biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products10.30895/2221-996X-2018-18-2-92-97biopreparat-135Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESХарактеристика кандидата в стандартные образцы аллергена из пыльцы тимофеевки луговой по белковому профилю и специфическим аллергенным компонентамCharacterization of the Candidate Reference Material of Timothy Pollen Allergen Extract in Terms of Protein Profile and Specific Allergenic ComponentsЦымбаревичИ. В.TcymbarevichI. V.

Главный специалист-эксперт по экспериментальным технологиям отдела инновационных проектов Центра разработок и внедрения (R&D)

ул. 1-я Дубровская, д. 15, Москва, 115088, Российская Федерация

Chief Expert in Experimental Technologies of the Department of Innovation Projects of the Centre for R&D Implementation

15 1st Dubrovskaya St, Moscow 115088, Russian Federation

ЕфимоваИ. С.EfimovaI. S.

Начальник отдела инновационных проектов Центра разработок и внедрения  (R&D), канд. хим. наук

ул. 1-я Дубровская, д. 15, Москва, 115088, Российская Федерация

Head of the Department of Innovation Projects of the Centre for R&D Implementation. Candidate of Chemical Sciences

15 1st Dubrovskaya St, Moscow 115088, Russian Federation

КалининС. П.KalininS. P.

Директор Центра разработок и внедрения (R&D), канд. техн. наук

ул. 1-я Дубровская, д. 15, Москва, 115088, Российская Федерация

Director of the Centre for R&D Implementation. Candidate of Technical Sciences

15 1st Dubrovskaya St, Moscow 115088, Russian Federation

ЗубковА. В.ZubkovA. V.

Заведующий лабораторией иммунологической диагностики эндокринных заболеваний, канд. мед. наук

Малый Казенный пер., 5А, стр. 2, Москва, 105064, Российская Федерация

Head of the Laboratory of Immunological Diagnosis of Endocrine Disorders. Candidate of Medical Sciences

5A/2 Maly Kazenny lane, Moscow 105064, Russian Federation

МазуринаС. А.MazurinaS. A.

Ведущий научный сотрудник лаборатории аллергодиагностики, канд. биол. наук

Малый Казенный пер., 5А, стр. 2, Москва, 105064, Российская Федерация

Leading Researcher of the Laboratory of Allergy Diagnosis. Candidate of Biological Sciences

5A/2 Maly Kazenny lane, Moscow 105064, Russian Federation

МихайловаН. А.MikhailovaN. A.

Заместитель директора института по научной работе, д-р мед. наук, профессор

Малый Казенный пер., 5А, стр. 2, Москва, 105064, Российская Федерация

Deputy Director of the Scientific Research Institute. Doctor of Medical Sciences, Professor

5A/2 Maly Kazenny lane, Moscow 105064, Russian Federation

ЗубковаН. В.ZubkovaN. V.

Заместитель директора Центра разработок и внедрения (R&D) по технологиям, д- р фарм. наук

ул. 1-я Дубровская, д. 15, Москва, 115088, Российская Федерация

Deputy Director of the Centre for R&D Implementation. Doctor of Pharmaceutical Sciences

15 1st Dubrovskaya St, Moscow 115088, Russian Federation

Акционерное общество «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»РоссияMicrogen Scientific Industrial Company for Immunobiological MedicinesRussian FederationФедеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»РоссияMechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian Federation2018210620181829297Copyright © Цымбаревич И.В., Ефимова И.С., Калинин С.П., Зубков А.В., Мазурина С.А., Михайлова Н.А., Зубкова Н.В., 20182018Цымбаревич И.В., Ефимова И.С., Калинин С.П., Зубков А.В., Мазурина С.А., Михайлова Н.А., Зубкова Н.В.Tcymbarevich I.V., Efimova I.S., Kalinin S.P., Zubkov A.V., Mazurina S.A., Mikhailova N.A., Zubkova N.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/135

Лекарственные препараты на основе пыльцевых экстрактов аллергенов широко применяются для лечения и диагностики поллинозов. Согласно требованиям  Государственной фармакопеи Российской Федерации XIII издания аллергенную активность  этих препаратов оценивают относительно аттестованных стандартных образцов (СО),  биологическая активность которых была подтверждена in vivo у лиц, сенсибилизированных  к исследуемому аллергену. Кандидат в СО тимофеевки луговой в виде готовой лекарственной формы (ГЛФ) и соответствующий аллергенный пыльцевой экстракт  (полуфабрикат) были охарактеризованы по белковому профилю и аллергенному составу  методами электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и вестерн-блота. Исследование проводили в сравнении с ГЛФ,  аллергенными пыльцевыми экстрактами разных периодов сбора пыльцы и даты выпуска, а  также международным стандартом аллергена из пыльцы тимофеевки луговой (NIBSC code:  82/520). Методами электрофореза в ПААГ и ВЭЖХ выявлено совпадение белковых профилей кандидата в СО по основным белковым фракциям со всеми аллергенными экстрактами и  ГЛФ разных дат выпуска. Метод ВЭЖХ подтвердил сходство белковых профилей кандидата в СО и международного стандарта аллергена из пыльцы тимофеевки луговой (NIBSC code:  82/520), показав некоторые различия в соотношении основных белковых фракций. Методом вестерн-блота подтверждено наличие главных специфических аллергенных компонентов с  относительными молекулярными массами в области 50–60 и 27–35 кДа. Состав  специфических аллергенных компонентов препаратов тимофеевки производства АО «НПО  «Микроген» по основным белковым и аллергенным компонентам совпадал с международным стандартом аллергена из пыльцы тимофеевки луговой (NIBSC code: 82/520).

Medicinal products based on pollen allergen extracts are widely used for diagnosis and therapy of pollinosis. According to the  requirements of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation,  13th ed., the allergenic potency of such products is assessed against certified reference materials whose biological activity was confirmed in vivo in subjects sensitized to particular tested allergens. The finished dosage form of a candidate In-House Reference Material (IHRM) of timothy pollen allergen extract and the corresponding  allergen pollen extract (intermediate) were characterized in terms of  protein profile and allergenic composition using SDS-PAGE, gel- filtration HPLC, and western blotting. The test samples were  compared to finished pharmaceutical products (FPP) and pollen  allergen extracts produced at different dates and made from pollen  harvested at different dates, as well as to the WHO International  Standard (IS) of Timothy Pollen Extract (NIBSC code: 82/520). SDS- PAGE and gelfiltration HPLC showed that the candidate IHRM protein  profile was comparable in terms of major protein fractions to those  of all the FPP batches and pollen allergen extracts produced at  different dates. HPLC confirmed the comparability of the protein  profiles of the candidate IHRM and the IS (NIBSC code: 82/520), but showed minor  variations in the ratio of the main protein fractions.  Western blotting confirmed the presence of the main allergenic components with relative molecular masses ranging from 50 to 60  kDa and from 27 to 35 kDa. The composition of specific allergenic  components of timothy pollen allergen products manufactured by  JSC «SIC «Microgen» was identical with that of the WHO IS of  Timothy Pollen Extract in terms of the main protein and allergenic  components. 

стандартизациятимофеевкааллергенные компонентыаллергенный пыльцевой экстрактстандартный образецstandardizationtimothyallergenic componentspollen allergen extractreference materialsReferencesD’Amato G, Cecchi L, Bonini S, Nunes C, Annesi-Maesano I, Behrendt H, et al. Allergenic Pollen and Pollen Allergy in Europe. Allergy 2007;62(9):976–90. DOI: 10.1111/j.1398-9995.2007.01393.xD’Amato G, Cecchi L, Bonini S, Nunes C, Annesi-Maesano I, Behrendt H, et al. Allergenic Pollen and Pollen Allergy in Europe. Allergy 2007;62(9):976–90. DOI: 10.1111/j.1398-9995.2007.01393.xGjesing B, Jäger L, Marsh DG, Løwenstein H. The International Collaborative Study Establishing the First International Standard for Timothy (Phleum pratense) Grass Pollen Allergenic Extract. J Allergy Clin Immunol. 1985;75(2):258–67.Gjesing B, Jäger L, Marsh DG, Løwenstein H. The International Collaborative Study Establishing the First International Standard for Timothy (Phleum pratense) Grass Pollen Allergenic Extract. J Allergy Clin Immunol. 1985;75(2):258–67.Невская ЛВ, Радунская СФ, Лавренчик ЕИ, Мовсесянц АА, Капитанова ВК, Короткова МЮ. Применение иммуноанализа для решения актуальных проблем стандартизации препаратов аллергенов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2015;(3):17–20. [Nevskaya LV, Radunskaya SF, Lavrenchik EI, Movsesyants AA, Kapitanova VK, Korotkova MYu. Immunoassay for the Purpose of Solving Current Issues Associated with Standardization of Allergen Preparations. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2015;(3):17–20 (in Russ.)] DOI: 10.30895/2221-996X-2015-3-17-20Невская ЛВ, Радунская СФ, Лавренчик ЕИ, Мовсесянц АА, Капитанова ВК, Короткова МЮ. Применение иммуноанализа для решения актуальных проблем стандартизации препаратов аллергенов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2015;(3):17–20. [Nevskaya LV, Radunskaya SF, Lavrenchik EI, Movsesyants AA, Kapitanova VK, Korotkova MYu. Immunoassay for the Purpose of Solving Current Issues Associated with Standardization of Allergen Preparations. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2015;(3):17–20 (in Russ.)] DOI: 10.30895/2221-996X-2015-3-17-20Общая фармакопейная статья 1.7.1.0001.15 Аллергены. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2, М.; 2015. [General Monograph 1.7.1.0001.15 Allergens. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 2. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.7.1.0001.15 Аллергены. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2, М.; 2015. [General Monograph 1.7.1.0001.15 Allergens. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 2. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.0023.15 SDS-PAGE. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.0023.15 SDS-PAGE. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2, М.; 2015. [General Monograph 1.7.2.0022.15 Characterization and Purity Determination of Biotherapeutics by Immunoblotting. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 2. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2, М.; 2015. [General Monograph 1.7.2.0022.15 Characterization and Purity Determination of Biotherapeutics by Immunoblotting. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 2. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.2.0001.15 Хроматография. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.2.0001.15 Chromatography. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.2.0001.15 Хроматография. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.2.0001.15 Chromatography. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.2.0005.15 Высокоэффективная жидкостная хроматография. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.2.0005.15 High- Performance Liquid Chromatography. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlОбщая фармакопейная статья 1.2.1.2.0005.15 Высокоэффективная жидкостная хроматография. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1, М.; 2015. [General Monograph 1.2.1.2.0005.15 High- Performance Liquid Chromatography. The State Pharmacopoeia of Russian Federation 13th ed. V. 1. Moscow; 2015 (in Russ.)] Available from: http://www.femb.ru/femlFocke M, Marth K, Flicker S, Valenta R. Heterogeneity of Commercial Timothy Grass Pollen Extracts. Clin Exp Allergy 2008;38(8):1400–8. DOI: 10.1111/j.1365-2222.2008.03031.xFocke M, Marth K, Flicker S, Valenta R. Heterogeneity of Commercial Timothy Grass Pollen Extracts. Clin Exp Allergy 2008;38(8):1400–8. DOI: 10.1111/j.1365-2222.2008.03031.xMatthiesen F, Løwenstein H. Group V Allergens in Grass Pollens. I. Purification and Characterization of the Group V Allergen from Phleum pratense Pollen, Phl p V. Clin Exp Allergy 1991;21(3):297–307.Matthiesen F, Løwenstein H. Group V Allergens in Grass Pollens. I. Purification and Characterization of the Group V Allergen from Phleum pratense Pollen, Phl p V. Clin Exp Allergy 1991;21(3):297–307.Suck R, Petersen A, Hagen S, Cromwell O, Becker WM, Fiebig H. Complementary DNA Cloning and Expression of a Newly Recognized High Molecular Mass Allergen Phl p 13 from Timothy Grass Pollen (Phleum pratense). Clin Exp Allergy 2000;30(3):324–32.Suck R, Petersen A, Hagen S, Cromwell O, Becker WM, Fiebig H. Complementary DNA Cloning and Expression of a Newly Recognized High Molecular Mass Allergen Phl p 13 from Timothy Grass Pollen (Phleum pratense). Clin Exp Allergy 2000;30(3):324–32.Suck R, Hagen S, Cromwell O, Fiebig H. The High Molecular Mass Allergen Fraction of Timothy Grass Pollen (Phleum pratense) between 50–60 kDa is Comprised of Two Major Allergens: Phl p 4 and Phl p 13. Clin Exp Allergy. 2000;30(10):1395–402.Suck R, Hagen S, Cromwell O, Fiebig H. The High Molecular Mass Allergen Fraction of Timothy Grass Pollen (Phleum pratense) between 50–60 kDa is Comprised of Two Major Allergens: Phl p 4 and Phl p 13. Clin Exp Allergy. 2000;30(10):1395–402.Sekerkova A, Polackova M, Striz I. Detection of Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7 and Phl p 12 Specific IgE Antibodies in the Sera of Children and Adult Patients Allergic to Phleum Pollen. Allergol Int. 2012;61(2):339–46. DOI: 10.2332/allergolint.11-OA-0372Sekerkova A, Polackova M, Striz I. Detection of Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7 and Phl p 12 Specific IgE Antibodies in the Sera of Children and Adult Patients Allergic to Phleum Pollen. Allergol Int. 2012;61(2):339–46. DOI: 10.2332/allergolint.11-OA-0372Valenta R, Duchene M, Ebner C, Valent P, Sillaber C, Deviller P, et al. Profilins Constitute a Novel Family of Functional Plant Pan-allergens. J Exp Med. 1992;175(2):377–85.Valenta R, Duchene M, Ebner C, Valent P, Sillaber C, Deviller P, et al. Profilins Constitute a Novel Family of Functional Plant Pan-allergens. J Exp Med. 1992;175(2):377–85.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.