биологических методов, отличающихся быстротой получения результата, а также высокими показателями чувствительности и специфичности.

ЦЕЛЬ

ЦЕЛЬ. Разработка методов количественной полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени (кПЦР-РВ) и интегрированной с культуральным методом кПЦР-РВ (ИКМ-кПЦР-РВ) для оценки полноты инактивации вируса Чикунгунья (ЧИКВ), а также метода обратной транскрипции — ПЦР с последующей оценкой полиморфиз ма длин рестрикционных фрагментов (ОТ-ПЦР-ПДРФ) для подтверждения подлинности штамма.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. В исследовании использовали РНК штаммов ЧИКВ (по 3 штамма каждого из четырех генотипов (Asian, ECSA, ECSA-IOL, WAF), которые были предваритель но определены секвенированием), штамм ЧИКВ Nika21 (генотип ECSA), инактивированный β-пропиолактоном штамм Nika21, сорбированный на гидроокиси алюминия антиген Nika21. Применяли методы кПЦР-РВ, ИКМ-кПЦР-РВ, ОТ-ПЦР-ПДРФ, реакцию нейтрализации.

РЕЗУЛЬТАТЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ. Определен фрагмент гена белка nsP1 длиной 218 п.о. между позициями 789 и 1006, который содержит сайты узнавания эндонуклеаз рестрикции, наличие или отсутствие которых составляют различные комбинации и специфичны для каждого из 4 генотипов ЧИКВ. Подобраны праймеры, позволяющие амплифицировать выбран ный участок гена, отработаны условия проведения ОТ-ПЦР-РВ и ОТ-ПЦР-ПДРФ. Продемонстрирована возможность использования метода ИКМ-кПЦР-РВ для подтверждения полноты инактивации вируса. Показана возможность применения метода ОТ-ПЦР-ПДРФ для установления подлинности вакцинного штамма.

ВЫВОДЫ

ВЫВОДЫ. Продемонстрированы преимущества применения метода ИКМ-кПЦР-РВ для оценки полноты инактивации антигена вакцинного штамма и метода ОТ-ПЦР-ПДРФ для подтверждения подлинности вакцинного штамма вируса. Данные методы являются более чувствительными и быстрыми относительно традиционных культуральных методов и могут быть использованы на всех этапах технологического процесса производства инактивированных вакцин.

INTRODUCTION

INTRODUCTION. The completeness of virus inactivation and the identity of the vaccine strain are essential parameters for the safety and quality of inactivated virus vaccines, which should be controlled during vaccine development and production. Currently, the most promising quality control methods for inactivated virus vaccines are molecular genetic methods, which provide rapid results with high sensitivity and specificity.

AIM

AIM. The aim of this study was the development of a real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) method and an integrated cell culture real-time quantitative polymerase chain reaction (ICC-qPCR) method to assess the completeness of virus inactivation, as well as a reverse-transcription polymerase chain reaction assay coupled with restriction fragment length polymorphism analysis (RT-PCR-RFLP) to confirm the identity of the vaccine virus strain.

MATERIALS AND METHODS

MATERIALS AND METHODS. This study used RNA of CHIKV genotypes (three strains of each of the four CHIKV genotypes, including Asian, West African (WAf), and East/Central/South African (ECSA) genotypes, and the Indian Ocean Lineage of the ECSA genotype (ECSA-IOL), which were identified by sequencing prior to analysis). Additionally, the study used the Nika21 CHIKV strain (ECSA genotype), the Nika21 CHIKV strain inactivated with β-propiolactone, and the Nika21 CHIKV strain antigen adsorbed on aluminium hydroxide. The methods used included real-time qPCR, RT-PCR-RFLP, and virus neutralisation.

RESULTS

RESULTS. The study identified a 218 bp fragment of the nsP1 gene (positions 789 to 1006) with restriction endonuclease recognition sites. These sites were present or absent in combinations specific to each of the four CHIKV genotypes. The authors selected primers for amplification of the specified gene region and tested the conditions for real-time qPCR and RT-PCR-RFLP. The study demonstrated the possibility of using the ICC-qPCR method to confirm the completeness of virus inactivation and the RT-PCR-RFLP method to identify the vaccine strain.

CONCLUSIONS

CONCLUSIONS. The study showed the advantages of using the ICC-qPCR method to confirm the completeness of antigen inactivation and the RT-PCR-RFLP method to identify the vaccine strain. These methods are more sensitive and faster than traditional culture methods. ICC-qPCR and RT-PCR-RFLP can be used at any stage of the production process for inactivated vaccines.

полимеразная цепная реакция с обратной транскрипциейметод полиморфизма длин рестрикционных фрагментовинтегрированная с культуральным методом количественная ПЦРвирус Чикунгуньяreverse transcription polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism methodintegrated cell culture quantitative PCRChikungunya virusРабота выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 22-14-00184The study reported in this publication was carried out with the financial support of the Russian Science Foundation under grant No. 22-14-00184ReferencesCorreia Moreira BL, Aparecida Pereira L, Lappas Gimenez AP, Fernandes Inagaki JM, Raboni SM. Development and validation of a real-time RT-PCR assay for the quantification of rabies virus as quality control of inactivated rabies vaccines. J Virol Methods. 2019;270:46–51. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2019.04.025Correia Moreira BL, Aparecida Pereira L, Lappas Gimenez AP, Fernandes Inagaki JM, Raboni SM. Development and validation of a real-time RT-PCR assay for the quantification of rabies virus as quality control of inactivated rabies vaccines. J Virol Methods. 2019;270:46–51. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2019.04.025Correia Moreira BL, Gimenez APL, Inagaki JMF, Raboni SM. Inactivated rabies vaccines: Standardization of an in vitro assay for residual viable virus detection. PLoS Negl Trop Dis. 2020;14(3):e0008142. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0008142Correia Moreira BL, Gimenez APL, Inagaki JMF, Raboni SM. Inactivated rabies vaccines: Standardization of an in vitro assay for residual viable virus detection. PLoS Negl Trop Dis. 2020;14(3):e0008142. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0008142Zhou J, Ji G, Wen JN, Li J, Sheng W, Guo ZQ, et al. Effective inactivatian test of inactivated hepatitis A vaccine using integrated cell culture/strand-specific reverse transcriptase-poly-merase chain reaction. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. 2008;22(6):488–91 (In Chinese). PMID: 19544655Zhou J, Ji G, Wen JN, Li J, Sheng W, Guo ZQ, et al. Effective inactivatian test of inactivated hepatitis A vaccine using integrated cell culture/strand-specific reverse transcriptase-poly-merase chain reaction. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. 2008;22(6):488–91 (In Chinese). PMID: 19544655Sundaram AK, Ewing D, Liang Z, Jani V, Cheng Y, Sun P, et al. Immunogenicity of adjuvanted psoralen-inactivated SARS-CoV-2 vaccines and SARS-CoV-2 spike protein DNA vaccines in BALB/c mice. Pathogens. 2021;10(5):626. https://doi.org/10.3390/pathogens10050626Sundaram AK, Ewing D, Liang Z, Jani V, Cheng Y, Sun P, et al. Immunogenicity of adjuvanted psoralen-inactivated SARS-CoV-2 vaccines and SARS-CoV-2 spike protein DNA vaccines in BALB/c mice. Pathogens. 2021;10(5):626. https://doi.org/10.3390/pathogens10050626Li D, Gu AZ, Yang W, He M, Hu X-H, Shi H-C. An integrated cell culture and reverse transcription quantitative PCR assay for detection of infectious rotaviruses in environmental waters. J Microbiol Methods. 2010;82(1):59–63. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2010.04.003Li D, Gu AZ, Yang W, He M, Hu X-H, Shi H-C. An integrated cell culture and reverse transcription quantitative PCR assay for detection of infectious rotaviruses in environmental waters. J Microbiol Methods. 2010;82(1):59–63. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2010.04.003Gallagher EM, Margolin AB. Development of an integrated cell culture—real-time RT-PCR assay for detection of reovirus in biosolids. J Virol Methods. 2007;139(2):195–202. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2006.10.001Gallagher EM, Margolin AB. Development of an integrated cell culture—real-time RT-PCR assay for detection of reovirus in biosolids. J Virol Methods. 2007;139(2):195–202. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2006.10.001Reynolds KA. Integrated cell culture/PCR for detection of enteric viruses in environmental samples. Methods Mol Biol. 2004;268:69–78. https://doi.org/10.1385/1-59259-766-1:069Reynolds KA. Integrated cell culture/PCR for detection of enteric viruses in environmental samples. Methods Mol Biol. 2004;268:69–78. https://doi.org/10.1385/1-59259-766-1:069Huang Y, Xiao S, Song D, Yuan Z. Efficacy of disinfectants for inactivation of Ebola virus in suspension by integrated cell culture coupled with real-time RT-PCR. J Hosp Infect. 2022;125:67–74. https://doi.org/10.1016/j.jhin.2022.04.008Huang Y, Xiao S, Song D, Yuan Z. Efficacy of disinfectants for inactivation of Ebola virus in suspension by integrated cell culture coupled with real-time RT-PCR. J Hosp Infect. 2022;125:67–74. https://doi.org/10.1016/j.jhin.2022.04.008Kargar M, Sadeghipour S, Nategh R. Environmental surveillance of non-polio enteroviruses in Iran. Virol J. 2009;6:149. https://doi.org/10.1186/1743-422X-6-149Kargar M, Sadeghipour S, Nategh R. Environmental surveillance of non-polio enteroviruses in Iran. Virol J. 2009;6:149. https://doi.org/10.1186/1743-422X-6-149Guo X, Wang S, Zhao CL, Li JW, Zhong JY. An integrated cell absorption process and quantitative PCR assay for the detection of the infectious virus in water. Sci Total Environ. 2018;635:964–71. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2018.04.223Guo X, Wang S, Zhao CL, Li JW, Zhong JY. An integrated cell absorption process and quantitative PCR assay for the detection of the infectious virus in water. Sci Total Environ. 2018;635:964–71. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2018.04.223Blackmer F, Reynolds KA, Gerba CP, Pepper IL. Use of integrated cell culture-PCR to evaluate the effectiveness of poliovirus inactivation by chlorine. Appl Environ Microbiol. 2000;66(5):2267–8. https://doi.org/10.1128/aem.66.5.2267-2268.2000Blackmer F, Reynolds KA, Gerba CP, Pepper IL. Use of integrated cell culture-PCR to evaluate the effectiveness of poliovirus inactivation by chlorine. Appl Environ Microbiol. 2000;66(5):2267–8. https://doi.org/10.1128/aem.66.5.2267-2268.2000Игнатьев ГМ, Отрашевская ЕВ, Суханова ЛЛ, Сидоренко ЕС, Нетесова НА. Молекулярно-генетическое исследование штамма RA-27/3, используемого для производства вакцины против краснухи. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019;(4):38–46. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-4-38-46Ignatev GM, Atrashevskaya EV, Suchanova LL, Sidorenko ES, Netesova NA. Molecular-genetic study of the RA-27/3 strain used for production of rubella vaccine. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2019;(4):38–46 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-4-38-46Игнатьев ГМ, Отрашевская ЕВ, Суханова ЛЛ, Сидоренко ЕС, Нетесова НА. Молекулярно-генетическое исследование штамма Ленинград-16, используемого для производства вакцины кори. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2020;(2):182–9. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-2-182-189Ignatyev GM, Atrasheuskaya EV, Sukhanova LL, Sidorenko ES, Netesova NA. Molecular genetic analysis of the strain Leningrad-16 used for the production of measles vaccine. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2020;(2):182–9 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-2-182-189Loparev VN, Argaw T, Krause PR, Takayama M, Schmid DS. Improved identification and differentiation of varicellazoster virus (VZV) wild-type strains and an attenuated varicella vaccine strain using a VZV open reading frame 62-based PCR. J Clin Microbiol. 2000;38(9):3156–60. https://doi.org/10.1128/jcm.38.9.3156-3160.2000Loparev VN, Argaw T, Krause PR, Takayama M, Schmid DS. Improved identification and differentiation of varicellazoster virus (VZV) wild-type strains and an attenuated varicella vaccine strain using a VZV open reading frame 62-based PCR. J Clin Microbiol. 2000;38(9):3156–60. https://doi.org/10.1128/jcm.38.9.3156-3160.2000Кулак МВ, Белавин ПА, Нетесова НА, Юнасова ТН, Голикова ЛН, Бектемиров ТА, Игнатьев ГМ. Дифференциация вакцинного штамма Л-3 от других штаммов вируса паротита методом ОТ-ПЦР. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2008;(4):7–10. EDN: SATPMFKulak MV, Belavin PA, Netesova NA, Yunasova TN, Golikova LN, Bektemirov TA, Ignatyev GM. Differentiation of the vaccine strain L-3 from other strains of the mumps virus by RT-PCR. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2008;(4):7–10 (In Russ.). EDN: SATPMFИгнатьев ГМ, Оксанич АС, Антонова ЛП, Самарцева ТГ, Мосолова СВ, Мефед КМ и др. Молекулярно-генетическое исследование стабильности и подтверждение подлинности штамма Внуково-32, применяемого для производства вакцины антирабической культуральной концентрированной очищенной инактивированной сухой. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2020;20(2):107–15. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-2-107-115Ignatyev GM, Oksanich AS, Antonova LP, Samartseva TG, Mosolova SV, Mefed KM, et al. Molecular genetic testing of stability and identification of Vnukovo-32 strain used for production of the cultural concentrated purified inactivated dry rabies vaccine. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2020;20(2):107–15 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2020-20-2-107-115Отрашевская ЕВ, Трухин ВП, Меркулов ВА, Игнатьев ГМ. Прогресс в разработке вакцин для профилактики лихорадки Чикунгунья и перспективы появления на рынке. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023;23(1):42–64. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-1-42-64Otrasheuskaja ЕV, Trukhin VP, Merkulov VA, Ignatyev GM. Chikungunya vaccines: advances in the development and prospects for marketing approval. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2023;23(1):42–64 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-1-42-64Schrauf S, Tschismarov R, Tauber E, Ramsauer K. Current efforts in the development of vaccines for the prevention of Zika and Chikungunya virus infections. Front Immunol. 2020:11:592–612. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.00592Schrauf S, Tschismarov R, Tauber E, Ramsauer K. Current efforts in the development of vaccines for the prevention of Zika and Chikungunya virus infections. Front Immunol. 2020:11:592–612. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.00592Tiwari M, Parida M, Santhosh SR, Khan M, Dash PK, Rao PV. Assessment of immunogenic potential of Vero adapted formalin inactivated vaccine derived from novel ECSA genotype of Chikungunya virus. Vaccine. 2009:27(18):2513–22. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2009.02.062Tiwari M, Parida M, Santhosh SR, Khan M, Dash PK, Rao PV. Assessment of immunogenic potential of Vero adapted formalin inactivated vaccine derived from novel ECSA genotype of Chikungunya virus. Vaccine. 2009:27(18):2513–22. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2009.02.062Kumar M, Sudeep AB, Arankalle VA. Evaluation of recombinant E2 protein-based and whole-virus inactivated candidate vaccines against Сhikungunya virus. Vaccine. 2012:30(43):6142–9. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2012.07.072Kumar M, Sudeep AB, Arankalle VA. Evaluation of recombinant E2 protein-based and whole-virus inactivated candidate vaccines against Сhikungunya virus. Vaccine. 2012:30(43):6142–9. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2012.07.072Отрашевская ЕВ, Казакова ЕВ, Жиренкина ЕН, Трухин ВП, Игнатьев ГМ. Ретроспективный серологический анализ распространения флавивирусных лихорадок и лихорадки Чикунгунья в Никарагуа — авидность специфических антител как инструмент дифференциальной диагностики. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2022;99(2):215–24. https://doi.org/10.36233/0372-9311-196Atrasheuskaya EV, Kazakova EV, Zhirenkina EN, Trukhin VP, Ignatyev GM. The study of flaviviruses and Chikungunya virus seroprevalence in Nicaragua—virus-specific anti body avidity assay as a tool for differential diagnosis. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2022;99(2):215–24 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0372-9311-196Лукин ЕП, Черникова НК. Продолжительность гуморального поствакцинального и постинфекционного иммунитета к вирусу венесуэльского лошадиного энцефаломиелита. Вопросы вирусологии. 1993;(2):71–4.Lukin EP, Chernikova NK. Duration of humoral postvaccinal and postinfectious immunity to Venezuelan equine encephalomyelitis virus. Problems of Virology. 1993;(2):71–4 (In Russ.).Каа КВ, Игнатьев ГМ, Синюгина АА, Ишмухаметов АА. Чувствительность клеточных линий к вирусу Чикунгунья и подбор метода наработки вирусного материала в промышленных объемах. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2023;23(1):11–20. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-1-111-120Kaa KV, Ignatyev GM, Sinyugina AA, Ishmukhametov AA. Susceptibility of various cell lines to the Chikungunya virus and method selection for commercial-scale production of viral material. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2023;23(1):11–20 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2023-23-1-111-120Игнатьев ГМ, Каа КВ, Антонова ЛП, Отрашевская ЕВ, Ишмухаметов АА. Иммуногенныe свойства препарата, содержащего инактивированный β-пропиолактоном антиген вируса Чикунгунья. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2021;(5):519–27. https://doi.org/10.36233/0372-9311-159Ignatyev GM, Kaa KV, Antonova LP, Atrasheuskaya EV, Ishmukhametov AA. Immunogenic properties of the preparation containing the Chikungunya virus antigen inactivated by β-propiolactone. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2021;(5):519–27 (In Russ.). https://doi.org/10.36233/0372-9311-159Оксанич АС, Красько АГ, Самарцева ТГ, Гасич ЕЛ, Игнатьев ГМ. Применение количественного иммуноферментного анализа для определения концентрации S-антигена в цельновирионных инактивированных адсорбированных коронавирусных вакцинах. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2022;22(4):403–15. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2022-22-4-405-413Oksanich AS, Krasko AG, Samartseva TG, Gasich EL, Ignatyev GM. The use of quantitative enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of S-antigen concentration in whole-virion inactivated adsorbed coronavirus vaccines. Biological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2022;22(4):403–15 (In Russ.). https://doi.org/10.30895/2221-996X-2022-22-4-405-413Frolov I, Frolova EI. Molecular virology of Chikungunya virus. Curr Top Microbiol Immunol. 2022;435:1–31. https://doi.org/10.1007/82_2018_146Frolov I, Frolova EI. Molecular virology of Chikungunya virus. Curr Top Microbiol Immunol. 2022;435:1–31. https://doi.org/10.1007/82_2018_146Ryu H, Schrantz KA, Brinkman NE, Boczek LA. Applicability of integrated cell culture reverse transcriptase quantitative PCR (ICC-RTqPCR) for the simultaneous detection of the four human enteric enterovirus species in disinfection studies. J Virol Methods. 2018;258:35–40. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2018.05.008Ryu H, Schrantz KA, Brinkman NE, Boczek LA. Applicability of integrated cell culture reverse transcriptase quantitative PCR (ICC-RTqPCR) for the simultaneous detection of the four human enteric enterovirus species in disinfection studies. J Virol Methods. 2018;258:35–40. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2018.05.008Ryu H, Cashdollar JL, Fout G, Schrantz KA, Hayes S. Applicability of integrated cell culture quantitative PCR (ICC-qPCR) for the detection of infectious adenovirus type 2 in UV disinfection studies. J Environ Sci Health A Tox Hazard Subst Environ Eng. 2015;50(8):777–87. https://doi.org/10.1080/10934529.2015.1019795Ryu H, Cashdollar JL, Fout G, Schrantz KA, Hayes S. Applicability of integrated cell culture quantitative PCR (ICC-qPCR) for the detection of infectious adenovirus type 2 in UV disinfection studies. J Environ Sci Health A Tox Hazard Subst Environ Eng. 2015;50(8):777–87. https://doi.org/10.1080/10934529.2015.1019795Paessler S, Weaver SC. Vaccines for Venezuelan equine encephalitis. Vaccine. 2009;27 Suppl 4:D80–5. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2009.07.095Paessler S, Weaver SC. Vaccines for Venezuelan equine encephalitis. Vaccine. 2009;27 Suppl 4:D80–5. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2009.07.095Ryder S, Perez M, Avila J, Briceno A. Deteccion de anticuerpos al virus de la encephalitis equine venezolana en equidos de los Distritos Mara y Paez de la Guajira Venezolana. 1984. I. Evaluacion prevacuna. Investigacion Clinica. 2013;28(4).Ryder S, Perez M, Avila J, Briceno A. Deteccion de anticuerpos al virus de la encephalitis equine venezolana en equidos de los Distritos Mara y Paez de la Guajira Venezolana. 1984. I. Evaluacion prevacuna. Investigacion Clinica. 2013;28(4).Kim HR, Kang MS, Kim MJ, Lee HS, Kwon YK. Restriction fragment length polymorphism analysis of multiple genome regions of Korean isolates of infectious laryngotracheitis virus collected from chickens. Poult Sci. 2013;(8):2053–8. https://doi.org/10.3382/ps.2013-03134Kim HR, Kang MS, Kim MJ, Lee HS, Kwon YK. Restriction fragment length polymorphism analysis of multiple genome regions of Korean isolates of infectious laryngotracheitis virus collected from chickens. Poult Sci. 2013;(8):2053–8. https://doi.org/10.3382/ps.2013-03134

The authors declare that there are no conflicts of interest present.