biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2022-22-4-392-404biopreparat-420Research ArticleСтатьиВыбор метода и разработка стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 методом ИФА в препаратах иммуноглобулиновSelection of a SARS-CoV-2 antibody quantification method and development of an antibody reference standard for ELISA to test immunoglobulin preparationshttps://orcid.org/0000-0002-2934-3002СмоляноваТ. И.SmolyanovaT. I.

Смолянова Татьяна Ивановна

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Tatiana I. Smolyanova

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

 

tatianasmolanova@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-3160-518XНиколаеваА. М.NikolaevaA. M.

Николаева Алевтина Максимовна,  д-р биол. наук. 

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Alevtina M. Nikolaeva, Dr. Sci. (Biol.)

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

a.m.nikolaeva@microgen.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0497-9757ВязниковаТ. В.VyaznikovaT. V.

 Вязникова Татьяна Владимировна,  канд. биол. наук. 

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Tatyana V. Vyaznikova, Cand. Sci. (Biol.)

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

t.v.vyaznikova@microgen.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7608-1914ИвановА. В.IvanovA. V.

Иванов Александр Викторович, канд. фарм. наук. 

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Alexander V. Ivanov, Cand. Sci. (Pharm)

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

ivanoffal@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6352-9380БеляковаО. В.BelyakovaO. V.

Белякова Ольга Валерьевна, канд. фарм. наук. 

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Olga V. Belyakova, Cand. Sci. (Pharm.)

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

o.v.beliakova@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1693-2422СаканянЕ. И.SakanyanE. I.

Саканян Елена Ивановна,  д-р фарм. наук, проф. 

2-й Волконский переулок, д. 10, Москва, 127473

Elena I. Sakanyan, Dr. Sci. (Pharm.)

10 2nd Volkonsky Ln., Moscow 127473

e.i.sakanjan@microgen.ruАкционерное общество «Нацимбио»РоссияNacimbioRussian FederationАкционерное общество «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»РоссияMicrogen Scientific Industrial Company for Immunological MedicinesRussian Federation202219102022224Разработка биологических лекарственных препаратов для профилактики, диагностики и лечения COVID-19392404Copyright © Смолянова Т.И., Николаева А.М., Вязникова Т.В., Иванов А.В., Белякова О.В., Саканян Е.И., 20222022Смолянова Т.И., Николаева А.М., Вязникова Т.В., Иванов А.В., Белякова О.В., Саканян Е.И.Smolyanova T.I., Nikolaeva A.M., Vyaznikova T.V., Ivanov A.V., Belyakova O.V., Sakanyan E.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/420

В процессе разработки препарата специфического иммуноглобулина человека против COVID-19 (КОВИД-глобулин) одной из задач являлся выбор метода определения содержания антител к SARS-CoV-2. Определение титра антител в реакции нейтрализации (РН) является трудоемким и не позволяет применять метод массово. Наиболее доступным методом для рутинного использования представляется метод иммуноферментного анализа (ИФА). В связи с отсутствием международных и отраслевых стандартных образцов (СО) возникла необходимость в получении и аттестации СО для контроля специфической активности КОВИД-глобулина.

Цель работы

Цель работы: изучение возможности замены реакции нейтрализации на метод ИФА для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в препаратах иммуноглобулинов и разработка стандартного образца количественного определения антител к SARS-СоV-2.

Материалы и методы

Материалы и методы: в исследовании использовали коммерческие наборы реагентов для ИФА различных производителей, препарат КОВИД-глобулин (48 серий) производства АО «НПО «Микроген», образцы плазмы крови человека (1499 образцов) различных производителей. В работе применяли РН, ИФА, хемилюминесцентный иммуноанализ на микрочастицах.

Результаты

Результаты: применение наборов реагентов для ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России и Euroimmun AG и валидация методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 с помощью ИФА с использованием выбранных наборов реагентов показали возможность использования метода ИФА взамен РН (коэффициент корреляции более 0,9). Разработан и охарактеризован СО содержания антител к SARS-CoV-2 в препаратах иммуноглобулина человека. Разработанный СО аттестован в установленных нами впервые антиковидных единицах (АКЕ) и единицах связывания антител (BAU) с использованием международной референс-панели ВОЗ (код NIBSC 20/268). Специфическая активность приготовленного СО предприятия охарактеризована по нейтрализующей активности в антиковидных единицах – АКЕ (активность СО составила 320 АКЕ/мл), а также в единицах BAU, используемых ВОЗ (активность СО составила 2234,8 BAU/мл). Установлено соотношение единиц АКЕ с единицами BAU. Коэффициент пересчета составил 6,4 для набора реагентов ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России и 7,0 – для набора реагентов ИФА производства Euroimmun AG.

Выводы

Выводы: метод ИФА для количественного определения антител к SARS-СоV-2 и разработанный СО содержания антител к SARS-CoV-2 могут быть использованы для определения специфической активности препаратов иммуноглобулина человека против COVID-19. 

The development of COVID-globulin, a COVID-19-specific human immunoglobulin preparation, involved choosing a method to quantify antibodies to SARS-CoV-2. Antibody titre determination by virus neutralisation (VN) is labour-intensive and unsuitable for large-scale application. To enable routine testing, it was necessary to develop a less demanding method; the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was the most appropriate of solutions. The lack of international and industry reference standards (RS) prompted the preparation and certification of an RS for COVID-globulin potency control.

The aim of the study was to examine the possibility of substituting ELISA for VN and to develop an RS for SARS-CoV-2 antibody quantification in immunoglobulin preparations.

Materials and methods

Materials and methods: the authors used commercial ELISA kits by several manufacturers, COVID-globulin by Microgen (48 batches), and human plasma samples from multiple sources (1499 samples). The tests were performed by VN, ELISA, and chemiluminescent microparticle immunoassay.

Results

Results: the authors validated an ELISA method for SARS-CoV-2 antibody quantification with the selected reagent kits by the National Medical Research Center for Hematology (NMRC for Hematology) and Euroimmun AG. The authors demonstrated the possibility of using ELISA instead of VN (with a correlation coefficient of more than 0.9). They developed and characterised an in-house RS for SARS-CoV-2 antibody content in human immunoglobulin preparations. The RS was certified in newly introduced anti-COVID units (ACU) and in international binding antibody units (BAU) using the World Health Organisation (WHO) international reference panel (NIBSC code: 20/268). The RS's potency was measured in terms of its neutralising activity in ACU (320 ACU/mL) and BAU (2234.8 BAU/mL). The authors established the relationship between ACU and BAU units. For the selected ELISA reagent kits, the conversion factors were 6.4 (NMRC for Hematology) and 7.0 (Euroimmun AG).

Conclusions

Conclusions: the ELISA method for SARS-CoV-2 antibody quantification and the RS for SARS-CoV-2 antibody content can be applied to determine the potency of human anti-COVID-19 immunoglobulins.

реакция нейтрализациииммуноферментный анализстандартный образециммуноглобулинантитела к SARS-CoV-2virus neutralisation testELISAreference standardimmunoglobulinSARS-CoV-2 antibodiesИсследование проводилось без спонсорской поддержки.The study was conducted without sponsorship.ReferencesАрутюнов АГ, Авдеев СН, Батюшин ММ, Боярков АВ, Буланов АЮ, Быкова ЕА и др. Применение КОВИД-глобулина в терапии COVID-19. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2022;85(3):13–20. https://doi.org/10.30906/0869-2092-2022-85-3-13-20Arutyunov AG, Avdeev SN, Batyushin MM, Boyarkov AV, Bulahov AYu, Bykova EA, et al. Using COVID-globulin in COVID-19 treatment. Eksperimentalnaya i klinicheskaya farmakologiya = Experimental and Clinical Pharmacology. 2022;85(3);13–20 (In Russ.) https://doi.org/10.30906/0869-2092-2022-85-3-13-20Перелыгина ОВ, Комаровская ЕИ. Сравнительный анализ требований к качеству гетелологичных сывороточных препаратов в фармакопеях ведущих стран – производителей лекарственных средств. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017;17(1):32–40.Perelygina OV, Komarovskaya EI. Comparative analysis of leading pharmacopoeias requirements for the quality of heterologous serum products. Biopreparaty. Profilaktika, diagnostika, lechenie = BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2017;17(1):32–40 (In Russ.)Knezevic I, Mattiuzzo G, Page M, Minor P, Griffiths E, Nuebling M, Moorthy V. WHO International Standard for evaluation of the antibody response to COVID-19 vaccines: call for urgent action by the scientific community. Lancet Microbe. 2022;3(3):e235–40. https://doi.org/10.1016/S2666-5247(21)00266-4Knezevic I, Mattiuzzo G, Page M, Minor P, Griffiths E, Nuebling M, Moorthy V. WHO International Standard for evaluation of the antibody response to COVID-19 vaccines: call for urgent action by the scientific community. Lancet Microbe. 2022;3(3):e235–40. https://doi.org/10.1016/S2666-5247(21)00266-4Infantino M, Pieri M, Nuccetelli M, Grossi V, Lari B, Tomassetti F, et al. The WHO International Standard for COVID-19 serological tests: towards harmonization of anti-spike assays. Int Immunopharmacol. 2021;100:108095. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2021.108095Infantino M, Pieri M, Nuccetelli M, Grossi V, Lari B, Tomassetti F, et al. The WHO International Standard for COVID-19 serological tests: towards harmonization of anti-spike assays. Int Immunopharmacol. 2021;100:108095. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2021.108095Logunov DY, Dolzhikova IV, Zubkova OV, Tukhvatullin AI, Shcheblyakov DV, Dzharullaeva AS, et al. Safety and immunogenicity of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine in two formulations: two open, non-randomised phase 1/2 studies from Russia. Lancet. 2020;396(10255):887–97. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31866-3Logunov DY, Dolzhikova IV, Zubkova OV, Tukhvatullin AI, Shcheblyakov DV, Dzharullaeva AS, et al. Safety and immunogenicity of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine in two formulations: two open, non-randomised phase 1/2 studies from Russia. Lancet. 2020;396(10255):887–97. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31866-3

The authors declare that there are no conflicts of interest present.