biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2022-22-1-60-79biopreparat-337Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESВалидация методики определения специфической активности интерферона бета человеческого рекомбинантного на примере препарата Инфибета® с использованием различных сочетаний клетка/вирусValidation of a test procedure for determination of specific activity of human recombinant interferon beta (Infibeta®) using various cell/virus combinationshttps://orcid.org/0000-0001-8933-6966ЛебедеваЮ. Н.LebedevaYu. N.

Лебедева Юлия Николаевна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Yulia N. Lebedeva

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

LebedevaUN@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9729-3281ЛитвиноваН. А.LitvinovaN. A.

Литвинова Наталия Алексеевна, кандидат биологических наук

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125

Nataliya A. Litvinova, Cand. Sci. (Biol.). 

14 Vladimirskaya St., Volginsky town, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

litvinova@ibcgenerium.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8972-4851ЛобановаТ. Н.LobanovaT. N.

Лобанова Татьяна Николаевна, кандидат биологических наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Tatiana N. Lobanova, Cand. Sci. (Biol.). 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Tlobanova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6532-7835ШукуровР. Р.ShukurovR. R.

Шукуров Рахим Рахманкулыевич,  кандидат биологических наук

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125

Rakhim R. Shukurov, Cand. Sci. (Biol.). 

14 Vladimirskaya St., Volginsky town, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

 

Shukurov@ibcgenerium.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1314-894XХамитовР. А.KhamitovR. A.

Хамитов Равиль Авгатович, доктор медицинских наук, профессор

ул. Владимирская, д. 14, пос. Вольгинский, Петушинский район, Владимирская область, 601125

Ravil A. Khamitov, Dr. Sci. (Med.), Professor

14 Vladimirskaya St., Volginsky town, Petushinskiy District, Vladimir Region 601125

 

Khamitov@ibcgenerium.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6176-5934ГайдероваЛ. А.GaiderovaL. A.

Гайдерова Лидия Александровна, кандидат медицинских наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Lidiya A. Gaiderova, Cand. Sci. (Med.). 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Gaiderova@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationАкционерное общество «ГЕНЕРИУМ»РоссияGenerium JSCRussian Federation2022221020212216079Copyright © Лебедева Ю.Н., Литвинова Н.А., Лобанова Т.Н., Шукуров Р.Р., Хамитов Р.А., Гайдерова Л.А., 20222022Лебедева Ю.Н., Литвинова Н.А., Лобанова Т.Н., Шукуров Р.Р., Хамитов Р.А., Гайдерова Л.А.Lebedeva Y.N., Litvinova N.A., Lobanova T.N., Shukurov R.R., Khamitov R.A., Gaiderova L.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/337

В настоящее время при лечении рассеянного склероза доказана эффективность препаратов интерферона бета. Одним из важнейших показателей качества, отражающих эффективность и безопасность лекарственных препаратов интерферона бета, является специфическая противовирусная активность. Для определения активности интерферона бета используют биологический метод, который может давать ошибку конечного результата за счет неопределенностей системы, вносящих свой вклад в общую погрешность. В связи с тем что точность оценки величины специфической активности позволяет гарантировать необходимую терапевтическую дозу препарата, особую актуальность приобретает стандартизация и валидация метода определения данного показателя. Цель работы: валидация методики определения специфической активности препаратов интерферона бета человеческого рекомбинантного на примере препарата Инфибета® с использованием различных сочетаний клетка/вирус. Материалы и методы: в исследовании использовали клетки WISH, Vero, A-549, MDBK в комбинации с вирусом энцефаломиокардита мышей. Испытания проводили биологическим методом, основанным на способности интерферона подавлять цитопатическое действие вируса в культуре клеток. Учет результатов осуществляли с использованием методов математической статистики и пакета программ GraphPadPrism, Statisticа 2/0. Результаты: представлены данные сравнительного анализа результатов определения специфической активности препарата Инфибета® (интерферон бета-1b) с использованием различных сочетаний клетка/вирус. Сравнение результатов проводили по характеристикам графика зависимости «доза–эффект». Показано, что все испытанные клеточные линии пригодны для постановки методики определения активности интерферона бета биологическим методом. Однако наилучшие результаты получены с использованием клеток A-549, WISH в сочетании с вирусом энцефаломиокардита мышей. На указанных системах клетка/вирус провели определение валидационных характеристик: специфичность, линейность, прецизионность, робастность. Выводы: валидирована методика, позволяющая измерять специфическую активность интерферона бета в диапазоне 4,8–11,2 МЕ/мл с удовлетворительной точностью, что гарантирует получение достоверных результатов анализа. Показана устойчивость методики и ее внутри- и межлабораторная воспроизводимость.

Interferon beta preparations have demonstrated efficacy in the treatment of multiple sclerosis. One of the most important quality attributes that support efficacy and safety of interferon beta preparations is specific antiviral activity. Interferon beta activity is determined by the biological test method which can lead to an erroneous final result due to the system uncertainties that contribute to the overall uncertainty. Accurate assessment of specific activity plays an important role in adequate determination of the product’s therapeutic dose, therefore the test method standardisation and validation are of particular relevance. The aim of the study was to validate a test procedure for assessing specific activity of human recombinant interferon beta preparations, using various cell/virus combinations, as illustrated by the example of Infibeta®. Materials and methods: WISH, Vero, A-549, and MDBK cells in combination with mouse encephalomyocarditis virus were used in the study. The testing was performed using the biological test method based on the interferon ability to suppress virus-induced cytopathic effects in cell cultures. The results were processed using methods of mathematical statistics and the GraphPadPrism, Statistical 2/0 software package. Results: the paper compares the results of specific activity determination of Infibeta® (interferon beta-1b) using various cell/virus combinations. The dose-response curves were used to compare the test results. It was demonstrated that all the tested cell lines could be used in the biological test procedure for determination of interferon beta specific activity. However, the best results were obtained with A-549, WISH cells in combination with mouse encephalomyocarditis virus. The following validation characteristics were determined in the cell/virus systems: specificity, linearity, precision, and robustness. Conclusions: the study validated the test procedure that enables measurement of interferon beta specific activity in the range of 4.8–11.2 IU/mL at a satisfactory accuracy level, which guarantees reliable test results. The study demonstrated robustness, intermediate precision, and reproducibility of the test procedure.

интерферон бетаспецифическая активностьклеточные культурывирускривая зависимости «доза–эффект»валидациякритерии приемлемостиоценка валидационных характеристикinterferon betaspecific activitycell culturesvirusdose-response curvevalidationacceptance criteriaassessment of validation parametersРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00001-22-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 121022000147-4).The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-00001-22-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. 121022000147-4).ReferencesУльянова ОВ, Куташев ВА, Дутова ТИ. Рассеянный склероз – актуальная неврологическая проблема XXI века. Молодой ученый. 2016;15(119):558–67.Ulyanova OV, Kutashev VA, Dutova TI. Multiple sclerosis is an actual neurological problem of the XXI century. Molodoy uchenyy = The Young Scientist. 2016,15(119):558–67 (In Russ.)Мирошникова ВВ, Саранов АА, Аракелян АС, Рыбак ВА. Современная терапия рассеянного склероза. Лекарственный вестник. 2013;7(49):20–34.Miroshnikova VV, Saranov AA, Arakelyan AS, Rybak VA. Modern therapy of multiple sclerosis. Lekarstvennyj vestnik = Pharmaceutical Bulletin. 2013;7(49):20–34 (In Russ.)Jakimovski D, Kolb C, Ramanathan M, Zivadinov R, Weinstock-Guttman B. Interferon β for multiple sclerosis. Cold Spring Harb Perspect Med. 2018;8(11):a032003. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a032003Jakimovski D, Kolb C, Ramanathan M, Zivadinov R, Weinstock-Guttman B. Interferon β for multiple sclerosis. Cold Spring Harb Perspect Med. 2018;8(11):a032003. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a032003Kieseier BC. The mechanism of action of interferon-β in relapsing multiple sclerosis. CNS Drugs. 2011;25(6):491–502. https://doi.org/10.2165/11591110-000000000-00000Kieseier BC. The mechanism of action of interferon-β in relapsing multiple sclerosis. CNS Drugs. 2011;25(6):491–502. https://doi.org/10.2165/11591110-000000000-00000Kremenchutzky М, Morrow S, Rush С. The safety and efficacy of IFN-beta products for the treatment of multiple sclerosis. Expert Opin Drug Saf. 2007;6(3):279–88. https://doi.org/10.1517/14740338.6.3.279Kremenchutzky М, Morrow S, Rush С. The safety and efficacy of IFN-beta products for the treatment of multiple sclerosis. Expert Opin Drug Saf. 2007;6(3):279–88. https://doi.org/10.1517/14740338.6.3.279Борец ОГ, Говорухина НФ, Зверев КВ, Бойко АН. Сравнительный анализ результатов применения в повседневной клинической практике для лечения рассеянного склероза препаратов β-интерферон-1а 30 мкг для внутримышечного введения и β-интерферон-1а 44 мкг для подкожных инъекций. Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. Спецвыпуски. 2016;116(2–2):63–7.Borets OG, Govorukhina NF, Zverev KV, Boiko AN. A comparison analysis of the use of intravenous β-interferon-1a 30 mcg and subcutaneous β-interferon-1a 44 mcg in routine clinical practice of treatment in patients with multiple sclerosis. Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii imeni S.S. Korsakova = S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2016;116:2(2):63–7(In Russ.)Попова ЕВ, Бойко АН, Васильев АВ, Давыдовская МВ, Завалишин ИА, Котов СВ и др. Результаты сравнительного клинического исследования российского биоаналога – интерферона-1b (инфибета). Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2012;112(5):56–61.Popova EV, Boiko AN, Vasil'ev AV, Davydovskaia MV, Zavalishin IA, Kotov SV, et al. Results of a comparative clinical trial of the Russian – interferon-1b bioanalogue (infibeta). Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii imeni S.S. Korsakova = S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2012;112(5):56–61 (In Russ.)Хабиров ФА, Хайбуллин ТИ, Гранатов ЕВ, Шакирзянова СР, Бабичева НН, Кочергина ОС и др. Результаты открытого сравнительного ретроспективного исследования особенностей рассеянного склероза на фоне терапии препаратом инфибета и другими биоаналогами интерферонов бета и глатирамера ацетатом. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2018;118(3):18–26. https://doi.org/10.17116/jnevro20181183118-26Khabirov FA, Khaibullin TI, Granatov EV, Shakirzianova SR, Babicheva NN, Kochergina OS, et al. The results of an open comparative retrospective trial of the course of multiple sclerosis during treatment with infibeta and other interferon-beta bioanalogues and glatiramer acetate. Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii imeni S.S. Korsakova = S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2018;118(3):18–26 (In Russ.) https://doi.org/10.17116/jnevro20181183118-26Stoddart MJ. Cell viability assays: introduction. Methods Mol Biol. 2011;740:1–6. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-108-6_1Stoddart MJ. Cell viability assays: introduction. Methods Mol Biol. 2011;740:1–6. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-108-6_1Präbst K, Engelhardt H, Ringgeler S, Hübner H. Basic Colorimetric proliferation assays: MTT, WST, and resazurin. Methods Mol Biol. 2017;1601:1–17. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6960-9_1Präbst K, Engelhardt H, Ringgeler S, Hübner H. Basic Colorimetric proliferation assays: MTT, WST, and resazurin. Methods Mol Biol. 2017;1601:1–17. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-6960-9_1Stockert JC, Horobin RW, Colombo LL, Blázquez-Castro A. Tetrazolium salts and formazan products in cell biology: viability assessment, fluorescence imaging, and labeling perspectives. Acta Histochem. 2018;120(3):159–67. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2018.02.005Stockert JC, Horobin RW, Colombo LL, Blázquez-Castro A. Tetrazolium salts and formazan products in cell biology: viability assessment, fluorescence imaging, and labeling perspectives. Acta Histochem. 2018;120(3):159–67. https://doi.org/10.1016/j.acthis.2018.02.005

The authors declare that there are no conflicts of interest present.