biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-52Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESРазработка метода определения биологической активности препаратов эритропоэтина in vitroThe development of a method for determining the biological activity of erythropoietin preparations in vitroГавриловаН. А.GavrilovaN. A.

Аналитик 1-й категории Управления экспертизы противобактериальных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП, канд. биол. наук

Analyst of Office of expertise of antibacterial medical immunobiological preparations of Center for examination and control of medical immunobiological preparations. Candidate of Biological Sciences

Gavrilova@expmed.ruЧерепушкинС. А.CherepushkinS. A.

Научный сотрудник отдела медицинской биотехнологии

Researcher of Department of medical biotechnology

noemail@neicon.ruРыкалинаН. В.RykalinaN. V.

Научный сотрудник лаборатории иммунологии

Researcher of Laboratory of immunology

noemail@neicon.ruОбуховЮ. И.ObukhovYu. I.

Начальник Управления экспертизы противобактериальных МИБП Центра экспертизы и контроля МИБП

Head of Office of expertise of antibacterial medical immunobiological preparations of Center of expertise and control of medical immunobiological preparations

noemail@neicon.ruНаучный центр экспертизы средств медицинского примененияРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationГосударственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмовРоссияState Research Institute of Selection of Industrial MicroorganismsRussian Federation201620022018162120124Copyright © Гаврилова Н.А., Черепушкин С.А., Рыкалина Н.В., Обухов Ю.И., 20182018Гаврилова Н.А., Черепушкин С.А., Рыкалина Н.В., Обухов Ю.И.Gavrilova N.A., Cherepushkin S.A., Rykalina N.V., Obukhov Y.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/52

Разработан метод оценки биологической активности препаратов эритропоэтина in vitro на культуре чувствительных клеток TF-1. Исследованы особенности измерения и расчета биологической активности эритропоэтинов с различным уровнем гликозилирования в тестах in vivo и in vitro. Диапазоны линейного ответа клеточной линии на эритропоэтин и его гипергликозилированный аналог отличались и составляли (0,39-0,56 нг/мл) и (3,1-12,5 нг/мл) соответственно. Проведенный анализ полученных результатов показывает возможность применения клеточного теста для сопоставления и количественной оценки активности аналогов эритропоэтина в международных единицах стандарта биологической активности (МЕ), принятых для эритропоэтина.

The method for the assessment of biological activity of erythropoietin preparations in vitro on TF-1 sensitive cells culture has been developed. The special characteristics of measurements and calculations of the biological activity of erythropoietin with different levels of glycosylation in vivo and in vitro. Linear response ranges for cell lines to erythropoietin and its hyperglycosylated analogue differ and make (0.39-0.56 ng/ml) and (3.1-12.5 ng/ml), respectively. The results have shown the possibility of using cellular test for comparing and assaying the activity of erythropoietin analogues in standard international units of biological activity (IU) set for erythropoietin.

биологическая активностьэритропоэтиндарбэпоэтинклеточная линия TF-1пролиферативный ответbiological activityerythropoietindarbepoetincell line TF-1proliferative responseReferencesBunn HF. New agents that stimulate erythropoesis. Blood 2007; 109(3): 868-3.Bunn HF. New agents that stimulate erythropoesis. Blood 2007; 109(3): 868–3.Macdougall IC, Eckardt K-U. Novel strategies for stimulating erythropoiesis and potential treatments for anaemia. Lancet 2006; 368(9539): 947-53.Macdougall IC, Eckardt K-U. Novel strategies for stimulating erythropoiesis and potential treatments for anaemia. Lancet 2006; 368(9539): 947–53. 3. Cossar JD, Lawrence M, Donaldi S. Pegylated erythpoietic compounds. WO2004009627; 2004.Cossar JD, Lawrence M, Donaldi S. Pegylated erythpoietic compounds. WO2004009627; 2004.Egrie JC, Dwyer E, Browne JK, Hitz A, Lykos MA. Darbepoetin alfa has a longer circulating half-life and greater in vivo potency than recombinant erythropoietin. Exp Hematol. 2003; 31(4): 290–9.Egrie JC, Dwyer E, Browne JK, Hitz A, Lykos MA. Darbepoetin alfa has a longer circulating half-life and greater in vivo potency than recombinant erythropoietin. Exp Hematol. 2003; 31(4): 290-9.Joung CH, Shin JY, Koo JK, Linn JJ, Wang JS, Lee SJ, et al. Production and characterization of long-acting recombinant human albumin-EPO fusion protein expressed in CHO cell. Protein Expr Purif. 2009; 68(2): 137–45.Joung CH, Shin JY, Koo JK, Linn JJ, Wang JS, Lee SJ, et al. Production and characterization of long-acting recombinant human albumin-EPO fusion protein expressed in CHO cell. Protein Expr Purif. 2009; 68(2): 137-45.Brines M, Grasso G, Fiordaliso F, Sfacteria A, Ghezzi P, Fratelli M, et al. Erythropoietin mediates tissue protection through an erythropoietin and common beta-subunit heteroreceptor. Proc Natl Acad Sci USA 2004; 101(41): 14907–12.Brines M, Grasso G, Fiordaliso F, Sfacteria A, Ghezzi P, Fratelli M, et al. Erythropoietin mediates tissue protection through an erythropoietin and common beta-subunit heteroreceptor. Proc Natl Acad Sci USA 2004; 101(41): 14907-12.European Pharmacopoeia 8.0/8.4. «Erythropoietin Concentrated Solution».European Pharmacopoeia 8.0 /8.4. «Erythropoietin Concentrated Solution».List of European Pharmacopoeia Reference Standards. Available from: http://www.edqm.eu/en/ph-eur-reference-standards-orders-catalogue.List of European Pharmacopoeia Reference Standards. Available from: http://www.edqm.eu/en/ph-eur-reference-standards-orders-catalogue.Yakovlev AK, Gayderova LA, Alpatova NA, Lobanova TN, Batuashvili TA, Simutenko LV, et al. The stages in standardizing erythropoietin preparations. Biopreparaty 2015; (4): 17–20 (in Russian).Яковлев АК, Гайдерова ЛА, Алпатова НА, Лобанова ТН, Батуашвили ТА, Симутенко ЛВ. и др. Этапы стандартизации препаратов эритропоэтинов. Биопрепараты 2015; (4): 17-20.Kitamura T, Tange T, Terasawa T, Chiba S, Kuwaki T, Miyagawa K, et al. Establishment and characterization of a unique human cell line that proliferates dependently on GM-CSF, IL-3, or erythropoietin. J Cell Physiol. 1989; 140(2): 323–34.Kitamura T, Tange T, Terasawa T, Chiba S, Kuwaki T, Miyagawa K, et al. Establishment and characterization of a unique human cell line that proliferates dependently on GM-CSF, IL-3, or erythropoietin. J Cell Physiol. 1989; 140(2): 323-34.Elliott S, Egrie J, Browne J, Lorenzini T, Busse L, Rogers N, et al. Control of rHuEPO biological activity: the role of carbohydrate. Exp Hematol. 2004; 32(12): 1146–55.Elliott S, Egrie J, Browne J, Lorenzini T, Busse L, Rogers N, et al. Control of rHuEPO biological activity: the role of carbohydrate. Exp Hematol. 2004; 32(12): 1146-55.Gavrilova NA, Cheremnykh AM, Bobreneva RA, Askerova EV, Kalinina TA, Bulushova NV, et al. The haemopoietic activity and pharmacokinetics of EPO-Fc, EPO-Fcneo and Alb-EPO fused proteins, derivatives of human erythropoietin. Biotehnologiya 2012; (5): 38–49 (in Russian).Гаврилова НА, Черемных АМ, Бобренёва РА, Аскерова ЕВ, Калинина ТИ, Булушова НВ и др. Гемопоэтическая активность и фармакокинетика гибридных белков EPO-Fc, EPO-Fcneo и Alb-EPO - производных эритропоэтина человека. Биотехнология 2012; (5): 38-49.Cheremnykh AM, Askerova EV, Bobreneva RA, Gavrilova NA, Kalinina TA, Jurin VL. Hybrid protein based on recombinant human erythropoietin, having prolonged action (versions), and method of its production. Patent RF, ¹ 2515914; 2013 (in Russian).Черемных АМ, Аскерова ЕВ, Бобренёва РА, Гаврилова НА, Калинина ТИ. Гибридный белок на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием (варианты), и способ его получения. Патент Российской Федерации, № 2515914; 2013.Черемных АМ, Аскерова ЕВ, Бобренёва РА, Гаврилова НА, Калинина ТИ. Гибридный белок на основе рекомбинантного эритропоэтина человека, обладающий пролонгированным действием (варианты), и способ его получения. Патент Российской Федерации, № 2515914; 2013.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.