Каа Константин Владимирович
поселение Московский, поселок Института полиомиелита, вл. 8, к. 1, Москва, 108819
Konstantin V. Kaa
8/1 Village of the Institute of Poliomyelitis, Moskovsky settlement, Moscow 108819
Игнатьев Георгий Михайлович, д-р мед. наук, проф.
поселение Московский, поселок Института полиомиелита, вл. 8, к. 1, Москва, 108819
George M. Ignatyev, Dr. Sci. (Med.), Professor
8/1 Village of the Institute of Poliomyelitis, Moskovsky settlement, Moscow 108819
Синюгина Александра Александровна
поселение Московский, поселок Института полиомиелита, вл. 8, к. 1, Москва, 108819
Alexandra A. Sinyugina
8/1 Village of the Institute of Poliomyelitis, Moskovsky settlement, Moscow 108819
Ишмухаметов Айдар Айратович, д-р мед. наук, проф., член-корр. РАН
поселение Московский, поселок Института полиомиелита, вл. 8, к. 1, Москва, 108819
Aydar A. Ishmukhametov, Dr. Sci. (Med.), Professor, Corr. Member of RAS
8/1 Village of the Institute of Poliomyelitis, Moskovsky settlement, Moscow 108819
Рост случаев заболевания лихорадкой Чикунгунья регистрируется в странах Карибского бассейна, Центральной и Южной Америки и Юго-Восточной Азии. Специфического лечения против этого заболевания нет, лечение проводится симптоматическое, что делает разработку вакцин против лихорадки Чикунгунья весьма актуальной. Для разработки инактивированной цельновирионной вакцины против лихорадки Чикунгунья важен выбор чувствительной культуры клеток, которая обеспечивает высокую продукцию вируса, а также используется в производстве вакцинных препаратов.
Цель работы: изучение чувствительности различных линий клеток к заражению вирусом Чикунгунья и подбор метода культивирования клеток для максимального накопления и сбора вируса с монослоя.
Материалы и методы: в работе использовали вирус Чикунгунья штамм CHIKV_Nic, линии клеток ФЭК, MRC-5, Vero и 4647; титрование проводили на клетках линии С6/36. При подборе метода культивирования использовали культуральный флакон, клеточную фабрику, роллерную бутыль. Чувствительность клеточных линий к репродукции вируса выявляли по степени накопления инфекционного агента в культуральной жидкости (КЖ). Результат титрования учитывали на 5 сут по выраженному цитопатическому действию вируса.
Результаты: наибольшую чувствительность к заражению и максимальное накопление вируса в КЖ продемонстрировали клеточные линии 4647 и Vero. Клетки линий ФЭК и MRC-5 накапливали вирус в меньших концентрациях. Максимальные титры накопления вируса в КЖ клеточной линии Vero (7,10–7,75 lg ТЦД50/мл) отмечались через 48 ч с момента заражения; оптимальной является множественность заражения (MOI) в диапазоне 0,001– 0,0001 MOI/кл. При множественности заражения 0,0001 MOI/кл накопление вируса в клетках линии Vero при роллерном культивировании происходит на 2 сут с максимальным титром вируса 8,6±0,2 lg ТЦД50/мл.
Выводы: линия клеток Vero соответствует требованиям стабильности и безопасности при производстве вакцины против лихорадки Чикунгунья. Определена минимальная множественность заражения культуры клеток вирусом Чикунгунья. Применение роллерного метода позволяет получить наиболее высокий выход клеточной культуры и, соответственно, наиболее высокое значение титра вируса в КЖ.
An increase in cases of chikungunya fever is reported in the Caribbean, Central and South America, and Southeast Asia. As there is no specific treatment for this disease and the only available treatment is symptomatic, it is very relevant to develop vaccines against chikungunya fever. To develop an inactivated whole-virion vaccine against the disease, it is important to choose a susceptible cell culture that both provides high virus yields and is used for vaccine production.
The aim of the study was to evaluate the susceptibility of multiple cell lines to Chikungunya virus infection and to select the monolayer culture method with the highest virus accumulation and yield.
Materials and methods. The study used the CHIKV_Nic strain of the Chikungunya virus and cell lines C6/36 (for virus titration), CEF, MRC-5, Vero, and 4647. While choosing the culture method, the authors used culture flasks, a cell factory, and roller bottles. The authors determined the susceptibility of the cell lines to viral infection by the degree of accumulation of the infectious agent in the culture fluid. The results of virus titration were calculated on day 5 on the basis of a pronounced viral cytopathic effect.
Results. The Vero and 4647 cell lines demonstrated the highest susceptibility to infection and virus concentrations in the culture fluid. The СEF and MRC-5 cell lines accumulated the virus at lower concentrations. The maximum virus titres (7.10–7.75 log10 TCID50/mL) were observed in the culture fluid 48 h after infection. The optimal multiplicity of infection (MOI) ranged between 0.001 and 0.0001 MOI/cell. At 0.0001 MOI/cell, the virus accumulated in the Vero cells cultured in roller bottles on day 2, with the maximum virus titre being 8.6±0.2 log10 TCID50/mL.
Conclusions. Vero cells meet the safety and stability requirements set for the production of chikungunya vaccines. The study determined the minimum MOI of the Chikungunya virus for cell culture. The roller bottle culture method provides the highest cell culture yield and the highest titre of the virus in the culture fluid.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.