biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-40Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESЭкспериментальное изучение эффективности удаления вирусов гепатитов B, C и парвовируса B19 при фракционировании плазмы крови этиловым спиртомExperimental study of the effectiveness of the removal of virus hepatitis B, C and parvovirus B19 by the fractionation of blood plasma with ethanolЗубковаН. В.ZubkovaN. V.

Заместитель начальника управления науки, д-р фарм. наук

Deputy head of Science Department. Doctor of Pharmaceutical Sciences

n.v.zubkova@microgen.ruКузнецоваМ. М.KuznetsovaM. M.

Технолог цеха диагностических препаратов Нижегородского филиала

Technologist of diagnostic products department of Nizhny Novgorod branch

noemail@neicon.ruЗубовС. В.ZubovS. V.

Начальник отделения производства НВ-диагностикумов/диагностикумов гепатита В цеха диагностических препаратов Нижегородского филиала

Head of compartment of HB diagnosticums and hepatitis B diagnosticums production of diagnostic products department of Nizhny Novgorod branch

noemail@neicon.ruФилатоваЕ. В.FilatovaE. V.

Старший микробиолог отделения производства НВ-диагностикумов/диагностикумов гепатита В цеха диагностических препаратов Нижегородского филиала, канд. биол. наук

Senior microbiologist of HB diagnosticums and hepatitis B diagnosticums production of diagnostic products department of Nizhny Novgorod branch. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruОпалеваМ. Ю.OpalevaM. Yu.

Микробиолог отделения отделения производства НВ-диагностикумов/диагностикумов гепатита В цеха диагностических препаратов Нижегородского филиала

Microbiologist of HB diagnosticums and hepatitis B diagnosticums production of diagnostic products department of Nizhny Novgorod branch

noemail@neicon.ruНаучно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»РоссияMicrogen Scientific Industrial Company for Immunobiological MedicinesRussian Federation2016200220181614348Copyright © Зубкова Н.В., Кузнецова М.М., Зубов С.В., Филатова Е.В., Опалева М.Ю., 20182018Зубкова Н.В., Кузнецова М.М., Зубов С.В., Филатова Е.В., Опалева М.Ю.Zubkova N.V., Kuznetsova M.M., Zubov S.V., Filatova E.V., Opaleva M.Y.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/40

Цель исследования заключалась в оценке эффективности удаления нуклеиновых кислот (НК) вирусов гепатитов В (ВГВ), С (ВГС) и парвовируса B19 (B19V) из фракций плазмы, полученных методом спиртового разделения. Исследования выполнены в модельном эксперименте путем фракционирования в лабораторных условиях нормального пула донорской плазмы, контаминированного вируссодержащими образцами. Установлено, что многостадийный процесс выделения фракции II, предназначенной для получения иммуноглобулина G, обеспечивал элиминацию НК ВГВ и ВГС до неопределяемого методом ПЦР уровня, при этом суммарный фактор редукции по сравнению с исходной плазмой составил для ДНК ВГВ >5,35 lg, РНК ВГС >4,84 lg. Фактор редукции ДНК B19V был на уровне 4,56 lg (CI 4,49-4,63). При получении фракции V (для альбумина) фактор редукции исследуемых вирусов был >3,0 lg, что в совокупности с дополнительными стадиями очистки обеспечивает надежный уровень безопасности. При выделении фракции I эффективность элиминации ДНК ВГВ и ДНК B19V была менее 2, РНК ВГС - менее 3 порядков, что недостаточно, чтобы признать стадию надежной. Экспериментально подтверждено, что при высоком риске контаминации производственных пулов парвовирусом B19 дополнительные меры безопасности необходимы, включая обязательное исследование плазмы на ДНК B19V. В целом, при разработке полного цикла производства препаратов из плазмы крови доноров базовый процесс спиртового фракционирования необходимо дополнять валидированными стадиями инактивации и элиминации вирусов с учетом остаточного риска контаминации сырья патогенными агентами.

The purpose of the study was to assess the effectiveness of the removal of nucleic acids (NA), Hepatitis B (HBV) and C (HCV) viruses and parvovirus B19 (B19V) from blood plasma fractions obtained by alcohol separation. The studies were performed in a model experiment by fractionation normal pool plasma donation contaminated with virus-containing samples in the laboratory. It was found that the multi-step process to extract a fraction II, designed to provide the immunoglobulin G, provided the elimination of NA HBV and HCV to undetectable levels by PCR, and the total reduction factor compared to the original composition of the plasma HBV DNA >5.35 log, HCV RNA >4.84 log. Factor DNA V19V reduction was at the level of 4.56 log(CI 4.49-4.63). Upon receipt of the fraction V (for albumin) reduction factor of the test virus was >3.0 log wich in combination with additional purification step provides a reliable level of safety. The selection fraction I resulted in effectiveness of the elimination of HBV DNA and V19V DNA less than 2 orders, HCV RNA - less than 3 orders of magnitude, it is not enough to recognize the stage reliable. Experiments confirmed that the high risk of contamination of production pools parvovirus B19 additional safety measures are necessary, including mandatory investigation of plasma DNA V19V. In general the development of a full cycle of drug from blood plasma from donors, basic process alcohol fractionation steps necessary to supplement validation virus elimination and inactivation considering residual risk of contamination with pathogenic agents feedstock.

препараты из плазмы кровифракции плазмывирусная безопасностьспиртовое фракционированиеинактивация вирусовнуклеиновые кислотыконцентрация вирусов (С)вирусная нагрузка (VL)фактор редукции (RF)drugs from blood plasmaplasma fractionsviral safetyalcohol fractionationviral inactivationnucleic acidsvirus concentration (С)viral load (VL)the reduction factor (RF)ReferencesBurnouf T. Modern plasma fractionation.Transfus Med Rev. 2007; 21(2): 101-17.Burnouf T. Modern plasma fractionation.Transfus Med Rev. 2007; 21(2): 101–17.CPMP/BWP/268/95 Virus Validation Studies: the design contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses. European Medicines Agency. Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003684.pdf.CPMP/BWP/268/95 Virus Validation Studies: the design contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses. European Medicines Agency. Available from: http://www.ema.europa.eu/docs/en GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003684.pdf.Зубкова НВ. Обеспечение инфекционной безопасности препаратов из плазмы крови доноров. Гематология и трансфузиология 2014; (2): 44-9.Zubkova NV. Ensuring of the infectious safety of plasma blood preparations. Gematologiya i transfuziologiya 2014; (2): 44–9 (in Russian).Общая фармакопейная статья «Лекарственные препараты из плазмы крови человека». Приказ Минздрава России № 768 от 21.11.2014. Available from: http://www.rosminzdrav.ru/ministry/61/11/ materialy-po-deyatelnosti-deparatamenta/stranitsa-856/.State Standard. General Pharmacopeia article «Human blood plasma derived drugs». Ministry of health order ¹ 768 dated 21.11.2014. Available from: http://www.rosminzdrav.ru/ministry/61/11/materialy-po-deyatelnosti-deparatamenta/stranitsa856/ (in Russian).WHO Guidance document on viral inactivation and removal procedure intended to assure the viral safety of blood plasma products. WHO Technical Report, Series № 924, Annex 4. 2004. Available from: http://www.who.int/bloodproducts/publications/WHO_ TRS_924_A4.pdf?ua=1.WHO Guidance document on viral inactivation and removal procedure intended to assure the viral safety of blood plasma products. WHO Technical Report, Series ¹ 924, Annex 4. 2004. Available from: http://www.who.int/bloodproducts/publications/WHO_ TRS_924_A4.pdf?ua=1.Dichtelmüller H, Flechsig E, Sananes F, Kretschmar M, Dougherty C. Effective virus inactivation and removal by steps of Biotest Pharmaceuticals IGIV production process. Results in Immunology 2012; (2): 19-24.Dichtelmüller H, Flechsig E, Sananes F, Kretschmar M, Dougherty C. Effective virus inactivation and removal by steps of Biotest Pharmaceuticals IGIV production process. Results in Immunology 2012; (2): 19–24.Jeong HS, Shin JH, Park YN, Choi JY, Kim YL, Kim BG et al. Development of real-time RT-PCR for evaluation of JEV clearance during purification of HPV type 16 L1 virus-like particles. Biologicals 2003; 31(3): 223-9.Jeong HS, Shin JH, Park YN, Choi JY, Kim YL, Kim BG et al. Development of real-time RT-PCR for evaluation of JEV clearance during purification of HPV type 16 L1 virus-like particles. Biologicals 2003; 31(3): 223–9.Blümel J, Burger R, Drosten C, Gröner A, Gürtler L, Heiden M et al. Parvovirus B19-Revised. Transfus Med Hemother. 2010; 37(6): 339-50.Blümel J, Burger R, Drosten C, Gröner A, Gürtler L, Heiden M et al. Parvovirus B19-Revised. Transfus Med Hemother. 2010; 37(6): 339–50.Филатова ЕВ, Зубкова НВ, Новикова НА, Голицына ЛН, Кузнецов КВ. Выявление маркеров парвовируса B19 в образцах крови доноров. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 2010; (5): 67-70.Filatova EV, Zubkova NV, Novikova NA, Golitsina LN, Kuznetsov KV. Detection of parvovirus B19 markers in blood samples of donors. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii 2010; (5): 67–70 (in Russian).Бельгесов НВ, Вильянинов ВН, Романенко СМ, Тихменева ИБ, Попова НН. Динамика выявления маркеров гемотрансмиссивных инфекций при обследовании первичных доноров в подразделении службы крови военно-медицинской академии в течение последних 13 лет. Вестник гематологии 2014; X(4): 6-7.Belgesov NV, Vilyaninov VN, Romanenko SM, Tikhmenev IB, Popova NN Dynamics of identifying of bloodborne pathogen markers during testing of primary donor blood services division of the Military Medical Academy for the last 13 years. Vestnik gematologii 2014; X(4): 6–7 (in Russian).Human Plasma (pooled and treated for virus inactivation). 2007: 1646. European Pharmacopoeia. 6st ed. 2007. Available from: http://www.dandybooksellers.com/acatalog/European Pharmacopoeia Supplement 6.1 Book.html.Human Plasma (pooled and treated for virus inactivation). 2007:1646. European Pharmacopoeia. 6st ed. 2007. Available from: http://www.dandybooksellers.com/acatalog/European_Pharmacopoeia Supplement 6.1 Book .html.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.