biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2022-22-3-318-330biopreparat-406Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESОценка сопоставимости результатов определения тиомерсала колориметрическим методом и методом атомно-абсорбционной спектрометрии холодного пара в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратахComparability assessment of the results of thiomersal quantification in adsorbed immunobiological medicinal products by colourimetry and by cold vapor atomic absorption spectrometryhttps://orcid.org/0000-0001-8664-5800КолесниковаО. Н.KolesnikovaO. N.

Колесникова Оксана Николаевна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Oksana N. Kolesnikova

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

kolesnikovao@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6685-0847ТрегубоваВ. Е.TregubovaV. E.

Трегубова Варвара Евгеньевна, кандидат химических наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Varvara E. Tregubova, Cand. Sci. (Chem.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

tregubova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5432-1887УстинниковаО. Б.UstinnikovaO. B.

Устинникова Ольга Борисовна, кандидат биологических наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga B. Ustinnikova, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

ustinnikova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2132-0962МовсесянцА. А.MovsesyantsA. A.

Мовсесянц Арташес Авакович, доктор медицинских наук, профессор

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Artashes A. Movsesyants, Dr. Sci. (Med.), Professor

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

movsesyants@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение Научный центр экспертизы средств медицинского применения Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation202210102022223318330Copyright © Колесникова О.Н., Трегубова В.Е., Устинникова О.Б., Мовсесянц А.А., 20222022Колесникова О.Н., Трегубова В.Е., Устинникова О.Б., Мовсесянц А.А.Kolesnikova O.N., Tregubova V.E., Ustinnikova O.B., Movsesyants A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/406

Количественное определение консерванта тиомерсала, входящего в состав ряда иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП), является обязательным требованием к их качеству. Ранее нами была разработана методика количественного определения тиомерсала в несорбированных ИЛП, основанная на методе атомно-абсорбционной спектрометрии холодного пара (методика ААС ХП). Цель работы: анализ возможности применения методики ААС ХП для количественной оценки содержания тиомерсала в сорбированных препаратах и оценка сопоставимости результатов количественного определения тиомерсала, полученных с помощью колориметрической методики и методики ААС ХП. Материалы и методы: государственный стандартный образец содержания ионов ртути; фармакопейный стандартный образец (ФСО) содержания мертиолята в сорбированных препаратах (ФСО 3.1.00427); образцы сорбированных ИЛП различных производителей (АКДС-вакцина, препараты анатоксинов, вакцины против гепатита В и гриппа, комбинированные вакцины). Исследование проводили с применением колориметрической методики в реакции с дитизоном и методики ААС ХП. Результаты: полученные с использованием методики ААС ХП значения относительного стандартного отклонения (3,95%) и коэффициента корреляции «объем образца — содержание тиомерсала» (0,9956) подтверждают специфичность методики; регрессионный анализ и полученное значение F-критерия Фишера, равное 0,16, свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки методики. Диапазон процента выявления добавленного количества тиомерсала, не превышающий 10%, свидетельствует об удовлетворительной правильности методики. Установлена чувствительность методики ААС ХП: предел количественного определения и предел обнаружения ионов ртути в образце составили 6,9×10-3 и 2,3×10-3 мкг/мл соответственно. Значение критерия Фишера (1,29), полученное при оценке сопоставимости результатов определения тиомерсала колориметрической методикой и методикой ААС ХП, ниже табличного значения (3,96). Выводы: подтверждена возможность применения методики ААС ХП для количественного определения тиомерсала в сорбированных ИЛП. Установленный предел обнаружения методики позволяет оценивать остаточные количества тиомерсала в полупродуктах при производстве бесконсервантных форм ИЛП. Оценка сопоставимости результатов определения тиомерсала колориметрической методикой и методикой ААС ХП, проведенная с применением однофакторного дисперсионного анализа по критерию Фишера, показала возможность применения ФСО 3.1.00427 для контроля стабильности аналитической работы при воспроизведении методики ААС ХП.

To ensure the quality of immunobiologicals, it is required to quantify the thiomersal preservative present in a number of them. The authors have previously developed an analytical procedure for thiomersal quantification in non-adsorbed immunobiological medicinal products, which is based on cold vapor atomic absorption spectrometry (CV AAS). The aim of the study was to analyse the possibility of using the CV AAS procedure for thiomersal content determination in adsorbed immunobiologicals and evaluate the comparability of thiomersal quantification results obtained by colourimetry and CV AAS. Materials and methods: the study used the national reference standard of mercury ions content and the pharmacopoeial reference standard of thiomersal content in adsorbed medicinal products (PhRS 3.1.00427), as well as samples of immunobiologicals by different manufacturers: a DTP vaccine, anatoxins, hepatitis B and influenza vaccines, and combined vaccines. The study involved CV AAS and the colourimetric reaction between mercury and dithizone. Results: the specificity of the CV AAS procedure is demonstrated by the coefficient of variation (3.95%) and the coefficient of correlation between the test sample volume and thiomersal content (0.9956). The regression analysis and the Fisher’s test value of 0.16 indicate the absence of bias. The trueness of the method is satisfactory, as the percent recovery differs from the total spiked amount by less than 10%. For the sensitivity of the CV AAS procedure, its quantification and detection limits are 6.9×10-3 μg/ mL and 2.3×10-3  μg/ mL, respectively. The Fisher’s test value obtained in the comparability assessment of the results of thiomersal quantification by colourimetry and CV AAS (1.29) is lower than the conventional tabulated one (3.96). Conclusions: according to the study, it is possible to use the CV AAS procedure for thiomersal quantification in adsorbed immunobiologicals. The established detection limit allows evaluating residual amounts of thiomersal in in-process intermediates during the production of preservative-free immunobilogical dosage forms. The comparability assessment of the results of thiomersal quantification by colourimetry and CV AAS, carried out using oneway ANOVA and Fisher’s test, showed the possibility of using PhRS 3.1.00427 to control the consistency of operation when reproducing the CV AAS procedure.

тиомерсалконсервантатомно-абсорбционная спектрометрияиммунобиологические лекарственные препаратысорбированные препаратыthiomersalpreservativeatomic absorption spectrometryimmunobiologicalsadsorbed preparationsРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00001-22-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 121022000147-4)The study reported in this publication was carried out as part of publicly funded research project № 056-00001-22-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. 121022000147-4)ReferencesBaker JP. Mercury, vaccines, and autism: one controversy, three histories. Am J Public Health. 2008;98(2):244–53. https://doi.org/10.2105/AJPH.2007.113159Baker JP. Mercury, vaccines, and autism: one controversy, three histories. Am J Public Health. 2008;98(2):244–53. https://doi.org/10.2105/AJPH.2007.113159Wolfe RM, Sharp LK. Anti-vaccinationists past and present. BMJ. 2002;325(7361):430–2. https://doi.org/10.1136/bmj.325.7361.430Wolfe RM, Sharp LK. Anti-vaccinationists past and present. BMJ. 2002;325(7361):430–2. https://doi.org/10.1136/bmj.325.7361.430Wiedermann U, Garner-Spitzer E, Wagner A. Primary vaccine failure to routine vaccines: why and what to do? Hum Vaccin Immunother. 2016;12(1):239–43. https://doi.org/10.1080/21645515.2015.1093263Wiedermann U, Garner-Spitzer E, Wagner A. Primary vaccine failure to routine vaccines: why and what to do? Hum Vaccin Immunother. 2016;12(1):239–43. https://doi.org/10.1080/21645515.2015.1093263Sugarman SD. Cases in vaccine court—legal battles over vaccines and autism. N Engl J Med. 2007;357(13):1275–7. https://doi.org/10.1056/NEJMp078168Sugarman SD. Cases in vaccine court—legal battles over vaccines and autism. N Engl J Med. 2007;357(13):1275–7. https://doi.org/10.1056/NEJMp078168Pichichero ME, Cernichiari E, Lopreiato J, Treanor J. Mercury concentrations and metabolism in infants receiving vaccines containing thiomersal: a descriptive study. Lancet. 2002;360(9347):1737–41. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(02)11682-5Pichichero ME, Cernichiari E, Lopreiato J, Treanor J. Mercury concentrations and metabolism in infants receiving vaccines containing thiomersal: a descriptive study. Lancet. 2002;360(9347):1737–41. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(02)11682-5Pichichero ME, Gentile A, Giglio N, Umido V, Clarkson T, Cernichiari E, et al. Mercury levels in newborns and infants after receipt of thimerosal-containing vaccines. Pediatrics. 2008;121(2):e208–14. https://doi.org/10.1542/peds.2006-3363Pichichero ME, Gentile A, Giglio N, Umido V, Clarkson T, Cernichiari E, et al. Mercury levels in newborns and infants after receipt of thimerosal-containing vaccines. Pediatrics. 2008;121(2):e208–14. https://doi.org/10.1542/peds.2006-3363Pichichero ME, Gentile A, Giglio N, Alonso MM, Fernandez Mentaberri MV, Zareba G, et al. Mercury levels in premature and low birth weight newborn infants after receipt of thimerosal-containing vaccines. J Pediatr. 2009;155(4):495–9. https://doi.org/10.1016/j.jpeds.2009.04.011Pichichero ME, Gentile A, Giglio N, Alonso MM, Fernandez Mentaberri MV, Zareba G, et al. Mercury levels in premature and low birth weight newborn infants after receipt of thimerosal-containing vaccines. J Pediatr. 2009;155(4):495–9. https://doi.org/10.1016/j.jpeds.2009.04.011da Cunha GK, de Matos MB, Trettim JP, Rubin BB, de Avila Quevedo L, Pinheiro KAT, et al. Thimerosal-containing vaccines and deficit in child development: population-based study in southern Brazil. Vaccine 2020;38(9):2216–20. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2019.12.044da Cunha GK, de Matos MB, Trettim JP, Rubin BB, de Avila Quevedo L, Pinheiro KAT, et al. Thimerosal-containing vaccines and deficit in child development: population-based study in southern Brazil. Vaccine 2020;38(9):2216–20. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2019.12.044Kern JK, Geier DA, Homme KG, Geier MR. Examining the evidence that ethylmercury crosses the blood-brain barrier. Environ Toxicol Pharmacol. 2020;74:103312. https://doi.org/10.1016/j.etap.2019.103312Kern JK, Geier DA, Homme KG, Geier MR. Examining the evidence that ethylmercury crosses the blood-brain barrier. Environ Toxicol Pharmacol. 2020;74:103312. https://doi.org/10.1016/j.etap.2019.103312Hinman AR, Orenstein WA, Schuchat A. Vaccine-preventable diseases, immunizations, and MMWR — 1961–2011. MMWR Suppl. 2011;60(4):49–57.Hinman AR, Orenstein WA, Schuchat A. Vaccine-preventable diseases, immunizations, and MMWR — 1961–2011. MMWR Suppl. 2011;60(4):49–57.Колесникова ОН, Устинникова ОБ, Рунова ОБ, Бондарев ВП. Определение мертиолята в несорбированных ИЛП методом атомно-абсорбционной спектрометрии холодного пара (ААС ХП) по ионам ртути. Часть 1: отработка методики и оценка статистической значимости результатов определения ртути колориметрическим методом и методом ААС-ХП. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2015;(2):59–63.Kolesnikova ON, Ustinnikova OB, Runova OB, Bondarev VP. Determination of thimerosal in non-adsorbed immunobiological preparations by cold vapor atomic absorption spectroscopy (CV AAS) for the ions of mercury. Part 1: method development and evaluation of statistical significance of differences in the results of mercury ions determination by colorimetric method and cold vapor atomic absorption spectroscopy method. Biopreparaty. Profilaktika, diagnostika, lechenie = BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2015;(2):59–63 (In Russ.)Glantz SA, ed. Primer of biostatistics. New York: McGraw-Hill; 1992.Glantz SA, ed. Primer of biostatistics. New York: McGraw-Hill; 1992.Doerffel K. Statistik in der analytischen Chemie. Leipzig: Dt. Verl. für Grundstoffindustrie; 1990.Doerffel K. Statistik in der analytischen Chemie. Leipzig: Dt. Verl. für Grundstoffindustrie; 1990.Эпштейн НА. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор). Химико-фармацевтический журнал. 2004;38(4):40–56.Epstein NA. Suitability evaluation (validation) of HPLC methods in pharmaceutical analysis (Review). Khimikofarmatsevticheskii zhurnal = Pharmaceutical Chemistry Journal. 2004;38(4):40–56

The authors declare that there are no conflicts of interest present.