biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2018-18-4-249-256biopreparat-197Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИспользование наборов реагентов для ОТ-ПЦР в реальном времени для оценки подлинности вакцин против кори, паротита и краснухиUsing Real-Time RT-PCR Reagent Kits for Identity Testing of Measles, Mumps and Rubella Vaccineshttps://orcid.org/0000-0003-3011-2030БинятоваА. С.BinyatovaA. S.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

эксперт 2 категории лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

2nd Professional Category Expert of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

Binyatova@expmed.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1253-0650МыцаЕ. Д.MytsaE. D.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

канд. биол. наук, эксперт 1 категории лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний Испытательного центра экспертизы качества МИБП

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Candidate of Biological Sciences, 1st Professional Category Expert of the Laboratory of Molecular Biology and Genetic Test Methods of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0002-9279-9408ЧертоваН. В.ChertovaN. V.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

эксперт 2 категории лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний Испытательного центра экспертизы качества МИБП

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

2nd Professional Category Expert of the Laboratory of Molecular Biology and Genetic Test Methods of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0001-8698-2890ВолковаР. А.VolkovaR. A.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

д-р биол. наук, начальник лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний Испытательного центра экспертизы качества МИБП 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Doctor of Biological Sciences, Head of the Laboratory of Molecular Biology and Genetic Test Methods of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0003-0445-7086СаркисянК. А.SarkisyanK. A.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

канд. мед. наук, начальник лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Candidate of Medical Sciences, Head of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0002-0905-3630ИльясоваТ. Н.IlyasovaT. N.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

эксперт 1 категории лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

1st Professional Category Expert of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0002-1606-942XЮнасоваТ. Н.YunasovaT. N.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

канд. биол. наук, главный эксперт лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Candidate of Biological Sciences, Chief Expert of the Laboratory of Viral Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0003-2132-0962МовсесянцА. А.MovsesyantsA. A.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

д-р мед. наук, профессор, начальник Испытательного центра экспертизы качества МИБП 

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

Doctor of Medical Sciences, Professor, Head of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products’ Quality

https://orcid.org/0000-0003-4891-973XМеркуловВ. А.MerkulovV. A.

Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051

Трубецкая ул., д. 8, стр. 2, Москва, 119991

д-р мед. наук, профессор, заместитель генерального директора по экспертизе лекарственных средств

профессор кафедры фармакологии

8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051

8/2 Trubetskaya Street, Moscow 119991

Doctor of Medical Sciences, Professor, Deputy General Director for Medicinal Products Evaluation

Professor of the Department of Pharmacology

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal ProductsRussian FederationФедеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации; Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияScientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products; I. M. Sechenov First Moscow State Medical UniversityRussian Federation201819122018184249256Copyright © Бинятова А.С., Мыца Е.Д., Чертова Н.В., Волкова Р.А., Саркисян К.А., Ильясова Т.Н., Юнасова Т.Н., Мовсесянц А.А., Меркулов В.А., 20182018Бинятова А.С., Мыца Е.Д., Чертова Н.В., Волкова Р.А., Саркисян К.А., Ильясова Т.Н., Юнасова Т.Н., Мовсесянц А.А., Меркулов В.А.Binyatova A.S., Mytsa E.D., Chertova N.V., Volkova R.A., Sarkisyan K.A., Ilyasova T.N., Yunasova T.N., Movsesyants A.A., Merkulov V.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/197

В настоящее время подлинность вирусных вакцин против кори, паротита и краснухи при сертификационных испытаниях определяют с помощью трудоемкой, длительной и дорогостоящей реакции нейтрализации на культуре клеток. Подлинность вируса в этих вакцинах устанавливают на основании нейтрализации цитопатогенного действия вирусов на чувствительной культуре клеток RK-13 и Vero специфической иммунной сывороткой. Упростить и удешевить контроль подлинности коммерческих серий вакцин для профилактики кори, паротита и краснухи с помощью ПЦР-тестирования представляется перспективной задачей. Целью работы было определение возможности выявления вирусной РНК в указанных вакцинах с помощью наборов реагентов разных производителей, предназначенных для выявления вирусов кори, паротита и краснухи в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР). В статье представлены результаты работы по оценке возможности использования метода ОТ-ПЦР для определения подлинности вирусов кори, паротита и краснухи в вакцинах. Были изучены отечественные и зарубежные наборы реагентов, предназначенные для выявления вирусов кори, паротита и краснухи в клиническом материале. Все изучавшиеся наборы реагентов выявляли рибонуклеиновые кислоты (РНК) названных вирусов в вакцинных препаратах. Показана высокая специфичность использовавшихся наборов реагентов и возможность их применения для подтверждения подлинности вирусов кори, паротита и краснухи во всех исследованных вакцинах. Для оценки подлинности вакцин против краснухи методом ОТ-ПЦР могут быть использованы коммерческие отечественные наборы реагентов. Для оценки подлинности вакцин против кори и паротита методом ОТ-ПЦР целесообразна разработка отечественных наборов реагентов. При оценке приемлемости результатов испытаний использовали отраслевые стандартные образцы активности вирусов кори, паротита и краснухи со стабильной аттестованной активностью.

Currently, the identity of measles, mumps and rubella virus vaccines is determined during certification testing by a labour-consuming, lengthy and costly neutralisation test using cell cultures. The identity of the virus contained in such vaccines is established based on neutralisation of cytopathic effect of viruses in sensitive RK-13 and Vero cell cultures using a specific immune serum. An urgent challenge is to simplify and reduce the cost of controlling the identity of commercial batches of measles, mumps and rubella vaccines using polymerase chain reaction (PCR) tests. The aim of the study was to determine the possibility of viral ribonucleic acid (RNA) detection in these vaccines using reagent kits from different manufacturers for detection of measles, mumps and rubella viruses in clinical material by real-time reverse transcription-PCR (RT-PCR). The article presents the results of the study, which assessed the possibility of using the real-time RT-PCR for testing the identity of measles, mumps and rubella viruses in vaccines. The authors of the study analysed domestically produced and foreign reagent kits intended for detection of measles, mumps and rubella viruses in clinical material. All the studied reagent kits were able to detect RNAs of the above-mentioned viruses in vaccine products. All the reagent kits demonstrated high specificity and could be used to confirm the identity of the measles, mumps and rubella viruses in all the studied vaccines. Commercial domestic reagent kits can be used to determine the identity of rubella vaccines by RT-PCR. However, it is advisable to develop domestic reagent kits for checking the identity of measles and mumps vaccines by RT-PCR. The acceptability of the test results was assessed using the industry reference standards of measles, mumps and rubella viruses activity with certified stable activity values.

ОТ-ПЦРподлинность вируса в вакциневакцина коревая живаявакцина паротитная живаявакцина против краснухи живаядиагностические наборы реагентовотраслевые стандартные образцыRT-PCRidentity of viruses in vaccineslive measles vaccinelive mumps vaccinelive rubella vaccinediagnostic reagent kitsindustry reference standardsРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-000-23-18-02 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР AAAA-A18-118021590046-9).The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-000-23-18-02 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. AAAA-A18-118021590046-9).ReferencesМовсесянц АА, Бондарев ВП, Олефир ЮВ, Меркулов ВА, Шимчук ЛФ. Стандарты качества иммунобиологических лекарственных препаратов — новое в Государственной фармакопее Российской Федерации. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2016;(2):38–41. [Movsesyants AA, Bondarev VP, Olefir YV, Merkulov VA, Shimchuk LF. Quality Standards for Immunobiological Medicinal Products — New Texts in the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = Тhе Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2016;(2):38–41 (In Russ.)]Мовсесянц АА, Бондарев ВП, Олефир ЮВ, Меркулов ВА, Шимчук ЛФ. Стандарты качества иммунобиологических лекарственных препаратов — новое в Государственной фармакопее Российской Федерации. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2016;(2):38–41. [Movsesyants AA, Bondarev VP, Olefir YV, Merkulov VA, Shimchuk LF. Quality Standards for Immunobiological Medicinal Products — New Texts in the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = Тhе Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2016;(2):38–41 (In Russ.)]Забияка ЮИ, Файзулоев ЕБ, Борисова ТК, Никонова АА, Зверев ВВ. Экспресс-метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010;(5):57–62. [Zabiyaka YI, Faizuloev EB, Borisova TK, Nikonova AA, Zverev VV. Quick Test for Measurement of Rubella Virus Titer in Virus-Containing Fluid Using RT-PCR. Zhurnal mikrobiologii, ehpidemiologii i immunobiologii = Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2010;(5):57–62 (In Russ.)]Забияка ЮИ, Файзулоев ЕБ, Борисова ТК, Никонова АА, Зверев ВВ. Экспресс-метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2010;(5):57–62. [Zabiyaka YI, Faizuloev EB, Borisova TK, Nikonova AA, Zverev VV. Quick Test for Measurement of Rubella Virus Titer in Virus-Containing Fluid Using RT-PCR. Zhurnal mikrobiologii, ehpidemiologii i immunobiologii = Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2010;(5):57–62 (In Russ.)]Аммур ЮИ, Борисова ТК, Файзулоев ЕБ, Зверев ВВ. Количественное определение вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи в вируссодержащих жидкостях на основе ПЦР с детекцией в режиме реального времени. В кн.: Материалы конференций молодых ученых. Киров: Международный центр научно-исследовательских проектов; 2013. С. 8–26. [Ammur YI, Borisova TK, Faizuloev EB, Zverev VV. The quantitative determination of measles, mumps and rubella in virus-containing fluids by RT-PCR. In: Materials of conferences of young scientists. Kirov: International center for research projects; 2013. P. 8–26 (In Russ.)]Аммур ЮИ, Борисова ТК, Файзулоев ЕБ, Зверев ВВ. Количественное определение вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи в вируссодержащих жидкостях на основе ПЦР с детекцией в режиме реального времени. В кн.: Материалы конференций молодых ученых. Киров: Международный центр научно-исследовательских проектов; 2013. С. 8–26. [Ammur YI, Borisova TK, Faizuloev EB, Zverev VV. The quantitative determination of measles, mumps and rubella in virus-containing fluids by RT-PCR. In: Materials of conferences of young scientists. Kirov: International center for research projects; 2013. P. 8–26 (In Russ.)]Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика; 1998. [Glantz S. Primer of Biostatistics. Moscow: Praktika; 1998 (In Russ.)]Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика; 1998. [Glantz S. Primer of Biostatistics. Moscow: Praktika; 1998 (In Russ.)]

The authors declare that there are no conflicts of interest present.