biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2019-19-3-185-192biopreparat-226Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESРазработка и аттестация стандартного образца «Хлоркальциевый казеин»Development and Certification of Calcium Chloride Casein Reference Standardhttps://orcid.org/0000-0001-6621-4384СухановаС. М.SukhanovaS. M.

Суханова Светлана Михайловна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Svetlana M. Sukhanova, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

pitsred@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8698-2890ВолковаР. А.VolkovaR. A.

Волкова Рауза Асхатовна, д-р биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Rausa A. Volkova, Dr. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Volkova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0985-3694ЗахароваН. Е.ZakharovaN. E.

Захарова Наталия Евгеньевна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Natalia E. Zakharova, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Zaharova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8473-7442ФадейкинаО. В.FadeikinaO. V.

Фадейкина Ольга Васильевна, канд. биол. наук

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Olga V. Fadeikina, Cand. Sci. (Biol.)

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Fadeikina@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian Federation201906082019193185192Copyright © Суханова С.М., Волкова Р.А., Захарова Н.Е., Фадейкина О.В., 20192019Суханова С.М., Волкова Р.А., Захарова Н.Е., Фадейкина О.В.Sukhanova S.M., Volkova R.A., Zakharova N.E., Fadeikina O.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/226

В соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV издания тестштамм Clostridium novyi 198 используется для определения ростовых свойств тиогликолевой среды при испытании иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП) по показателю «Стерильность». Для сохранения культуры C. novyi 198 в споровой форме рекомендована специальная жидкая среда, содержащая нерастворимый хлоркальциевый казеин (ХК). В настоящее время стандартный образец, необходимый для контроля партий ХК в составе питательной среды для поддержания C. novyi 198, на российском рынке отсутствует. Цель работы: разработка и аттестация первой серии отраслевого стандартного образца (ОСО) «Хлоркальциевый казеин», предназначенного для контроля партий ХК и жидкой питательной среды с его добавлением для поддержания C. novyi 198 в споровой форме. Материалы и методы: в качестве кандидата в ОСО использовали термоденатурированный ХК, полученный химическим путем из казеина технического. Оценку качества ОСО проводили по методикам, изложенным в МУК 4.2.2316-08. Получение культуры C. novyi 198 в споровом состоянии — подготовка, посев и инкубирование на среде, содержащей ОСО «Хлоркальциевый казеин», осуществляли в соответствии с разделом «Испытание на стерильность» МУК 4.2.2316-08. Результаты: для ОСО «Хлоркальциевый казеин» был определен перечень показателей качества: «Спорообразование» (аттестуемая характеристика), «Внешний вид», «Потеря в массе при высушивании», «Прозрачность среды». Проведена аттестация первой серии кандидата в ОСО «Хлоркальциевый казеин». Значение аттестуемой характеристики «Спорообразование» составило (32,6 ± 7,3) %, срок годности ОСО — 5 лет при хранении в сухом защищенном от света месте при температуре от 15 до 25 °C. Разработан и утвержден комплект документации ОСО 42-28-444-2018. Жидкая среда с добавлением стандартизованного ХК (0,3 г/10 мл) обеспечивает сохранение биологических свойств рабочей культуры C. novyi 198 в течение не менее 12 месяцев. Выводы: по результатам аттестации ОСО «Хлоркальциевый казеин» соответствует предъявляемым требованиям и может быть использован в качестве образца сравнения для контроля новых партий ХК и оценки пригодности жидкой среды хранения с его добавлением. Применение ОСО «Хлоркальциевый казеин» позволяет стандартизовать и значительно упростить процедуру поддержания C. novyi 198 в стабильном состоянии, повысить эффективность и надежность оценки качества ИЛП по показателю «Стерильность», а также снизить затраты при использовании лиофильно высушенного штамма.

In accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation, 14th edition, Clostridium novyi 198 test strain is used to determine growth promoting properties of thioglycollate medium when testing sterility of immunobiological medicinal products. The preservation of C. novyi 198 as spores requires a special liquid medium containing insoluble calcium chloride casein (CChC). At present, there is no reference standard available on the Russian market for the quality control of CChC used as a component of the media for preservation of C. novyi 198.

The aim of the study was to develop and certify the first batch of calcium chloride casein industry reference standard (IRS) for the quality control of CChC batches and liquid media containing CChC which is used to preserve C. novyi 198 as spores.

Materials and methods

Materials and methods: thermally denatured CChC which was chemically synthesized from industrial CChC was used as candidate material. The quality control was performed using the test procedures described in procedural guidelines MUK 4.2.2316-08. C. novyi 198 spores were obtained as described in the «Sterility testing» section of MUK 4.2.2316-08 (preparation, inoculation and incubation in the medium containing calcium chloride casein IRS).

Results

Results: a list of quality parameters was developed for calcium chloride casein IRS: «Spore formation» (certifiable parameter), «Appearance», «Loss on drying», «Clarity of medium». The first batch of the candidate calcium chloride casein IRS was certified. The value of the «Spore formation» certifiable parameter was found to be (32.6 ± 7.3) %, the IRS shelf life was 5 years when stored in a dry place protected from light at a temperature of 15 to 25 °C. A documentation package for the IRS 4228-444-2018 was prepared and approved. The liquid medium containing CChC reference material (0.3 g/10 mL) allows for preservation of the biological properties of the C. novyi 198 working culture for at least 12 months.

Conclusions

Conclusions: the certification results demonstrate that the calcium chloride casein IRS meets the applicable requirements and can be used as reference material to control the quality of new CChC batches and to assess the suitability of liquid medium containing CChC for preservation purposes. The use of the calcium chloride casein IRS makes it possible to standardise and greatly simplify the procedure for preserving the stability of C. novyi 198, to increase the efficiency and reliability of immunobiologicals quality control in terms of Sterility, and to reduce costs when using a freeze-dried strain.

стерильностьростовые свойства средытермоденатурированный хлоркальциевый казеинхранение штаммовоценка качестваспорообразующие бактерииотраслевой стандартный образецsterilitygrowth promoting properties of mediathermally denaturated calcium chloride caseinstrain storagequality controlspore-forming bacteriaindustry reference standardРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00154-19-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР AAAA-A18-118021590046-9).The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-00154-19-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. AAAA-A18-118021590046-9).ReferencesМовсесянц АА, Бондарев ВП, Олефир ЮВ, Меркулов ВА, Шимчук ЛФ. Стандарты качества иммунобиологических лекарственных препаратов — новое в Государственной фармакопее Российской Федерации. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2016;(2):38–41.Movsesyants AA, Bondarev VP, Olefir YuV, Merkulov VA, Shimchuk LF. Quality standarts for immunobiological medicinal products — new texts in the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = Тhе Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2016;(2):38–41 (In Russ.)Суханова СМ, Бердникова ЗЕ, Захарова НЕ, Меркулов ВА. Испытание на стерильность иммунобиологических лекарственных препаратов в России. История вопроса и современные требования. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2018;18(1):5–15. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2018-18-1-5-15Sukhanova SM, Berdnikova ZE, Zakharova NE, Merkulov VA. Sterility testing of immonobiological medicinal products in Russia. Historical background and current requirements. BIO-preparaty. Profilaktika, diagnostika, lechenie = BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2018;18(1):5–15 (In Russ.) https://doi.org/10.30895/2221-996X-2018-18-1-5-15Гавристова ИА, Андреева ЗM, Бендас ЛГ. Способ контроля качества тиогликолевой среды. Авторское свидетельство № 990808; 1981.Gavristova IA, Andreeva ZM, Bendas LG. Method of thioglycollate medium quality control. Inventor’s certificate No. 990808; 1981 (In Russ.)Sasaki Y, Takikawa N, Kojima A, Norimatsu M, Suzuki S, Tamura Y. Phylogenetic positions of Clostridium novyi and Clostridium haemolyticum based on 16S rDNA sequences. Int J Syst Evol Microbiol. 2001;51(3):901–4. https://doi.org/10.1099/00207713-51-3-901Sasaki Y, Takikawa N, Kojima A, Norimatsu M, Suzuki S, Tamura Y. Phylogenetic positions of Clostridium novyi and Clostridium haemolyticum based on 16S rDNA sequences. Int J Syst Evol Microbiol. 2001;51(3):901–4. https://doi.org/10.1099/00207713-51-3-901Rainey FA, Hollen BJ, Small A. Clostridium. In: De Vos P, Garrity GM, Jones D, Krieg NR, Ludwig W, Rainey FA, et al., eds. Bergey’s manual of systematic bacteriology, 2nd ed. Volume 3: The Firmicutes. Springer; 2009. http://dx.doi.org/10.1007/978-0-387-68489-5Rainey FA, Hollen BJ, Small A. Clostridium. In: De Vos P, Garrity GM, Jones D, Krieg NR, Ludwig W, Rainey FA, et al., eds. Bergey’s manual of systematic bacteriology, 2nd ed. Volume 3: The Firmicutes. Springer; 2009. http://dx.doi.org/10.1007/978-0-387-68489-5Похиленко ВД, Баранов АМ, Детушев КВ. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. 2009;4(12):99–121.Pokhilenko VD, Baranov AM, Detushev KV. Methods for long-term storage of collection microbial cultures and tendencies of development. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzhskiy region. Meditsinskie nauki = University proceedings. Volga region. Medical sciences. 2009;4(12):99–121 (In Russ.)Morgan CA, Herman N, White PA, Vesey G. Preservation of micro-organisms by drying; a review. J Microbiol Methods. 2006;66(2):183–93. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2006.02.017Morgan CA, Herman N, White PA, Vesey G. Preservation of micro-organisms by drying; a review. J Microbiol Methods. 2006;66(2):183–93. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2006.02.017Волков ВЯ. К вопросу о физиологических и физико-химических механизмах стабильности микроорганизмов к замораживанию и высушиванию. Микробиология. 1994;63(1):5–16.Volkov VYa. To the question of physiological and physico-chemical mechanisms of stability of microorganisms to freezing and drying. Mikrobiologiya = Microbiology. 1994;63(1):5–16 (In Russ.)Голубенко ИА, Суханова СМ, Захарова НЕ. Способ получения хлоркальциевого казеина. Патент Российской Федерации № 2528978; 2014.Golubenko IA, Sukhanova SM, Zakharova NE. Method of production of casein calcium chloride. Patent of the Russian Federation No. 2528978; 2014 (In Russ.)Суханова СМ, Захарова НЕ. Питательные среды в практике микробиологических исследований. В кн.: Руководство по медицинской микробиологии. М.: Бином; 2008. С. 221–54.Sukhanova SM, Zakharova NE. Nutrient media in the practice of microbiological research. In: Guide to Medical Microbiology. Moscow: Binom; 2008. P. 221–54 (In Russ.)Суханова СМ, Голубенко ИА, Захарова НЕ. Исследование различных форм казеина как спорообразующего компонента среды хранения для Сlostridium novyi. В кн.: Тезисы всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней». М.; 2010. С. 108.Sukhanova SM, Golubenko IA, Zakharova NE. Study of various forms of casein as a pore-forming component of the storage medium for Clostridium novyi. In: Proceedings of the all-Russian scientific-practical conference «Vaccinology 2010. Improving the immunobiological means of prevention, diagnosis and treatment of infectious diseases». Moscow; 2010. P. 108 (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.