biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2023-23-3-1-463-473biopreparat-498Research ArticleТЕМА НОМЕРА: РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВISSUE TOPIC: DEVELOPMENT AND IMPROVEMENT OF RUSSIAN BIOLOGICALSК вопросу оценки вирусной безопасности индивидуальных единиц субстанции «Плазма человека для фракционирования» методом амплификации нуклеиновых кислотOn assessing the viral safety of individual units of the substance "Human plasma for fractionation" by nucleic acid amplificationhttps://orcid.org/0000-0003-2737-948XЭльбертЕ. В.ElbertE. V.

Эльберт Елизавета Викторовна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Elizaveta V. Elbert, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Elbert@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2617-1479НожкоВ. В.NozhkoV. V.

Ножко Виталина Витальевна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Vitalina V. Nozhko

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

MichailovaVV@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8698-2890ВолковаР. А.VolkovaR. A.

Волкова Рауза Асхатовна, д-р биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Rauza A. Volkova, Dr. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Volkova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5838-2481МовсесянцА. А.MovsesyantsA. A.

Мовсесянц Арташес Авакович, д-р мед. наук, проф.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Artashes A. Movsesyants, Dr. Sci. (Med.), Professor

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Movsesyants@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4891-973XМеркуловВ. А.MerkulovV. A.

Меркулов Вадим Анатольевич, д-р мед. наук, проф.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Vadim A. Merkulov, Dr. Sci. (Med.), Professor

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

merkulov@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8353-7863КосенкоВ. В.KosenkoV. V.

Косенко Валентина Владимировна, канд. фарм. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Valentina V. Kosenko, Cand. Sci. (Pharm.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

kosenko@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation202313092023233-1Разработка и совершенствование отечественных биологических лекарственных средств463473Copyright © Эльберт Е.В., Ножко В.В., Волкова Р.А., Мовсесянц А.А., Меркулов В.А., Косенко В.В., 20232023Эльберт Е.В., Ножко В.В., Волкова Р.А., Мовсесянц А.А., Меркулов В.А., Косенко В.В.Elbert E.V., Nozhko V.V., Volkova R.A., Movsesyants A.A., Merkulov V.A., Kosenko V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/498Актуальность

Актуальность. Отсутствие гемотрансмиссивных вирусов в лекарственных препаратах, полученных из плазмы крови человека, должно быть обеспечено контролем исходного сырья и технологией производства.

Цель

Цель. Изучение критериев пригодности системы методики при оценке вирусной безопасности индивидуальных единиц субстанции «Плазма человека  для фракционирования» в отношении содержания нуклеиновых кислот гемотрансмиссивных вирусов с учетом требований Европейской фармакопеи.

Материалы и методы

Материалы и методы. Индивидуальные единицы субстанции «Плазма человека для фракционирования» (далее — плазма); международные стандартные образцы (МСО) РНК  вируса иммунодефицита человека, вирусов  гепатитов А  и  С  (ВГА  и  ВГС),  ДНК  вируса  гепатита В (ВГВ) и парвовируса B19; наборы реагентов для выявления нуклеиновых кислот указанных вирусов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Результаты

Результаты. В исследованных образцах плазмы не выявлена РНК  ВГС;  ДНК  парвовируса В19 обнаружена в одном образце плазмы из восьми, концентрация не превышала 104 МЕ/мл. Использованные наборы реагентов в трех испытаниях соответствующих МСО позволили выявить РНК ВГС в концентрации  102 МЕ/мл,  ДНК  парвовируса  В19  (генотип М1) — 104 МЕ/мл. Результаты дополнительных испытаний двух образцов плазмы с учетом требований Европейской фармакопеи при определении РНК ВГС и ДНК парвовируса В19 показали, что новая серия набора реагентов выявляла 102 МЕ/мл МСО РНК ВГС только в одном из трех испытаний, что не соответствует заявленной чувствительности набора реагентов. В одном из двух образцов плазмы РНК ВГС не была обнаружена ни в одном испытании с добавлением МСО РНК ВГС до концентрации 102 и 103 МЕ/мл, возможно, из-за ингибирующих свойств плазмы. В отношении ДНК парвовируса В19 чувствительность наборов реагентов соответствовала заявленной, ингибирующие свойства исследованных образцов плазмы не выявлены.

Выводы

Выводы. При применении метода ПЦР для оценки вирусной безопасности плазмы, предназначенной для производства препаратов крови, целесообразно использование контрольных образцов, охарактеризованных в МЕ/мл. Для установления критериев пригодности системы методики с их применением необходима разработка соответствующих фармакопейных стандартных образцов.

Scientific relevance

Scientific relevance. The absence of blood-borne viruses in human plasma-derived medicinal products must be ensured by the control of raw materials and the manufacturing process.

Aim

Aim. This study aimed to analyse system suitability criteria for analytical procedures to assess the viral safety of individual units of the substance "Human plasma for fractionation" in terms of the content of nucleic acids of blood-borne viruses, considering the requirements of the European Pharmacopoeia.

Materials and methods

Materials and methods. The authors analysed individual units of the substance "Human plasma for fractionation" (hereinafter, plasma). The study used the International Standards (ISs) for human immunodeficiency virus RNA, hepatitis A virus (HAV) RNA, hepatitis C virus (HCV) RNA, hepatitis B virus (HBV) DNA, and parvovirus B19 DNA, as well as nucleic acid detection kits for these viruses based on polymerase chain reaction (PCR).

Results

Results. HCV RNA was not detected in any of the eight plasma samples studied, and parvovirus B19  DNA was detected in one of the samples at a concentration not exceeding 104  IU/mL.  Three tests with the corresponding ISs showed that the studied reagent kits detected HCV RNA at a concentration of 102 IU/mL and parvovirus B19 DNA (M1 genotype) at a concentration of  104 IU/mL. In additional tests that were conducted in two samples considering the requirements of the European Pharmacopoeia for the detection of HCV RNA and parvovirus B19 DNA, a new batch of reagent kit I detected the HCV RNA IS at a concentration of 102 IU/mL only in one of three replicates, which did not correspond to the claimed sensitivity of the reagent kit. HCV  RNA was not detected in either replicate in one of two plasma samples spiked with the HCV RNA IS at concentrations of 102 and 103 IU/mL, possibly because of plasma inhibitory properties. The sensitivity of the reagent kits to parvovirus B19 DNA corresponded to the label claims; the study did not show any inhibitory properties of the plasma samples.

Conclusions

Conclusions. Polymerase chain reaction testing of the viral safety of plasma intended for manufacturing medicinal products should include control samples calibrated in IU/mL. Further research and appropriate pharmacopoeial reference materials are needed to set system suitability criteria for analytical procedures using such control samples.

вирусная безопасностьплазма человека для фракционированияРНК вируса гепатита СДНК парвовируса В19маркеры гемотрансмиссивных вирусовполимеразная цепная реакцияПЦРнабор реагентовviral safetyhuman plasma for fractionationhepatitis C virus RNAparvovirus B19 DNAmarkers of blood-borne virusespolymerase chain reactionPCRreagent kitРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00052-23-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 121022000147-4).The study reported in this publication was carried out as part of publicly funded research project No. 056-00052-23-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. 121022000147-4).ReferencesПопцов АЛ, Парамонов ИВ, Фетищева НЮ. Верификация методики выявления и количественного определения ДНК парвовируса В19 методом ПЦР в плазме для фракционирования. Вестник Службы крови России. 2014;(1):48–53. EDN: SACMURPoptsov AL, Paramonov IV, Fetishcheva NYu. Verification of the method for calculating and determining the amount of parvovirus B19 DNA by PCR in plasma for fractionation. Bulletin of the Blood Service of Russia. 2014;(1):48–53 (In Russ.).EDN: SACMURФилатова ЕВ, Зубкова НВ, Новикова НА, Голицына ЛН, Кузнецов КВ. Определение маркеров парвовируса В19 в образцах крови доноров. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010;(5):67–70. EDN: VYZOAFFilatova EV, Zubkova NV, Novikova NA, Golitsyna LN, Kuznetsov KV. Determination of parvovirus B19 markers in blood samples from donors. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2010;(5):67–70 (In Russ.).EDN: VYZOAFФилатова ЕВ, Зубкова НВ, Короткова ТВ, Гальговская СА, Анастасиев ВВ. Оценка изменения концентрации ДНК парвовируса В19 при модельном фракционировании плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2011;56(3):10–4. EDN: NWGNUFFilatova EV, Zubkova NV, Korotkova TV, Galgovskaya SA, Anastasiev VV. Implication of changes in the concentration of parvovirus B19 DNA for model fractionation of donor plasma. Hematology and Transfusiology. 2011;56(3):10–4 (In Russ.). EDN: NWGNUFЗубкова НВ, Казьянин АВ, Николаева АМ, Лаптева ЛК, Силин ЕВ. Алгоритм входного контроля вирусной безопасности сырья для производства лечебных препаратов из плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2012;57(1):9–13. EDN: PEVZSLZubkova NV, Kazyanin AV, Nikolaeva AM, Lapteva LK, Silin EV. Development of virus safety control algorithm for the manufacture of donor plasma products. Hematology and Transfusiology. 2012;57(1):9–13 (In Russ.). EDN: PEVZSLЗубкова НВ. Обеспечение инфекционной безопасности препаратов из плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология. 2014;59(2):44–9. EDN: SNTTVTZubkova NV. Infection safety of donor plasma preparations. Hematology and Transfusiology. 2014;59(2):44–9 (In Russ.). EDN: SNTTVTПарамонов ИВ, Попцов АЛ, Кудашева ЭЮ. Алгоритм исследования плазмы для фракционирования на наличие РНК вируса гепатита А. Трансфузиология. 2016;17(4):71–7. EDN: ZHKLUVParamonov IV, Poptsov AL, Kudasheva EYu. Plasma for fractionation essay for RNA of hepatitis a virus algorithm. Transfusiology. 2016;17(4):71–7 (In Russ.). EDN: ZHKLUVОстанкова ЮВ, Хамитова ИВ, Лаврентьева ИН, Семенов АВ. Способ выявления в биологическом материале ДНК вируса парвовирус В19 на основе двухэтапной ПЦР. Патент Российской Федерации № 2753310; 2019. EDN: AOLCQJOstankova YuV, Khamitova IV, Lavrentieva IN, Semenov AV. Method for detecting parvovirus B19 in DNA biological material based on two-step PCR. Patent of the Russian Federation No. 2753310; 2019 (In Russ.). EDN: AOLCQJZou W, Wang Z, Xiong M, Chen AY, Xu P, Ganaie SS, et al. Human parvovirus B19 utilizes cellular DNA replication machinery for viral DNA replication. J Virol. 2018;92(5):e01881-17. https://doi.org/10.1128/jvi.01881-17Zou W, Wang Z, Xiong M, Chen AY, Xu P, Ganaie SS, et al. Human parvovirus B19 utilizes cellular DNA replication machinery for viral DNA replication. J Virol. 2018;92(5):e01881-17. https://doi.org/10.1128/jvi.01881-17Taconet L, Seifner A, Baylis SA, Chudy M, Kreβ J, Mathys E, et al. Detection of hepatitis C virus and parvovirus B19 in human plasma pools by nucleicacid amplification techniques — Trends in results of EDQM proficiency testing studies from 2004 to 2018. Biologicals. 2021;71:9–19. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2021.04.004Taconet L, Seifner A, Baylis SA, Chudy M, Kreβ J, Mathys E, et al. Detection of hepatitis C virus and parvovirus B19 in human plasma pools by nucleicacid amplification techniques — Trends in results of EDQM proficiency testing studies from 2004 to 2018. Biologicals. 2021;71:9–19. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2021.04.004Toppinen M, Norja P, Aaltonen L-M, Wessberg S, Hedman L, Söderlund-Venermo M, Hedman K. A new quantitative PCR for human parvovirus B19 genotypes. J Virol Methods. 2015;218:40–5. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2015.03.006Toppinen M, Norja P, Aaltonen L-M, Wessberg S, Hedman L, Söderlund-Venermo M, Hedman K. A new quantitative PCR for human parvovirus B19 genotypes. J Virol Methods. 2015;218:40–5. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2015.03.006Игнатова ЕН, Туполева ТА, Овчинникова ЕН, Романова ТЮ, Ярославцева НГ, Филатов ФП и др. Влияние современных подходов к лабораторному обследованию доноров крови и ее компонентов на инфицированность вирусом гепатита В у больных с заболеваниями системы крови. Терапевтический архив. 2017;89(11):27–34. EDN: ZWOSNRIgnatova EN, Tupoleva TA, Ovchinnikova EN, Romanova TYu, Yaroslavtseva NG, Filatov FP, et al. Impact of current approaches to laboratory screening of donated blood and its components on hepatitis b virus infection in patients with blood system diseases. Therapeutic Archive. 2017;89(11):27–34 (In Russ.). EDN: ZWOSNRБердюгина ОВ. Выявляемость нуклеиновых кислот вирусов гепатитов В и С методом ПЦР в рутинной клинической практике. В кн.: Молекулярная диагностика. Сборник трудов. Т. 1. М.: Юлис; 2021. С. 15–6. EDN: EZEXKABerdyugina OV. Detection of nucleic acids of hepatitis B and C viruses by PCR in routine clinical practice. In: Molecular Diagnostics. Proceedings. V. 1. Moscow: Yulis; 2021. P. 15–6 (In Russ.). EDN: EZEXKAO’Brien SF, Yi QL, Fan W, Scalia V, Goldman M, Fearon MA. Residual risk of HIV, HCV and HBV in Canada. Transfus Apher Sci. 2017;56(3):389–91. https://doi.org/10.1016/j.transci.2017.03.010O’Brien SF, Yi QL, Fan W, Scalia V, Goldman M, Fearon MA. Residual risk of HIV, HCV and HBV in Canada. Transfus Apher Sci. 2017;56(3):389–91. https://doi.org/10.1016/j.transci.2017.03.010Ha J, Park Y, Kim HS. Evaluation of clinical sensitivity and specificity of hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus, and human immunodeficiency Virus-1 by cobas MPX: Detection of occult HBV infection in an HBV-endemic area. J Clin Virol. 2017;96:60–3. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2017.09.010Ha J, Park Y, Kim HS. Evaluation of clinical sensitivity and specificity of hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus, and human immunodeficiency Virus-1 by cobas MPX: Detection of occult HBV infection in an HBV-endemic area. J Clin Virol. 2017;96:60–3. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2017.09.010

The authors declare that there are no conflicts of interest present.