Стронин Олег Владимирович, канд. мед. наук
Scopus ID: 23475557900
ул. Ивановского, д. 8, Томск, 634050
Oleg V. Stronin, Cand. Sci. (Med.)
Scopus ID: 23475557900
8, Ivanovsky St., Tomsk 634050
Епанчинцев Антон Александрович
Scopus ID: 57195772463
ул. Ивановского, д. 8, Томск, 634050
Anton A. Epanchintsev
Scopus ID: 57195772463
8, Ivanovsky St., Tomsk 634050
Колтунов Александр Анатольевич, канд. мед. наук
Scopus ID: 6603661664
ул. Ивановского, д. 8, Томск, 634050
Aleksandr A. Koltunov, Cand. Sci. (Med.)
Scopus ID: 6603661664
8, Ivanovsky St., Tomsk 634050
Актуальность. Клещевой энцефалит — один из наиболее актуальных для здоровья населения России антропозооноз, контроль над которым требует широкого охвата вакцинопрофилактикой. Масштабная вакцинация невозможна без разработки новых вакцин, например с применением перевиваемой линии клеток Vero, обладающих улучшенным профилем безопасности и эффективности.
Цель. Расширенное изучение ключевых показателей качества новой вакцины «ВероКСЭН» против клещевого энцефалита, полученной с использованием перевиваемой линии клеток Vero.
Материалы и методы. В технологии создания вакцины реализованы современные подходы: накопление производственного штамма вируса клещевого энцефалита № 205 (дальневосточный субтип) в клетках перевиваемой линии Vero; использование для заключительной тонкой очистки вирусного антигена эксклюзионной хроматографии на полимерных сорбентах; введение дополнительных методов контроля. Вакцину «ВероКСЭН» получали способом, описанным в патенте на изобретение № 2678431. Контроль готового продукта проводили в соответствии с методиками, описанными в Государственной фармакопее Российской Федерации. Для лабораторного изучения вакцины и полупродуктов на мышах линии Balb/с были разработаны и внедрены оригинальные новые методы контроля, а также применялись: электрофорез в полиакриламидном геле, иммуноферментный анализ, иммуноблот с суммарными антителами против вируса клещевого энцефалита и моноклональными антителами против гликопротеина E, метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией, высокоэффективная жидкостная хроматография. При расширенном лабораторном исследовании протективной активности использовали тест-штаммы субтипов «Абсеттаров» (западный), «Софьин» (дальневосточный) и «Корзухин» (сибирский). Оценку инфекционной активности вируса клещевого энцефалита проводили при помощи фармакопейного метода титрования на беспородных мышах. Результаты исследований оценивали при помощи статистических методов анализа с вычислением среднего арифметического и среднеквадратичного отклонения.
Результаты. Изучены ключевые показатели качества новой вакцины против клещевого энцефалита «ВероКСЭН» и ее полупродуктов. Показано, что выбранный режим инактивации снижает инфекционную активность вирусного сбора до недетектируемого уровня через 24 ч, при этом антигенная активность сохраняется на уровне около 100% от исходного значения. Этапы тонкой очистки, а также разработанные оригинальные методики и технологии позволили получить цельновирионную фракцию с чистотой до 98,2% и удалить технологические примеси (ДНК клеток-продуцентов, бычий сывороточный альбумин, формальдегид, бактериальные эндотоксины) до уровней, соответствующих нормативным требованиям. Изучение стабильности вакцины на сроке хранения до 36 мес. подтвердило ее соответствие нормативным показателям.
Выводы. Новая вакцина обладает высокой специфической активностью в отношении вируса клещевого энцефалита для штаммов «Абсеттаров», «Софьин» и «Корзухин»: минимальная иммунизирующая доза (МИД50) составила 0,007, 0,00125 и 0,00093 мл соответственно.
Scientific relevance. Tick-borne encephalitis is one of the most significant anthropozoonoses for public health in the Russian Federation. Wide vaccination coverage is required to control this zoonotic infection. However, large-scale immunisation is not feasible without developing novel vaccines with improved safety and efficacy profiles, such as vaccines based on the continuous Vero cell line.
Aim. This extended study aimed to investigate the key quality attributes of VeroKSEN, a new tick-borne encephalitis vaccine that was obtained using Vero cells.
Materials and methods. The authors implemented current approaches to vaccine development, including propagation of tick-borne encephalitis strain 205 (Far Eastern subtype) in Vero cells, fine purification of the viral antigen by size-exclusion chromatography on polymeric resins, and introduction of additional quality control methods. For VeroKSEN production, the authors used the method protected by utility patent No. 2678431. Quality control of the finished product was performed according to the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. The laboratory study of the vaccine and its intermediates in Balb/с mice used novel control methods developed by the authors. Additional methods included polyacrylamide gel electrophoresis, enzyme immunoassay, immunoblotting with total antibodies to tick-borne encephalitis virus and monoclonal antibodies to glycoprotein E, reverse transcription–polymerase chain reaction, and high-performance liquid chromatography. The extended potency study used test strains of different subtypes, including Absettarov (Western), Sofjin (Far Eastern), and Korzukhin (Siberian). The authors studied the infectious activity of tick-borne encephalitis virus in outbred mice using the pharmacopoeial titration method. Statistical analysis of the study results involved calculating the arithmetic mean and the root-mean-square deviation.
Results. The authors studied the key quality attributes of VeroKSEN and its intermediates. Selected inactivation conditions reduced the infectious activity of the viral harvest to an undetectable level within 24 h, while its antigenic activity remained approximately 100% of the baseline. The fine purification stages and the methods and techniques developed by the authors provided a whole-virion fraction with a purity of up to 98.2% and removed process-related impurities (residual host-cell DNA, bovine serum albumin, formaldehyde, and bacterial endotoxins) to the levels required by national legislation. The stability study demonstrated that the vaccine met the requirements for up to 36 months.
Conclusions. The study showed the high potency of the new vaccine in terms of protection against the Western, Siberian, and Far Eastern subtypes of tick-borne encephalitis, with minimum immunising doses (MID50) of 0.007, 0.00125, and 0.00093 mL, respectively.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.