biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2019-19-1-28-38biopreparat-203Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESОбоснование методических подходов к экспертной оценке подлинности биомедицинских клеточных продуктовJustification of Methodological Approaches to Identification Testing of Biomedical Cell Productshttps://orcid.org/0000-0002-9585-3545МельниковаЕ. В.MelnikovaE. V.

канд. биол. наук, главный эксперт лаборатории биомедицинских клеточных продуктов Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Candidate of Biological Sciences, Chief Expert of the Laboratory of Biomedical Cell Products of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products’ Quality

cautrin@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8377-9205РачинскаяО. А.RachinskayaO. A.

канд. биол. наук, эксперт 1 категории лаборатории биомедицинских клеточных продуктов Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Candidate of Biological Sciences, 1st Professional Category Expert of the Laboratory of Biomedical Cell Products of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products’ Quality

Rachinskaya@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8922-6342ТрусовГ. А.TrusovG. A.

эксперт 2 категории лаборатории биомедицинских клеточных продуктов Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

2nd Professional Category Expert of the Laboratory of Biomedical Cell Products of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products’ Quality

Trusov@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8222-0805ХорольскийМ. Д.KhorolskyM. D.

старший лаборант лаборатории биомедицинских клеточных продуктов Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Major Laboratorian of the Laboratory of Biomedical Cell Products of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products’ Quality

Horolsky@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9026-0508СеменоваИ. С.SemenovaI. S.

канд. биол. наук, эксперт 1 категории лаборатории биомедицинских клеточных продуктов Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Candidate of Biological Sciences, 1st Professional Category Expert of the Laboratory of Biomedical Cell Products of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Products’ Quality

SemenovaIS@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6932-4965ТерешкинаН. В.TereshkinaN. V.

канд. мед. наук, эксперт 1 категории управления экспертизы безопасности лекарственных средств Центра экспертизы и контроля готовых лекарственных средств

Candidate of Medical Sciences, 1st Professional Category Expert of the Division for Evaluation of Medicinal Products’ Safety of the Center for Examination and Control of Finished Drugs

Tereshkina@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4891-973XМеркуловВ. А.MerkulovV. A.

д-р мед. наук, профессор, заместитель генерального директора по экспертизе лекарственных средств ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России; профессор кафедры фармакологии ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И. М. Сеченова» Минздрава России

Doctor of Medical Sciences, Professor, Deputy General Director for Medicinal Products Evaluation of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products; Professor of the Department of Pharmacology of I. M. Sechenov First MSMU

Merkulov@expmed.ruФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации; Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products; I. M. Sechenov First Moscow State Medical UniversityRussian Federation2019210220191912838Copyright © Мельникова Е.В., Рачинская О.А., Трусов Г.А., Хорольский М.Д., Семенова И.С., Терешкина Н.В., Меркулов В.А., 20192019Мельникова Е.В., Рачинская О.А., Трусов Г.А., Хорольский М.Д., Семенова И.С., Терешкина Н.В., Меркулов В.А.Melnikova E.V., Rachinskaya O.A., Trusov G.A., Khorolsky M.D., Semenova I.S., Tereshkina N.V., Merkulov V.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/203

На каждый разработанный биомедицинский клеточный продукт (БМКП), прошедший доклинические исследования, производитель (разработчик) составляет спецификацию, которая входит в состав регистрационного досье при подаче заявления на государственную регистрацию БМКП. В соответствии с Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 19 января 2017 г. № 14н «Об утверждении формы спецификации на биомедицинский клеточный продукт» спецификация должна содержать сведения об идентичности (подлинности) клеточной линии, входящей в состав БМКП, которая включает: морфологические характеристики, экспрессию специфических маркеров, экспрессию специфических генов, экспрессию специфических белков, а также маркеры стабильности клеточной линии. В Российской Федерации на сегодняшний день отсутствует практический опыт проведения экспертизы качества БМКП. Цель работы: обоснование методических подходов к определению идентичности (подлинности) клеточных линий, входящих в состав БМКП, в рамках экспертизы качества на модельной клеточной линии DF-2 при использовании методов, позволяющих характеризовать морфологический, генетический, иммунофенотипический и цитогенетический профиль клеточной линии. Материалы и методы: объектом исследования была клеточная линия DF-2 — дермальные фибробласты человека (мезенхимные стволовые клетки) — получена из Института цитологии РАН (Санкт-Петербург). В работе использовали следующие методы анализа: морфологический анализ; метод проточной цитометрии для иммунофенотипирования модельной клеточной линии DF-2; метод коротких тандемных повторов для построения аллельного профиля модельной клеточной линии; цитогенетическое исследование — DAPI-дифференциальное окрашивание метафазных хромосом. Результаты: в статье представлены методические подходы к определению подлинности препаратов, содержащих жизнеспособные клетки человека (аналогов БМКП), используемые в мировой практике, а также представлены результаты экспериментального определения показателя «Идентичность (подлинность)» на модельной клеточной линии. Выводы: методы оценки подлинности БМКП должны гарантировать однозначную идентификацию клеточной линии в соответствии с представленной спецификацией. В результате проведенных исследований отработана процедура экспертной оценки идентичности (подлинности) модельной клеточной линии.

The manufacturer (developer) has to prepare a specification for each newly developed biomedical cell product (BCP) that has passed the stage of preclinical studies. The specification is included into the registration dossier when applying for marketing authorisation of a BCP. In accordance with the Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 14n of 19 January 2017 «On approval of the specification format for a biomedical cell product» the specification should contain information about authenticity of the cell line used in the BCP, namely: morphological characteristics, expression of specific markers, expression of specific genes, expression of specific proteins, as well as markers of cell line stability. At present Russia has no practical experience in BCP quality evaluation. The aim of the study was to substantiate methodological approaches to authentication of cell lines used in BCPs as illustrated by quality evaluation of the DF-2 model cell line using test methods that allow for characterisation of the morphological, genetic, immunophenotypic, and cytogenetic profile of the cell line. Materials and methods: the study analysed the DF-2 cell line — human dermal fibroblasts (mesenchymal stem cells) obtained from the Institute of Cytology of the Russian Academy of Sciences (St. Petersburg). The following analytical test methods were used in the study: morphological analysis; flow cytometry for immunophenotyping of the DF-2 model cell line; short tandem repeats for creating an allelic profile of the model cell line; cytogenetic analysis — differential DAPI staining of metaphase chromosomes. Results: the paper summarises methodological approaches to identification testing of medicines containing living human cells (BCP analogues) currently used in international practice, and presents the results of authentication of the model cell line. Conclusions: methods used for BCP identification testing should ensure unambiguous authentication of the cell line according to its specification. The study performed helped to work out the procedure of authentication of a model cell line.

биомедицинский клеточный продуктидентичность (подлинность)экспертиза качестваклеточная линияbiomedical cell productidentificationauthenticationquality evaluationcell lineРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00154-19-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР AAAAA18-118021590045-2)The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-00154-19-00 and was supported by the FSBI «SCEEMP» of the Ministry of Health of Russia (R&D public accounting No. AAAA-A18-118021590045-2)ReferencesMasters JR, Reid YA. Cell line authentication and characterization. eLS. 2014. https://doi.org/10.1002/9780470015902.a0002559.pub2.Masters JR, Reid YA. Cell line authentication and characterization. eLS. 2014. https://doi.org/10.1002/9780470015902.a0002559.pub2.Пинаев ГП. Необходимость соответствия нормативноправового регулирования реальному процессу создания и применения биомедицинских клеточных технологий. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Oвчинникова. 2012;8(3):61–4.Пинаев ГП. Необходимость соответствия нормативноправового регулирования реальному процессу создания и применения биомедицинских клеточных технологий. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Oвчинникова. 2012;8(3):61–4.Гилевич ИВ, Федоренко ТВ, Коломийцева ЕА, Богданов СБ, Поляков ИС, Порханов ВА. Опыт совершенствования оказания помощи ожоговым пациентам в Краснодарском крае. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. С. 21.Гилевич ИВ, Федоренко ТВ, Коломийцева ЕА, Богданов СБ, Поляков ИС, Порханов ВА. Опыт совершенствования оказания помощи ожоговым пациентам в Краснодарском крае. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. С. 21.Ионов ПМ, Юркевич ЮВ, Дейнега ИВ, Беседина НК, Багаева ВВ. Перспективы эндоскопического лечения бронхиальных свищей введением in situ культивированных аллофибробластов. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. С. 45–6.Ионов ПМ, Юркевич ЮВ, Дейнега ИВ, Беседина НК, Багаева ВВ. Перспективы эндоскопического лечения бронхиальных свищей введением in situ культивированных аллофибробластов. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. С. 45–6.Алейник ДЯ, Арефьев ИЮ, Докукина ЛН, Чарыкова ИН, Соловьев РА, Стручков АА, Сидорова ТИ. Опыт использования культивированных фибробластов в комбустиологии (по данным Нижегородского ожогового центра). В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. C. 9.Алейник ДЯ, Арефьев ИЮ, Докукина ЛН, Чарыкова ИН, Соловьев РА, Стручков АА, Сидорова ТИ. Опыт использования культивированных фибробластов в комбустиологии (по данным Нижегородского ожогового центра). В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. C. 9.Вагнер ДО, Зиновьев ЕВ, Солошенко ВВ, Крылов ПК, Костяков ДВ, Юркевич ЮВ и др. Применение аллогенных фибробластов в комплексном лечении пациентов с обширными ожогами. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. C. 20.Вагнер ДО, Зиновьев ЕВ, Солошенко ВВ, Крылов ПК, Костяков ДВ, Юркевич ЮВ и др. Применение аллогенных фибробластов в комплексном лечении пациентов с обширными ожогами. В кн.: Сборник материалов всероссийской конференции с международным участием «StemCellBio-2018: фундаментальная наука как основа клеточных технологий», 15–17 ноября 2018 г., г. Санкт-Петербург. C. 20.Блинова МИ, Юдинцева НМ, Александрова ОИ, Баллюзек МФ, Хабарова ИГ, Маркин СМ, Чагунава ОЛ. Клинический опыт заживления трофических язв с использованием клеточного продукта «Эквивалент дермальный ЭД». Здоровье — основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения. 2015;10(2):690–4.Блинова МИ, Юдинцева НМ, Александрова ОИ, Баллюзек МФ, Хабарова ИГ, Маркин СМ, Чагунава ОЛ. Клинический опыт заживления трофических язв с использованием клеточного продукта «Эквивалент дермальный ЭД». Здоровье — основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения. 2015;10(2):690–4.Блинова МИ, Никольский НН, Михайлова НА. 25-летний опыт применения дермального эквивалента: итоги и перспективы. В кн.: 2-й Национальный Конгресс по регенеративной медицине. Материалы Конгресса. 3–5 декабря 2015 года, Москва. М.: «МЕДИ Экспо»; 2015. С. 33–4.Блинова МИ, Никольский НН, Михайлова НА. 25-летний опыт применения дермального эквивалента: итоги и перспективы. В кн.: 2-й Национальный Конгресс по регенеративной медицине. Материалы Конгресса. 3–5 декабря 2015 года, Москва. М.: «МЕДИ Экспо»; 2015. С. 33–4.Крылова ТА, Мусорина АС, Зенин ВВ, Кольцова АМ, Кропачева ИВ, Турилова ВИ и др. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста. Цитология. 2016;58(11):850–64.Крылова ТА, Мусорина АС, Зенин ВВ, Кольцова АМ, Кропачева ИВ, Турилова ВИ и др. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста. Цитология. 2016;58(11):850–64.Мельцова АЖ, Гриценко ВВ, Орловский ПИ, Томсон ВВ, Сабельников ВВ, Шулепова ЕК и др. Применение дермальных фибробластов в комплексном лечении больных c трофическими язвами венозной этиологии. Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2007;166(1):72–7.Мельцова АЖ, Гриценко ВВ, Орловский ПИ, Томсон ВВ, Сабельников ВВ, Шулепова ЕК и др. Применение дермальных фибробластов в комплексном лечении больных c трофическими язвами венозной этиологии. Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2007;166(1):72–7.Зорин В, Зорина А, Черкасов В, Копнин П, Деев Р, Исаев А и др. Применение аутологичных дермальных фибробластов для коррекции возрастных изменений кожи лица. Результаты годичных исследований. Эстетическая медицина. 2012;XI(2):171–82.Зорин В, Зорина А, Черкасов В, Копнин П, Деев Р, Исаев А и др. Применение аутологичных дермальных фибробластов для коррекции возрастных изменений кожи лица. Результаты годичных исследований. Эстетическая медицина. 2012;XI(2):171–82.Трусов ГА, Чапленко АА, Семенова ИС, Мельникова ЕВ, Олефир ЮВ. Применение проточной цитометрии для оценки качества биомедицинских клеточных продуктов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2018;18(1):16–24. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2018-18-1-16-24Трусов ГА, Чапленко АА, Семенова ИС, Мельникова ЕВ, Олефир ЮВ. Применение проточной цитометрии для оценки качества биомедицинских клеточных продуктов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2018;18(1):16–24. https://doi.org/10.30895/2221-996X-2018-18-1-16-24Ткачук ВА, ред. Методические рекомендации по проведению доклинических исследований биомедицинских клеточных продуктов. М.: МГУ им. М.В. Ломоносова; 2017.Ткачук ВА, ред. Методические рекомендации по проведению доклинических исследований биомедицинских клеточных продуктов. М.: МГУ им. М.В. Ломоносова; 2017.Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315–7. https://doi.org/10.1080/14653240600855905Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 2006;8(4):315–7. https://doi.org/10.1080/14653240600855905Barallon R, Bauer SR, Butler J, Capes-Davis A, Dirks WG, Elmore E, et al. Recommendation of short tandem repeat profiling for authenticating human cell lines, stem cells, and tissues. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2010;46(9):727–32. https://doi.org/10.1007/s11626-010-9333-zBarallon R, Bauer SR, Butler J, Capes-Davis A, Dirks WG, Elmore E, et al. Recommendation of short tandem repeat profiling for authenticating human cell lines, stem cells, and tissues. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2010;46(9):727–32. https://doi.org/10.1007/s11626-010-9333-zМельникова ЕВ, Меркулова ОВ, Меркулов ВА, Олефир ЮВ, Ручко СВ, Бокованов ВЕ. Идентификация клеточных линий человека с использованием метода генотипирования короткими тандемными повторами: мировая практика. Биофармацевтический журнал. 2015;7(6):3–10.Мельникова ЕВ, Меркулова ОВ, Меркулов ВА, Олефир ЮВ, Ручко СВ, Бокованов ВЕ. Идентификация клеточных линий человека с использованием метода генотипирования короткими тандемными повторами: мировая практика. Биофармацевтический журнал. 2015;7(6):3–10.Sumner AT. Chromosome banding and identification absorption staining. In: Gosden JR, ed. Chromosome Analysis Protocols. Methods in Molecular Biology™. Vol. 29. Totowa: Humana Press; 1994. P. 59–81. https://doi.org/10.1385/0-89603-289-2:59Sumner AT. Chromosome banding and identification absorption staining. In: Gosden JR, ed. Chromosome Analysis Protocols. Methods in Molecular Biology™. Vol. 29. Totowa: Humana Press; 1994. P. 59–81. https://doi.org/10.1385/0-89603-289-2:59Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях. Монография. Рахманин ЮА, Сычева ЛП, ред. М.: Гениус; 2007.Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях. Монография. Рахманин ЮА, Сычева ЛП, ред. М.: Гениус; 2007.Theisen A. Microarray-based comparative genomic hybridization (aCGH). Nature Education. 2008;1(1):45.Theisen A. Microarray-based comparative genomic hybridization (aCGH). Nature Education. 2008;1(1):45.Гинтер ЕК, Золотухина ТВ, Антоненко ВГ, Шилова НВ, Цветкова ТГ, Жулева ЛЮ. Цитогенетические методы диагностики хромосомных болезней. Методическое пособие для врачей. М.; 2009.Гинтер ЕК, Золотухина ТВ, Антоненко ВГ, Шилова НВ, Цветкова ТГ, Жулева ЛЮ. Цитогенетические методы диагностики хромосомных болезней. Методическое пособие для врачей. М.; 2009.Мамаева СЕ. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре. Цитология. 1996;38(8):787–814.Мамаева СЕ. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре. Цитология. 1996;38(8):787–814.Moskalev AA, Shaposhnikov MV, Plyusnina EN, Zhavoronkov A, Budovsky A, Yanai H, Fraifeld VE. The role of DNA damage and repair in aging through the prism of Koch-like criteria. Ageing Res Rev. 2013;12(2):661–84. https://doi.org/10.1016/j.arr.2012.02.001Moskalev AA, Shaposhnikov MV, Plyusnina EN, Zhavoronkov A, Budovsky A, Yanai H, Fraifeld VE. The role of DNA damage and repair in aging through the prism of Koch-like criteria. Ageing Res Rev. 2013;12(2):661–84. https://doi.org/10.1016/j.arr.2012.02.001

The authors declare that there are no conflicts of interest present.