biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-48Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESПолучение рекомбинантного слитого белка OprF-aTox Pseudomonas aeruginosa, обладающего защитными свойствамиObtaining the recombinant fusion protein OprF-aTox of Pseudomonas aeruginosa whith protective propertiesСолдатенковаА. В.SoldatenkovaA. V.

Научный сотрудник лаборатории протективных антигенов

Researcher of Laboratory of protective antigens

noemail@neicon.ruМихайловаН. А.MihailovaN. A.

Заместитель директора по научной работе, заведующий лабораторией протективных антигенов, д-р мед. наук, профессор

Deputy Director General for the scientific work, head of Laboratory of protective antigens. Doctor of Medical Sciences, professor

noemail@neicon.ruЗиминаЕ. М.ZiminaE. M.

Младший научный сотрудник лаборатории протективных антигенов

Junior researcher of Laboratory of protective antigens

noemail@neicon.ruЛеоноваЕ. И.LeonovaE. I.

Младший научный сотрудник лаборатории протективных антигенов

Junior researcher of Laboratory of protective antigens

noemail@neicon.ruКалошинА. А.KaloshinA. A.

Ведущий научный сотрудник лаборатории протективных антигенов, канд. биол. наук

Leading researcher of Laboratory of protective antigens. Candidate of Biological Sciences

alex-k-1973@yandex.ruНаучно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. МечниковаРоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian Federation20162002201816296100Copyright © Солдатенкова А.В., Михайлова Н.А., Зимина Е.М., Леонова Е.И., Калошин А.А., 20182018Солдатенкова А.В., Михайлова Н.А., Зимина Е.М., Леонова Е.И., Калошин А.А.Soldatenkova A.V., Mihailova N.A., Zimina E.M., Leonova E.I., Kaloshin A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/48

Получен рекомбинантный слитый белок OprF-аТох, который содержал последовательности белка F наружной мембраны (OprF) и дефектной формы экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Этот рекомбинантный белок был синтезирован в клетках Escherichia coli и очищен с помощью никель-сефарозы. Показано, что слитый рекомбинантный белок OprF-аТох при иммунизации обладал защитными свойствами от инфекции, вызываемой вирулентной токсигенной культурой Pseudomonas aeruginosa штамма РА-103.

Into the cells of Escherichia coli (strain BL21(DE3)) two forms of the fusion protein Pseudomonas aeruginosa containing the full length outer membrane protein F (OprF) and nontoxic form of Exotoxin A (without 106 C-terminal amino acid residues) have been synthesized. Two recombinant genes were inserted into plasmid pET28 in different order: oprF-atox and atox-oprF. Only oprF-atox variant allowed to obtain the recombinant protein sufficient for purification by affinity chromatography on Ni-Sepharose. The recombinant fusion protein OprF-aTox showed a high specificity in interaction with the preparations of polyclonal immune rabbit serum to the recombinant OprF, the recombinant nontoxic form of Exotoxin A and the bacterial cells of P. aeruginosa. The purified recombinant fusion protein OprF-aTox after two immunizations protected the mice against toxigenic strain of P. aeruginosa (РА-103) being injected intraperitoneally. The index of efficiency of protective properties of OprF-aTox in the optimal dose (50 µg protein per mouse) was 3.5. This was more efficient than in cases when the recombinant OprF and the recombinant toxoid were injected separately. The indexes of efficiency of protective properties of OprF and the toxoid were 2.1 and 2.0.

Pseudomonas aeruginosaбелок F наружной мембраныэкзотоксин Аанатоксинслитый рекомбинантный белок OprF-аТохиммунизацияPseudomonas aeruginosaouter membrane protein Fexotoxin Atoxoidrecombinant fusion protein OprF-aToximmunizationReferencesРуднов ВА. Антибиотикотерапия госпитальных инфекций вызванных P. aeruginosa. Русский медицинский журнал 2005; 13(7): 485-90.Rudnov VA. Antibiotic treatment of hospital infections caused by P. aeruginosa. Russkiy meditsinskiy zhurnal 2005; 13(7): 485–90 (in Russian).Илюкевич ГВ. Синегнойная инфекция: в новый век со старой проблемой. Медицинские новости 2004; (12): 3-8.Ilyukevich GV. Pseudomonas infection: the new century with an old problem. Meditsinskie novosti 2004; (12): 3–8.Лазарева АВ, Чеботарь ИВ, Крыжановская ОА, Чеботарь ВИ, Маянский НА. Pseudomonas aeruginosa патогенность, патогенез и патология. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия 2015; 17(3): 170-86.Lazareva AV, Tchebotar IV, Kryzhanovskaya OA, Tchebotar VI, Mayanskiy NA. Pseudomonas aeruginosa: Pathogenicity, Pathogenesis and Diseases. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya himioterapiya 2015; 17(3): 170–86.Бобровничий ВИ. Современные подходы к диагностике и лечению синегнойной инфекции у больных муковисцидозом. Медицинский журнал 2012; 1(36): 4-9.Bobrovnichy VI. Modern approaches to diagnosis and treatment of Pseudomonas aeruginosa infection in a patient with cystic fibrosis. Meditsinskiy zhurnal 2012; 1(36): 4–9.Калошин АА, Гатыпова ЕВ, Михайлова НА. Получение рекомбинантных форм белка F наружной мембраны (OprF) Pseudomonas aeruginosa и исследование их иммуногенных свойств. Биотехнология 2011; (2): 74-84.Kaloshin AA, Gatypova EV, Mikhailova NA. Obtaining recombinant forms of outer membrane protein F (OprF) of Pseudomonas aeruginosa and assessment of their immunogenic properties. Biotekhnologiya 2011; (2): 74–84.Калошин АА, Исаков МА, Михайлова НА, Вертиев ЮВ. Получение рекомбинантной атоксической формы экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2012; 154(9): 330-5.Kaloshin AA, Isakov MA, Mikhailova NA, Vertiev YuV. Preparation of Recombinant Atoxic Form of Exotoxin A from Pseudomonas aeruginosa. Bulleten eksperimentalnoy biologii i meditsiny 2012; 154(9): 330–5.Вертиев ЮВ, Бродвинова НС, Мороз АФ. Экзотоксин А Pseudomonas aeruginosa и его роль в патогенезе синегнойной инфекции. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 1981; (2): 13-9.Vertiev YuV, Brodinova NS, Moroz AF. Pseudomonas aeruginosa exotoxin A and its role in the pathogenesis of pyocyaneus infection. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii 1981; (2): 13–9.Станиславский ЕС, Жванецкая МИ, Машилова ГМ, Гладус МА. Бесклеточная Псевдомонас-вакцина. Сообщение I. Ферментативные свойства и вирулентность штаммов P. aeruginosa, протективная активность их водорастворимых антигенов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 1980; (8): 66-71.Stanislavskii ES, Zhvanetskaia MI, Mashilova GM, Gladus MA. Cell-free pseudomonas vaccine. I. Enzyme properties and virulence of strains of P. aeruginosa; protective activity of their water-soluble antigens. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii 1980; (8): 66–72.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.