biopreparatБИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечениеBiological Products. Prevention, Diagnosis, Treatment2221-996X2619-1156Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Productsbiopreparat-110Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESЭкстракт цикламена европейского (Cyclamen purpurascens) в качестве адъюванта при интраназальной иммунизации мышей гриппозными антигенамиCyclamen europaeum (Cyclamen purpurascens) extract as adjuvant for nasal immunization of mice with influenza antigensГудымоА. С.GudymoA. S.

Аспирант, младший научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной иммунологии отдела зоонозных инфекций и гриппа

PhD student, Junior Research Scientist of the Laboratory of Molecular and Cellular Immunologyof the Department of Zoonotic Diseases and Influenza

gudymo_as@vector.nsc.ruМальцевС. В.MaltsevS. V.

Научный сотрудник лаборатории молекулярной и клеточной иммунологии отдела зоонозных инфекций и гриппа

Research Scientist of the Laboratory of Molecular and Cellular Immunology of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza

noemail@neicon.ruЕвсеенкоВ. А.EvseenkoV. A.

Заведующий лабораторией зоонозных инфекций отдела зоонозных инфекций и гриппа, канд. биол. наук

Head of the Laboratory of Zoonotic Diseases of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruДанильченкоН. В.DanilchenkoN. V.

Младший научный сотрудник лаборатории серологических методов анализа отдела зоонозных инфекций и гриппа

Junior Research Scientist of the Laboratory of Serological Test Methods of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza

noemail@neicon.ruМарченкоВ. Ю.MarchenkoV. Y.

Заведующий лабораторией гриппа отдела зоонозных инфекций и гриппа, канд. биол. наук

Head of the Laboratory of Influenza of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruДурымановА. Г.DurymanovA. G.

Старший научный сотрудник лаборатории серодиагностики гриппа отдела зоонозных инфекций и гриппа

Senior Research Scientist of the Laboratory of Influenza Serodiagnostics of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza

noemail@neicon.ruРыжиковА. Б.RyzhikovA. B.

Заведующий отделом зоонозных инфекций и гриппа, канд. биол. наук

Head of the Department of Zoonotic Diseases and Influenza. Candidate of Biological Sciences

noemail@neicon.ruГосударственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»РоссияState Research Center of Virology and Biotechnology «Vector»Russian Federation201720022018174233239Copyright © Гудымо А.С., Мальцев С.В., Евсеенко В.А., Данильченко Н.В., Марченко В.Ю., Дурыманов А.Г., Рыжиков А.Б., 20182018Гудымо А.С., Мальцев С.В., Евсеенко В.А., Данильченко Н.В., Марченко В.Ю., Дурыманов А.Г., Рыжиков А.Б.Gudymo A.S., Maltsev S.V., Evseenko V.A., Danilchenko N.V., Marchenko V.Y., Durymanov A.G., Ryzhikov A.B.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.biopreparations.ru/jour/article/view/110

В статье описано первое использование сока и экстракта клубней цикламена европейского (Cyclamen purpurascens) в качестве адъюванта при интраназальной иммунизации мышей гриппозными антигенами. Для иммунизации использовали концентрацию антигенов 300 мкг/мл каждого субтипа. Адъювант добавлялся в концентрации 10 и 20 мг/мл. Сыворотки крови изучали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и иммуноферментном анализе (ИФА). После двух иммунизаций дозой 7,5 мкг максимальные обратные титры к H1/H3/B-компонентам в РТГА составили 320/80/80 соответственно. Введение интраназального препарата сравнения без адъюванта не привело к сероконверсии, детектируемой в РТГА. В сыворотках крови мышей, иммунизированных интраназально препаратом сравнения без адъюванта, не отмечено достоверного нарастания уровня антител между первым и вторым введением. В группах, иммунизированных интраназально препаратом, содержащим 10 мг/мл (0,5 мг в 1 дозе, объемом 50 мкл) адъюванта, отмечено значимое нарастание уровня антител между однократной и двукратной иммунизацией для всех компонентов, детектированных в ИФА, а средние уровни антител сопоставимы с ответом, полученным на однократное внутримышечное введение дозы препарата, содержащей 5 мкг каждого антигена. Несмотря на разброс значений титров сывороток крови между животными, который мы связываем с невозможностью стандартного внесения 50 мкл препарата в носоглотку мыши, применение экстракта в качестве адъюванта при интраназальной иммунизации мышей высококонцентрированными гриппозными антигенами показало выраженный гуморальный ответ. Уровень этого ответа после двукратной иммунизации у некоторых животных сравним с ответом на гриппозные вакцины при внутримышечном введении. Полученные данные позволяют рассматривать сок и экстракт клубней цикламена европейского или его синтетические аналоги для дальнейших исследований на морских свинках, хорьках или других животных-моделях с целью разработки эффективного адъюванта для интраназальной вакцинации.

The article describes the first attempt to use the juice and extract of Cyclamen europaeum (Cyclamen purpurascens) tubers as an adjuvant for intranasal immunization of mice with influenza antigens. The concentration of antigens used for immunization was 300 μg/ml for each subtype. The adjuvant was added at the concentration of 10 and 20 mg/ml. Blood serum was studied using the hemagglutination inhibition reaction (HI) and enzyme immunoassay (ELISA). After two immunizations with a dose of 7.5 μg, the maximum inverse titers to the H1/H3/B components in the HI were 320/80/80, respectively. The administration of an intranasal comparator without an adjuvant did not result in seroconversion which can be detected by the HI. The analysis of the blood sera of mice, immunized intranasally by the antigen only, showed no increase in the antibody levels between the first and second injections. For mice immunized intranasally by a preparation containing 10 mg/ml (0.5 mg per 50 μl dose) of adjuvant the ELISA detected a significant growth of antibody levels for all components, and GMT antibody levels were comparable to GMT antibody levels after a single intramuscular injection of 5 μg of each antigen. Despite a significant serum titer dispersion (which the authors explain by the impossibility of ensuring absolute uniformity in administration of 50 μl of substance via the nasal route) the use of the extract as an adjuvant for intranasal immunization of mice with highly concentrated influenza antigens showed a significant humoral response. The level of this response after two immunizations in some animals was comparable to that after intramuscular administration. The obtained data open the possibility of using Cyclamen europaeum tuber extract or its chemical analogues in further studies in guinea pigs, ferrets or other animal models in order to develop an efficacious adjuvant for intranasal immunization.

экстрактцикламенвакцинаадъювантинтраназальныйиммунизациягриппреспираторныйинфекцияextractcyclamenvaccineadjuvantintranasalimmunizationinfluenzarespiratoryinfectionReferencesOsterholm MT, Kelley NS, Sommer A, Belongia EA. Efficacy and effectiveness of influenza vaccines: a systematic review and meta-analysis. Lancet Infect Dis. 2012; 12(1): 36-44.Osterholm MT, Kelley NS, Sommer A, Belongia EA. Efficacy and effectiveness of influenza vaccines: a systematic review and meta-analysis. Lancet Infect Dis. 2012; 12(1): 36–44.Darvishian M, Dijkstra F, van Doorn E, Bijlsma MJ, Donker GA, de Lange MM, et al. Influenza vaccine effectiveness in the Netherlands from 2003/2004 through 2013/2014: The importance of circulating influenza virus types and subtypes. PLoS One 2017; 12(1): e0169528.Darvishian M, Dijkstra F, van Doorn E, Bijlsma MJ, Donker GA, de Lange MM, et al. Influenza vaccine effectiveness in the Netherlands from 2003/2004 through 2013/2014: The importance of circulating influenza virus types and subtypes. PLoS One 2017; 12(1): e0169528.Raymond DD, Stewart SM, Lee J, Ferdman J, Bajic G, Do KT, et al. Influenza immunization elicits antibodies specific for an egg-adapted vaccine strain. Nat Med. 2016; 22(12): 1465-9.Raymond DD, Stewart SM, Lee J, Ferdman J, Bajic G, Do KT, et al. Influenza immunization elicits antibodies specific for an egg-adapted vaccine strain. Nat Med. 2016; 22(12): 1465–9.Lee J, Boutz DR, Chromikova V, Joyce MG, Vollmers C, Leung K, et al. Molecular-level analysis of the serum antibody repertoire in young adults before and after seasonal influenza vaccination. Nat Med. 2016; 22(12): 1456-64.Lee J, Boutz DR, Chromikova V, Joyce MG, Vollmers C, Leung K, et al. Molecular-level analysis of the serum antibody repertoire in young adults before and after seasonal influenza vaccination. Nat Med. 2016; 22(12): 1456–64.Glück R. Intranasal immunization against influenza. J Aerosol Med. 2002; 15(2): 221-8.Glück R. Intranasal immunization against influenza. J Aerosol Med. 2002; 15(2): 221–8.Glück U, Gebbers JO, Glück R. Phase 1 evaluation of intranasal virosomal influenza vaccine with and without Escherichia coli heat-labile toxin in adult volunteers. J Virol. 1999; 73(9): 7780-6.Glück U, Gebbers JO, Glück R. Phase 1 evaluation of intranasal virosomal influenza vaccine with and without Escherichia coli heat-labile toxin in adult volunteers. J Virol. 1999; 73(9): 7780–6.Mutsch M, Zhou W, Rhodes P, Bopp M, Chen RT, Linder T, et al. Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell’s palsy in Switzerland. № Engl J Med. 2004; 350(9): 896-903.Mutsch M, Zhou W, Rhodes P, Bopp M, Chen RT, Linder T, et al. Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell’s palsy in Switzerland. ¹ Engl J Med. 2004; 350(9): 896–903.Augustin JM, Kuzina V, Andersen SB, Bak S. Molecular activities, biosynthesis and evolution of triterpenoid saponins. Phytochemistry 2011; 72(6): 435-57.Augustin JM, Kuzina V, Andersen SB, Bak S. Molecular activities, biosynthesis and evolution of triterpenoid saponins. Phytochemistry 2011; 72(6): 435–57.Vajdy M, Srivastava I, Polo J, Donnelly J, O’Hagan D, Singh M. Mucosal adjuvants and delivery systems for protein-, DNA- and RNA-based vaccines. Immunol Cell Biol. 2004; 82(6): 617-27.Vajdy M, Srivastava I, Polo J, Donnelly J, O’Hagan D, Singh M. Mucosal adjuvants and delivery systems for protein-, DNA- and RNA-based vaccines. Immunol Cell Biol. 2004; 82(6): 617–27.Hamouda T, Chepurnov A, Mank N, Knowlton J, Chepurnova T, Myc A, et al. Efficacy, immunogenicity and stability of a novel intranasal nanoemulsion-adjuvanted influenza vaccine in a murine model. Hum Vaccin. 2010; 6(7): 585-94.Hamouda T, Chepurnov A, Mank N, Knowlton J, Chepurnova T, Myc A, et al. Efficacy, immunogenicity and stability of a novel intranasal nanoemulsion-adjuvanted influenza vaccine in a murine model. Hum Vaccin. 2010; 6(7): 585–94.Ren ST, Zhang XM, Sun PF, Sun LJ, Guo X, Tian T, et al. Intranasal immunization using mannatide as a novel adjuvant for an inactivated influenza vaccine and its adjuvant effect compared with MF59. PLoS One 2017; 12(1): e0169501.Ren ST, Zhang XM, Sun PF, Sun LJ, Guo X, Tian T, et al. Intranasal immunization using mannatide as a novel adjuvant for an inactivated influenza vaccine and its adjuvant effect compared with MF59. PLoS One 2017; 12(1): e0169501.Quan FS, Compans RW, Kang SM. Oral vaccination with inactivated influenza vaccine induces cross-protective immunity. Vaccine 2012; 30(2): 180-8.Quan FS, Compans RW, Kang SM. Oral vaccination with inactivated influenza vaccine induces cross-protective immunity. Vaccine 2012; 30(2): 180–8.Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа. Методические указания. МУ 3.3.2.1758 - 03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 28.09.2003).Methods for quality control indicators of immunobiological medical drugs for influenza prophylaxis and diagnostics. Guidelines. ÌÓ 3.3.2.1758 – 03 (approved by Chief State Sanitary Physician of the Russian Federation) (in Russian).WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance. World Health Organization, 2004. Available from: https://goo.gl/ k1qjv7.World Health Organization (2004) WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance. Available from: https://goo.gl/k1qjv7.Синуфорте®, «Фарма Медитерраниа СЛ»., Испания, ЛС-000026, Государственный реестр лекарственных средств Российской Федерации. Available from: https://goo.gl/97qYZo.Sinuforte®, Farma Mediterrania, S. L., Spain, LS-000026, Russian National register of medical drugs. Available from: https://goo.gl/ 97qYZo (in Russian).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.