biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2020-20-1-68-73biopreparat-249Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESОсобенности методического подхода к определению специфической активности интерферона альфа типаAspects of a Methodological Approach to Determination of Interferon Alpha Specific Activityhttps://orcid.org/0000-0001-9889-4038БайковаМ. Л.BaykovaM. L.

Байкова Марина Леонидовна

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Marina L. Baykova

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

 

Baikova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9378-3312ЩербаченкоИ. М.ShcherbachenkoI. M.

Щербаченко Ирина Михайловна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Irina M. Shcherbachenko, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

 

Sherbachenko@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6176-5934ГайдероваЛ. А.GayderovaL. A.

Гайдерова Лидия Александровна, канд. мед. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Lidia A. Gayderova, Cand. Sci. (Med.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

 

Gaiderova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5432-1887УстинниковаО. Б.UstinnikovaO. B.

Устинникова Ольга Борисовна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga B. Ustinnikova, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

 

Ustinnikova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2132-0962МовсесянцА. А.MovsesyantsA. A.

Мовсесянц Арташес Авакович, д-р мед. наук, проф.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Artashes A. Movsesyants, Dr Sci. (Med.), Professor

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

 

Movsesyants@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation2020301020192016873Copyright © Байкова М.Л., Щербаченко И.М., Гайдерова Л.А., Устинникова О.Б., Мовсесянц А.А., 20202020Байкова М.Л., Щербаченко И.М., Гайдерова Л.А., Устинникова О.Б., Мовсесянц А.А.Baykova M.L., Shcherbachenko I.M., Gayderova L.A., Ustinnikova O.B., Movsesyants A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/249

Для препаратов интерферона альфа типа (ИФН) одним из наиболее значимых показателей, характеризующих их фармацевтическое качество и фармакологическую эффективность, является специфическая противовирусная активность. Для определения специфической активности используют биологический метод количественного определения противовирусной активности на культуре клеток. Цель работы: выбор наиболее оптимальных условий проведения анализа по определению специфической активности препаратов ИФН in vitro. Материалы и методы: количественное определение специфической противовирусной активности проводили с использованием культур клеток гомологичного и гетерологичного происхождения: Vero; MDBK; Hep-2; А-549 и вирусов: везикулярного стоматита (VSV) штамма Индиана и энцефаломиокардита мышей (ЕМС) в дозе 100 ТЦД50/0,1 мл. В качестве образцов ИФН использовали международный стандарт активности рекомбинантного интерферона альфа-2b (Interferon alpha 2b, human, rDNA, E. coli-derived 2nd WHO International Standart 1999 NIBSC, code № 95/566) и интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, субстанция-раствор (серия 040214, ООО «Фармапарк», Россия). Результаты: анализ полученных данных позволил определить наиболее чувствительные к действию ИФН комбинации клеточных линий и индикаторного вируса; оптимальную концентрацию эмбриональной сыворотки в среде и временные параметры; предпочтительный способ учета результатов испытания. Выводы: выбраны оптимальные условия проведения анализа по определению специфической активности препаратов ИФН – наиболее чувствительными к интерферону альфа являются комбинации клеточная культура/вирус: клетки MDBK/вирус VSV и клетки Hep-2/вирус EMC; время инкубирования интерферона с клеточной культурой – 24 ч; концентрация эмбриональной телячьей сыворотки в питательной среде, используемой для разведений препаратов интерферона – 2–5 %. При учете результатов исследования противовирусной активности интерферона более предпочтительным является инструментальный способ, как более современный, объективный, точный и менее трудоемкий.

Specific antiviral activity is one of the key indicators characterising pharmaceutical quality and pharmacological efficacy of interferon alpha products (IFN-α). Specific activity is determined using a bioassay measuring antiviral activity in cell culture. The aim of the study was to select the most appropriate conditions for in vitro determination of IFN-α product specific activity. Materials and methods: Vero, MDBK, Hep-2, and A-549 homologous and heterologous cell cultures, as well as vesicular stomatitis Indiana virus (VSV) and murine encephalomyocarditis (EMC) virus at a dose of 100 TCD50 /0.1 mL were used for determination of specific antiviral activity. The international reference standard of recombinant interferon alpha-2b activity (Interferon alpha 2b, human, rDNA, E. coli-derived, 2nd WHO International Standard, 1999, NIBSC Code No. 95/566) and human recombinant interferon alpha 2b in the form of solution (batch No. 040214, Pharmapark LLC, Russia) were used as IFN-α samples. Results: the analysis of the obtained data helped to determine: the combinations of cell lines and the indicator virus most sensitive to IFN-α; the optimal concentration of fetal serum in the medium, and the optimal time parameters; the preferred method of reporting test results. Conclusions: the following test conditions were found to be optimal: the MDBK/VSV and Hep-2/EMC combinations proved to be the most sensitive to IFN-α; the optimal period of interferon and cell culture incubation—24 hours; the optimal concentration of fetal bovine serum in the culture medium used for diluting interferon products—2–5%. The instrumental procedure is preferred for reporting the results of interferon antiviral activity determination, because it is up-to-date, reliable, accurate and time-efficient.

интерферон альфаоценка качествабиологический методспецифическая противовирусная активностьinterferon alpha (IFN-α)quality controlbioassayspecific antiviral activityРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00154-19-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР AAAA-A18-118021590049-0).The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-0003-20-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. AAAA-A18-118021590049-0)ReferencesPestka S, Langer JA, Zoon KC, Samuel CE. Interferons and their actions. Annu Rev Biochem. 1987;56:727–77. https://doi.org/10.1146/annurev.bi.56.070187.003455Pestka S, Langer JA, Zoon KC, Samuel CE. Interferons and their actions. Annu Rev Biochem. 1987;56:727–77. https://doi.org/10.1146/annurev.bi.56.070187.003455Stark GR, Kerr IM, Williams BR, Silverman RH, Schreiber RD. How cells respond to interferons. Annu Rev Biochem. 1998;67:227–64. https://doi.org/10.1146/annurev.biochem.67.1.227Stark GR, Kerr IM, Williams BR, Silverman RH, Schreiber RD. How cells respond to interferons. Annu Rev Biochem. 1998;67:227–64. https://doi.org/10.1146/annurev.biochem.67.1.227Biron CA. Interferons alpha and beta as immune regulators — a new look. Immunity. 2001;14(6):661–4. https://doi.org/10.1016/s1074-7613(01)00154-6Biron CA. Interferons alpha and beta as immune regulators — a new look. Immunity. 2001;14(6):661–4. https://doi.org/10.1016/s1074-7613(01)00154-6Quesada JR, Gutterman JU, Hersh EM. Treatment of hairy cell leukemia with alpha interfe rons. Cancer. 1986;57(8 Suppl):1678–80. https://doi.org/10.1002/1097-0142(19860415)57:8+%3C1678::aid-cncr2820571308%3E3.0.co;2-6Quesada JR, Gutterman JU, Hersh EM. Treatment of hairy cell leukemia with alpha interfe rons. Cancer. 1986;57(8 Suppl):1678–80. https://doi.org/10.1002/1097-0142(19860415)57:8+%3C1678::aid-cncr2820571308%3E3.0.co;2-6Baron S, Tyring SK, Fleischmann WR Jr, Coppenhaver DH, Niesel DW, Klimpel GR, et al. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications. JAMA. 1991;266(10):1375– 83. https://doi.org/10.1001/jama.266.10.1375Baron S, Tyring SK, Fleischmann WR Jr, Coppenhaver DH, Niesel DW, Klimpel GR, et al. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications. JAMA. 1991;266(10):1375– 83. https://doi.org/10.1001/jama.266.10.1375Larocque L, Bliu A, Xu Ranran, Diress A, Wang J, Lin R, et al. Bioactivity determination of native and variant forms of therapeutic interferons. J Biomed Biotechnol. 2011;2011:174615. https://doi.org/10.1155/2011/174615Larocque L, Bliu A, Xu Ranran, Diress A, Wang J, Lin R, et al. Bioactivity determination of native and variant forms of therapeutic interferons. J Biomed Biotechnol. 2011;2011:174615. https://doi.org/10.1155/2011/174615Meager A, Gaines Das R, Zoon K, Mire-Sluis A. Establishment of new and replacement World Health Organization International Biological Standards for human interferon alpha and omega. J Immunol Methods. 2001;257(1–2):17–33. https://doi.org/10.1016/s0022-1759(01)00460-4Meager A, Gaines Das R, Zoon K, Mire-Sluis A. Establishment of new and replacement World Health Organization International Biological Standards for human interferon alpha and omega. J Immunol Methods. 2001;257(1–2):17–33. https://doi.org/10.1016/s0022-1759(01)00460-4Авдеева ЖИ, Алпатова НА, Солдатов АА, Бондарев ВП, Бунятян НД, Меркулов ВА и др. Особенности доклинических исследований биотехнологических лекарственных препаратов. Иммунология. 2015;36(5):306–12.Avdeeva ZhI, Alpatova NA, Soldatov AA, Bondarev VP, Bunyatyan ND, Merkulov VA, et al. Features of preclinical studies of biotechnological medicines. Immunologiya = Immunology. 2015;36(5):306–12 (In Russ.)Meager A. Assays for antiviral activity. Methods Mol Biol. 2004;249:121–34. https://doi.org/10.1385/1-59259-667-3:121Meager A. Assays for antiviral activity. Methods Mol Biol. 2004;249:121–34. https://doi.org/10.1385/1-59259-667-3:121Алпатова НА, Авдеева ЖИ, Солдатов АА, Бондарев ВП, Медуницын НВ. Принципы оценки специфической активности биотехнологических лекарственных препаратов. Цитокины и воспаление. 2015;14(3):10–8.Alpatova NA, Avdeeva ZhI, Soldatov AA, Bondarev VP, Medunitsyn NV. Principles of assessment of biotechnological medicines specific activity. Tsitokiny i vospalenie = Cytokines and Inflammation. 2015;14(3):10–8 (In Russ.)Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М.: Практика; 1998.Glanz S. Biomedical statistics. Moscow: Praktika; 1998 (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.